利用T7和PR双启动子的新型表达载体的构建及其应用

构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达，降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法采用ｐＢＶ２２０与ＰＥＴ－３表达载体作为原始材料，将ＰＥＴ－３上包括Ｔ７启动子与Ｔ７ｇ－１０释译起始序列的一段序列克隆到     

HIV—1整合酶蛋白（p31）的表达,纯化及其在血清学诊断中的应用

在大肠杆菌中，利用ｐＥＴ－３ｃ表达载体，高效表达了具有全长序列的ＨＩＶ－１整合酶蛋白（ｐ３１）表达产物主要以包涵体的形式存在，用１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ溶解包涵体可部分地溶解ｐ５３蛋白，溶解上清中ｐ３１蛋白具有很高的纯度，本文进一步描述了 种在变性条件下重组蛋白的纯化方法，即将包涵体用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解，先后经过Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ与Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ－３００柱层析，可将重组产物纯     

利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究

目的：研制ＨＩＶ－１整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩＮ）的重组噬菌体单链抗体。方法：采用噬菌体表面呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了库容为３．５×１０５的表达文库。利用包被在酶联板上的ＩＮ蛋白进行四轮亲和富集，筛选出７６株具有ＩＮ结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了ＤＮＡ序列分析，证明其符合小鼠抗体序列。结论：获得了抗ＨＩＶ－１ＩＮ的噬菌体单链抗体，为其进一步研究打下基础。     

HIV—1多表位膜蛋白在E.coli中的表达及在血清检测中的应用

目的：获得具有较多保守抗原表位的ＨＩＶ－１膜重组抗原，提高ＨＩＶ筛选ＥＬＩＳＡ试剂的质量。方法：利用分子克隆与ＰＣＲ方法，获得了新的ＨＩＶ－１膜重组抗原的基因克隆，编码ｇｐ１２０Ｃ端亲水区３７个氨基酸残基（ｅｎｖ４８２～５１８）以及ｇｐ４１膜外部分的１２８个氨基酸残基（ｅｎｖ５４８～６７５）。将该基因克隆到ｐＧＥＭＥＸ－１载体上融合表达，表达蛋白经纯化后，以１μｇ／ｍｌ的浓度包被ＥＬＩＳＡ板，用来     

利用6× His/ Ni-NTA 表达纯化系统一步纯化乙型肝炎前S抗原

目的：利用 ６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统表达并纯化带有 ６ 个 Ｈｉｓ 纯化标签的乙型肝炎前 Ｓ抗原。方法：利用 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ 亲和层析,比较了 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白分别在非变性和变性条件下的各种纯化条件和产率,并用三种方式对 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白进行了复性。结果： Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白均存在于 ２５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ 咪唑洗脱峰中。从 １ Ｌ 诱导菌体中可以分别纯化 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白 １０～１５ ｍ ｇ,纯度达到电泳纯。三种复性方式中,在 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 柱上复性 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白的复性率达 ６０．５％ 。结论：６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统不仅可以使外源蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,而且可以通过简单的纯化步骤得到较高纯度的目的蛋白。该表达纯化系统为利用大肠杆菌制备重组蛋白提供了一种简便可行的方法。     

乙型肝炎病毒preS1多肽在大肠杆菌中的表达与纯？…

获得大量完整的重组乙肝病毒多（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ１多肽纯品，以利ｐｒｅＳ１功能与免疫学性质的研究。方法比较不同表达载体及不同的培养，诱导和纯化条件，最大限度地使表达产物免受大肠杆菌蛋白酶的降解。结论缩短诱导时间、用一步法在变性条件下纯化表达产物可获得无明显降解的ｐｒｅＳ１完整蛋白。     

乙型肝炎病人血清中PreS1／2抗原检测方法的建立及初步应用

目的：建立乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）ＰｒｅＳ抗原检测方法。方法：表达与纯化了ＨＢＶＰｒｅＳ１／２抗原，并用纯化蛋白免疫家兔，利用纯化抗血清包被ＥＬＩＳＡ板，吸附病人血清中包含ＰｒｅＳ１／２抗原的ＨＢＶ的病毒颗粒或病毒亚单位，特异吸附颗粒用抗ＨＢｓＡｇ的酶标单抗检测。结果：利用金属螯合柱层析的方法高度纯化了ＰｒｅＳ重组抗原，用复性的重组抗原免疫家兔３次，血清抗体滴度可达１     

染色体畸变分析用于非均匀与局部照射剂量估计的研究进展

针对ＩＡＥＡＴＲＳ－２６０报告推荐的不纯泊松分布方法与Ｑｄｒ方法的适用性，用染色体畸变分析方法进行了离体模拟实验研究，但在活体情况下的适用性尚需进一步验证。     

与ColE1相容的高效表达载体的构建及用于HIV-1蛋白酶在大肠杆菌的表达

描述了两套与ＣｏｌＥ１相容的Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体的构建过程。表达载体的复制起点来源于ｐＡＣＹＣ１７７，用此表达的蛋白可以方便地与通常使用的ＣｏｌＥ１来源的表达载体表达的蛋白共表达。这些载体带有Ｋｍ筛选标记，利用Ｔ７噬菌体的ｇ１０的先导序列增强翻译起始。已用于有活性的重组ＨＩＶ－１蛋白酶在Ｅ．ｃｏｌｉ胞质中的高效表达。重组蛋白酶与天然蛋白酶序列一致，且具有离体与在体的切割活性。从中可以纯化出大量的ＨＩＶ－１蛋白酶，满足生化分析以及抑制剂筛选的需求     

重组HIV—1 Gag／Env融合抗原在大肠杆菌中的 …

在大肠杆菌中,利用ｐＤＯＧ载体来源的表达载体ｐＤＧａｇＥｎｖ,高效表达了相对分子质量（Ｍｒ）为４６５００（ｐ４６）的重组ＨＩＶ－１Ｇａｇ／Ｅｎｖ融合抗原（Ｇａｇ２０９￣４３７＋Ｅｎｖ４７４￣５１８＋Ｅｎｖ５４８￣６７５）。表达产物同时还包括：Ｍｒ￣２８５００,Ｍｒ￣２２０００与Ｍｒ￣１９０００３种（ｐ２８,ｐ２２和ｐ１９）蛋白。此４种表达产物均存在于包涵体中,不能被８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解。Ｗｅｓｔｅ