CpG ODNs的研究进展及其抗肿瘤作用

CpG ODNs是一以非甲基化CpG为核心的碱基序列 ,可以激活机体免疫系统.基于它的免疫刺激活性,CpG ODNs的应用研究已越来越引起研究者的关注.目前主要集中在以下几个方面:诱导天然保护性免疫,预防感染;用于肿瘤治疗 ;作为疫苗佐剂的应用;用于过敏性疾病的免疫治疗;用于基因治疗.本文主要对其用于肿瘤方面的研究进行综述.     

CpG对X线放射治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应

目的: 探讨含胞嘧啶磷酸盐鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸（cytosinephosphateguanine oligodeoxynucleotide，CpG ODN）对X线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的放疗增敏作用。方法: 在小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞，制备荷瘤小鼠模型，将32只荷瘤小鼠随机分为4组：对照组，无任何处理； X线照射组，3 Gy/次，第1、3、5、8、10、12天照射，总剂量18 Gy； CpG组，第1、3、5、8、10、12天注射，每次腹腔注射CpG ODN 0.05 mg；D组：CpG+X 线照射组,每次X线照射前6 h腹腔注射CpG ODN。观察各组移植瘤生长速度和各治疗组移植瘤生长延迟时间，HE染色法观察移植瘤组织病理变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果: 成功建立荷Lewis肺癌小鼠模型，经治疗后各组小鼠移植瘤体积都较对照组明显减小（P<0.01），CpG+X线照射组移植瘤体积最小；X线照射组移植瘤的生长延迟时间为2.1 d，CpG组为2.3 d，CpG+X线照射组为4.8 d，CpG ODN的放射增敏比为2.09。HE染色病理观察到各治疗组都较对照组移植瘤坏死明显，CpG+X线照射组最显著。TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为（2.75±0.89）%，X线照射组为（4.87±1.13）%，CpG组为（7.63±1.41）%，CpG+X线照射组为（32.63±4.66）%；各治疗组都明显高于对照组，CpG+X线照射组显著高于X线放射组和CpG组(P<0.01)。结论: CpG ODN能明显提高Lewis肺癌移植瘤对X线的放射敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05);增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05);明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平;小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.     

初治鼻咽癌患者的治疗分析:附130例报告

目的:探讨初治鼻咽癌患者的治疗方法、疗效及晚期损伤。方法:选择2006年1月—2011年1月收治的130例首程放疗鼻咽癌患者,其中122例患者接受化疗,生存预后的单因素分析采用Kaplan-Meier法,并行Log-rank检验,采用Cox比例风险模型进行多因素分析,采用美国肿瘤放射治疗协作组织(Radiation Therapy Oncology Group,RTOG)/欧洲癌症治疗研究组织(European Organization for Research on Treatment of Cancer,EORTC)标准评价晚期损伤。结果:初治鼻咽癌患者的中位随访时间为56个月,5年总生存率、局部区域无复发生存率、无瘤生存率分别为64.8%、74.3%、58.2%。单因素分析结果表明,同期化疗是影响鼻咽癌患者5年总生存率、局部区域无复发生存率和无瘤生存率的有利因素。多因素分析结果表明,同期化疗是鼻咽癌患者局部区域无复发生存率和无瘤生存率的独立影响因素。130例患者均有不同程度口干,听力明显下降15例,放射性脑病2例,张口困难5例。结论:同期化疗有助于提高初治鼻咽癌患者的放疗后局部区域无复发生存率和无瘤生存率。     

CpG-ODN7909与X射线辐射对人肺腺癌A549细胞的协同治疗作用

放疗是恶性肿瘤的重要治疗措施之一,但肿瘤细胞自身对放射线的抗拒性往往导致放疗失败,寻找行之有效的放射增敏剂是多年来肿瘤研究领域倍受关注的热点.含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤的寡聚核苷酸序列(CpG-oligodeoxynucleotidea,CpG-0DN),能被脊椎动物的树突状(DC)细胞和B淋巴细胞内Toll样受体9(toll like receptor 9,TLR9)识别,通过下游的信号级联反应,产生多种细胞因子,激活机体的免疫系统[1].     

