一种新的抗辐射性相关蛋白AAl2和CHKl相互作用研究

目的：研究AAl2蛋白与CHKl蛋白的相互作用。方法：用在大肠杆菌中表达纯化的AAl2(LG21)蛋白制备多克隆抗体，Western印迹检测抗体的特异性；用自制的抗体在A1-5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验；同时将AAl2与Chkl基因克隆入酵母双杂交载体中，将重组质粒导入酵母菌AH109中，检测报告基因的表达情况。结果：Western印迹结果表明该抗体可以与AAl2蛋白特异结合；并用免疫共沉淀实验验证了从12蛋白与CHKl蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用。同时用酵母双杂交实验验证了AAl2蛋白与CHKl蛋白在酵母体内的相互作用，β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性。结论：AAl2蛋白和CHKI蛋白之间存在相互作用，此结果为进一步研究新基因AAl2的功能奠定了基础。     

抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选

目的: 获得前列腺癌的噬菌体呈现型单链抗体库,筛选与前列腺癌特异结合的抗体,为前列腺癌的诊断和治疗奠定基础. 方法: 用两种恶性程度较高的前列腺癌细胞PC3,DU145膜蛋白混合物免疫Balb/c小鼠.取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL), 经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TG1.用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体.以恶性程度低的前列腺癌细胞LNCap为对照,用PC3细胞对重组噬菌体抗体库进行五轮筛选后,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合PC3细胞的ScFv.结果: 用所构建的库容量为3.5×106的单链抗体库筛选特异结合抗体,得到一个与PC3细胞特异结合的噬菌体-单链抗体.结论: 本研究所构建的抗体库中可筛选到与前列腺癌细胞结合特异性较好的抗体,可用于前列腺癌的诊断和治疗中.     

人尿激酶原全长cDNA基因的克隆

人尿激酶原(pro-UK,又称单链尿激酶)由于具有较好的选择性溶血栓作用而又不引起全身系统性出血,近年来受到国内外学者重视。但自尿中提取含量极少,较有希望的途径是通过基因工程手段来制备,pro-UK含411个氨基酸加上20个氨基酸的信号肽,全长基因编码序列为1293bp。要获得这样较大的cDNA基因有一定难度。国外虽已有几家公司报道他们克隆了pro-UK cDNA基因,但国内尚无报道。1988年我     

巫山淫羊藿保护抚育种植试验初报

<正>淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物,多年生草本,始载于《神农本草经》,列为中品,已有2 000多年的用药历史。巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying是《中国药典》(2005,一部)淫羊藿项下所载品种。贵州雷山是巫山淫羊藿在贵州的主产区,其产巫山淫羊藿品质较优,深受各地药商的青睐。为     

人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探

目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱（camptothecin,CPT）处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。     

单链抗体在基因治疗方面的应用

单链抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）即众所周知的单链可变区片段（Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ｖａｒｉ－ａｂｌｅ ｆｒａｇｍ ｅｎｔｓ，ｏｒ ｓＦｖ）是将抗体重链可变区和轻链可变区以一个弹性连接肽连接成为一个单个的多肽，它们能较好地保持原代抗体的亲合性和特异性，是一种新的基因治疗的手段。本文对使用单链抗体治疗癌症以及控制传染病的一些新的研究进展作一综述，并对这一技术的进一步应用进行了讨论。     

肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性

目的：检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性，探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性。方法：将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白（EGFP）基因及带有硫氧还原蛋白（Trx）基因的原核表达载体pET-28a（＋）／EGFP及pTIG—Trx中，在大肠杆菌中进行表达，并经镍柱（Ni—NTA）纯化。建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白，通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号，考察该单链抗体的靶向性；同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白，观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性。结果：在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段，并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达，经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带。靶向性实验结果显示，单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集，而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少，并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号。抑瘤性实验发现，单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似。结论：从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性，而对肿瘤生长的抑制作用不明显，为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。     

一种新的抗辐射性相关蛋白AA12和CHK1相互作用研究

目的研究AA12蛋白与CHK1蛋白的相互作用.方法用在大肠杆菌中表达纯化的AA12(LG21)蛋白制备多克隆抗体,Western印迹检测抗体的特异性;用自制的抗体在A1-5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验;同时将AA12与Chk1基因克隆入酵母双杂交载体中,将重组质粒导入酵母菌AH109中,检测报告基因的表达情况.结果Western印迹结果表明该抗体可以与AA12蛋白特异结合;并用免疫共沉淀实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用.同时用酵母双杂交实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在酵母体内的相互作用,β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性.结论AA12蛋白和CHK1蛋白之间存在相互作用,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础.     

贵州省雷山县巫山淫羊藿资源及群落调查

<正>淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物,多年生草本,始载于《神农本草经》,列为中品,已有2000多年的用药历史。巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying是《中国药典》(2005年版)所载品种,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效,用于阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛、麻木拘挛等症。贵州雷山是巫山淫羊藿的主产区,其产巫山淫羊藿品质较优。     

人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达

人血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＶＥＧＦ)是一种主要作用于血管内皮细胞的生长因子 ,具有促进血管内皮细胞增殖、诱导血管生成和增加血管通透性等多种功能[1] 。ＶＥＧＦ在正常的胚胎发育和病理的肿瘤发生等过程中都具有十分重要的作用 ,在临床上具有较好的应用前景。我们在大肠杆菌中高效表达了ＶＥＧＦ ,并通过纯化、复性 ,获得了具有生物活性的重组人血管内皮生长因子。1　材料与方法1.1　质粒与菌株ｐＥＴ2 8ａ购自Ｎｏｖａｇｅｎ公司 ,Ｅ .ｃｏｌｉＤＨ5α、ＢＬ2 1(ＤＥ3)为…