siRNA沉默ATM增强CpG ODN 7909对肺癌A549细胞的放射增敏作用

目的： 研究siRNA沉默毛细血管扩张—共济失调突变（atxia-telangiectasia mutated,ATM）基因的表达增强胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(cytosine-phophate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 7909对人非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏作用。 方法: 将ATM-siRNA转染至A549细胞中,Western blotting检测A549细胞中ATM蛋白的表达。A549细胞随机分为6组：对照组、CpG组、X射线（IR）组、CpG+IR组、ATM-siRNA+CpG+IR组和NC-siRNA+CpG+IR组,克隆形成分析法检测各组细胞克隆形成率,Graphpad prism 5.0软件进行单击多靶模型和L-Q 线性模型拟合辐射后A549细胞的生存曲线,以D0、Dq、N、α/β及SF2等参数分析A549细胞辐射损伤修复能力,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。 结果: ATM-siRNA转染可明显抑制A549细胞中ATM蛋白的表达（P<0.01）。X射线可剂量依赖性抑制A549细胞的克隆形成能力（P<0.05）;且CpG+IR组A549细胞的克隆形成能力进一步降低（P<0.01）;ATM-siRNA转染后,CpG处理的A549细胞克隆形成能力再度降低\[10 Gy时,（0.05±0.00）% vs （0.71±000）%,P<0.01\]。辐射损伤剂量生存曲线结果显示,ATM-siRNA转染后,ATM-siRNA+CpG+IR组较CpG+IR组A549细胞的α/β值明显增大（1.48 vs 0.97,P<0.05）,对放射损伤修复能力明显减弱。CpG+IR组较IR组细胞凋亡率显著升高\[（9.18±0.16）% vs （6.56±0.33）%,P<0.01\]; ATM-siRNA+CpG+IR组A549细胞凋亡率进一步升高\[（10.45±0.40）% vs （9.18±0.16）%,P<0.05\]。 结论： siRNA 沉默ATM 的表达可增强CpG ODN 7909对A549细胞的放射增敏作用,ATM可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

抗菌药物不合理使用情况分析与对策

目的调查、分析抗菌药物不合理使用情况并制定相应的对策加以预防。方法随机抽取笔者所在医院2010年门诊各科处方2000张,进行调查分析。结果 2000张门诊处方中使用抗菌处方1123张,门诊抗菌药物使用率为56.15%,抗菌药物使用三高一低问题十分突出,其中抗菌药物使用不合理300张,占比26.71%。结论临床抗菌素用药不合理率偏高,应引起重视。     

海捷亚治疗老年原发性高血压疗效观察

目的探讨海捷亚治疗老年性原发性高血压的临床疗效。方法将80例老年原发性高血压患者被随机分为观察组（海捷亚组）和对照组（苯那普利组）,每组各40例。在治疗前和治疗后2、4、6、8周末记录血压、心率及不良反应情况。结果通过8周的治疗后,2组血压均明显下降,观察组总有效率为95%,对照组为72.5%。海捷亚组比苯那普利组降压效果更好,2组比较差异有非常显著性（P〈0.01）。结论海捷亚治疗老年原发性高血压能有效平稳降压,临床效果良好。     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对Lewis肺癌放疗联合作用及其剂量-效应关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 1826对X射线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的联合作用及其剂量-效应关系.方法 在C57BL/6J纯系小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型.将64只荷瘤小鼠按完全随机化方法随机分为对照组、X射线照射(IR)组、低剂量CpG ODN1826组(0.15 mg)、中剂量CpG ODN1826组(0.30 rag)、高剂量CpG ODN1826组(0.45 mg)、低剂量CpG ODN826+ IR组(CPG1826 0.15 mg+ IR)、中剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.30 mg+ IR)和高剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.45 mg+ IR),每组8只.实验的第1、2、9天注射CpG ODN1826.实验的第2天开始X射线照射,1次/d,2.50 Gy/次,总剂量12.50 Gy.观察各组移植瘤生长速度和各治疗组肿瘤生长延迟时间(TGD),用DNA断裂的原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 成功建立荷瘤小鼠Lewis肺癌模型,成瘤率为100％.经治疗后,各组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小,CpG ODN1826 0.45 mg+ IR组移植瘤体积最小.DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率分别为(2.40±0.55)％、(5.50±0.76)％、(7.13±0.83)％、(11.63±1.06)％、(19.13±0.83)％、(12.88±0.83)％、(20.57±2.37)％和(28.17±3.31)％.各治疗组都明显高于对照组(t=11.15、7.91、17.82、39.48、24.73、16.61和17.05,P＜0.05),不同剂量CpG ODN1826 +IR组显著高于IR组(t=13.78、15.08和17.47,P ＜0.05)和不同剂量CpG ODN1826组(t=18.53、9.66和7.51,P ＜0.05).结论 CpG ODN1826能明显地抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系.     

ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路研究进展

 毛细血管扩张共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated gene, ATM基因)变异导致遗传性毛细血管扩张共济失调症(ataxia telangiectasia,A T)。ATM基因编码产物——ATM蛋白激酶主要分布于增殖细胞核中。根据ATM蛋白激酶在细胞周期中作用底物如检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)、奈梅亨断裂综合症蛋白1(Nijmegen breakage syndrome protein 1,Nbs1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)等不同,形成了不同的ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路。最近研究发现,ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路参与细胞周期多个检测点的调控,在DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)损伤修复过程中发挥着至关重要的作用,暗示了ATM蛋白激酶或将成为恶性肿瘤放射治疗增敏新靶点。