肺炎克雷伯菌突变株ΔrcsB的构建及其菌株超粘性与生物膜表型

目的 构建肺炎克雷伯菌rcsB基因缺失的无痕突变株和回补株,通过对突变株的超粘性和生物膜表型进行分析,探讨转录调控子RcsB对细菌超粘性和生物膜形成能力的影响.方法 首先构建突变株ΔrcsB,PCR扩增rcsB基因上下游同源臂片段,克隆到质粒pKO3-Km上,将重组质粒导入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,经同源重组后筛选得到无痕突变株.然后构建回补株,扩增rcsB基因片段,克隆到质粒pBAD33上,将重组质粒导入突变株ΔrcsB中,得到回补株.测定野生株、突变株、回补株的超粘性和生物膜形成能力.结果 成功构建rcsB基因缺失的无痕突变株ΔrcsB和回补株C-ΔrcsB.与野生株相比,突变株超粘性和生物膜形成能力均减弱,回补株介于野生株和突变株之间.结论 转录调控子RcsB对肺炎克雷伯菌超粘性和生物膜形成具有正向调控作用.     

肝肾移植患者西罗莫司血药浓度在电化学发光分析平台的分析性能评价

目的 评估肝、肾移植患者全血西罗莫司药物浓度在罗氏cobas e411检测平台上的分析性能。方法 选取2022-01至2022-10来解放军总医院第三医学中心就诊的100例器官移植患者作为研究对象,其中实施肝移植者和肾移植者分别为47例和53例。在罗氏cobas e411检测平台上评价西罗莫司的分析性能,包括批内精密度、批间精密度和正确度。同时,利用临床肝、肾移植者全血标本,评价西罗莫司在罗氏cobas e411和雅培ARCHITECT i1000sr平台上的可比性,并做相关性分析。结果 三水平质控物的批内精密度分别为1.45%、1.25%和1.09%,批间精密度分别为4.18%、2.08%和2.36%,均低于厂家声称的精密度要求。正确度样本浓度水平从5 ng/ml至30 ng/ml均处于允许范围之内。100例器官移植者西罗莫司血药浓度在罗氏cobas e411和雅培ARCHITECT i1000sr两分析系统上的结果呈显著正相关,相关系数(R²)为0.9072。随后,分别在肝移植和肾移植患者中,两分析系统间西罗莫司结果也呈正相关,R²分别为...     

中国大陆地区新生儿院内感染病原体分布的系统评价

目的：采用循证分析的方法系统评价我国大陆地区新生儿院内感染病原体分布情况,为临床控制新生儿医院感染提供更好的科学依据。方法全面系统检索中国知网（CNKI）、中国生物医学文献服务系统（CBM ）、维普（VIP）、万方数据库（WanFang）及PubMed。对文献进行筛选,使用Excel软件提取数据,运用Comprehensive Meta Analysis软件进行率的合并计算,根据异质性检验结果选择合适模型。结果研究共纳入68篇合格文献,新生儿院内感染最常见病原体为葡萄球菌属[32％（95％C I：27％～37％）]、沙门菌属[32％（95％ C I：0％～68％）]。亚组分析显示：三级和二级及以下等级医院新生儿院内感染最常见病原体均为葡萄球菌;专科医院最常见病原体为葡萄球菌属,综合性医院最常见病原体为沙门菌属;东部地区医院最常见病原体为沙门菌属,中部和西部地区医院最常见病原体均为葡萄球菌属;1985～1999年最常见病原体为葡萄球菌属,2000～2012年最常见病原体为病毒。结论新生儿院内感染最常见病原体为葡萄球菌属。     

诱发哮喘发作的环境因素分析

哮喘是一种反复发作性的疾病,主要症状是喘鸣、气急、胸闷和咳嗽.2003年版的CAN估计全球约有3亿人患病[1].多在夜间或清晨发作.诱发哮喘的因素很多,其中包括环境因素、还有自身因素等,另外遗传、心理、生理因素也是诱发哮喘的因素.随着医学的发展,人们对哮喘的本质有了更清楚的认识,环境因素的控制不可忽视.     

反相高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量

目的建立一种简单流动相洗脱的反相高效液相色谱法快速测定饮料中咖啡因含量。方法以甲醇-水-乙酸为流动相,对饮料进行简单的过滤处理后直接进样测定。结果标准曲线的回归方程为y=52.54635x+47.46411,相关系数r=0.99996;测定咖啡因保留时间的标准偏差为0.087 min,RSD为1.41%;浓度的标准偏差为2.22 mg/L,RSD为1.98%;测定结果的总体回收率在97.5%~98.1%之间;加标回收率在92.2%~95.9%之间。结论采用本法测定饮料中的咖啡因含量,具有结果准确、样品处理方法简便、流动相组成简单等优点,适合饮料中咖啡因的测定。     

肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究

目的：利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白（cAMP receptor protein,CRP）对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法：设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUH-K2044（wild type,WT）的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株?驻crp（肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除）和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取?驻crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用 DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果：肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上（转录起始位点为+1）,抑制其转录表达。结论：CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。     

离子色谱法测定铁强化酱油中NaFeEDTA的含量

目的建立离子色谱测定铁强化酱油中铁营养强化剂乙二胺四乙酸铁钠（NaFeEDTA）的方法。方法以4.5 mmol/L的Na2CO3溶液为淋洗液,醇沉净化样品,碱性条件下高速离心后测定。结果采用本法,标准曲线的相关系数在0.999以上,并可以采取单点校正或标准加入法;按吸取2.5 ml样品进行测定,方法检出限为40 mg/100ml;加标回收率在93.6%～96.4%之间,RSD为1.12%,共存的高浓度Cl^-和氨基酸以及其他一些常见的NO2^-、NO3^-、Mn^2＋、Zn^2＋等无机离子和乙酸等均不干扰测定。结论与国家标准方法和文献报道的检测方法相比,本法操作便捷,测定速度较快,利大于弊,较适于在基层检测部门推广。     

某三级甲等医院肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因分析

目的:分析某三级甲等医院连续4年肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因分布,了解耐药性变化趋势,指导临床合理用药。方法:使用VITEK-32全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,用纸片法和最低抑菌浓度(MIC)试验进行药敏分析,用聚合酶链式反应(PCR)对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株可能携带的主要β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果:在182株临床分离的肺炎克雷伯菌中,痰和咽拭子标本分离率占首位(78.6%);对检测的13种抗菌药物耐药谱分析显示,该菌对哌拉西林耐药率最高,对亚胺培南和美罗培南敏感;产ESBLs菌株的检出率约30%;51%以上的产ESBLs菌株携带至少1种所检测的耐药基因,以blaTEM为主。结论:该院肺炎克雷伯菌分离株耐药范围广、产ESBLs菌检出率高,应引起重视。     

中国综合性医院院内感染病原菌分布的Meta分析

目的系统评价中国综合性医院院内感染病原菌分布的变化趋势。方法计算机检索中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库及万方数据知识服务平台,检索时间为建库至2013年3月,收集有关医院感染调查和研究的相关文献,由2名独立的研究者严格按照纳入和排除标准筛选文献、提取相关数据并采用Comprehensive Meta分析软件进行率的合并分析,将医院感染病原菌按照调查年份、医院等级、医院所在地区进行分层分析,根据异质性检验结果对医院院内感染不同病原菌分布率加权合并。结果共纳入345篇文献。合并结果显示：(1)1987-2000年真菌检出率为18.6%(95%CI：13.7%～24.9%)、葡萄球菌属为18.1%(95%CI：15.4%～21.0%)、假单胞菌属为14.8%(95%CI：12.2%～17.9%)、克雷伯菌属为5.2%(95%CI：4.1%-6.6%);2001-2012年真菌检出率为17.6%(95%CI：16.4%～18.8%)、葡萄球菌属为15.0%(95%CI：14.2%。15.8%)、假单胞菌属为13.9％(95%CI：13.1%。14.7%)、克雷伯菌属为10.4%(95%CI：9.9%～11.0%)。(2)在二级及以下医院支原体检出率为3.2%(95%CI：o.3%～29.9%)、志贺菌属为4.7%(95%CI：3.4%～6.3%)、产碱杆菌属为7.2%(95%CI：1.7%～26.1%);三级医院支原体检出率为1.1%(95%CI：0.1%。15.4％)、志贺菌属为1.8%(95%CI：0.6%～5.1%)、产碱杆菌属为4.3%(95%C1：2.3%-8.0%)。(3)支原体检出率在长江流域经济区为14.3%(95%CI：2.0%～58.1%)、西南经济区为0.3%(95%CI：0.1%-1.1%);棒状杆菌属检出率在长江流域经济区为0.4%(95%C1：0.1%～1.4%)、东南经济区为9.5%(95%CI：2.4%～31.1%);嗜血杆菌属检出率在北方经济区为0.5%(95%CI：0.2%～0.9%)、东南经济区为9.2%(95%CI：7.3%～11.6%);沙门菌属检出率在长江流域经济区为6.3%(95%CI：4.6%～8.6%)、东南经济区为0.4%(95%CI：0.1%～3.0%)。结论中国综合性医院院内感染最常见病原菌为真菌、葡萄球菌属、假单胞菌属;近年来克雷伯菌属检出率明显增多并成为最常见病原菌之一;在不同等级、不同地区医院院内感染病原菌分布率差异明显。     

应用水分测定仪直接测定鲜牛乳的全乳固体

目的探讨水分测定仪(直接)法测定鲜牛乳中全乳固体新方法与经典测定方法相比的优点。方法本方法是采用水分测定仪直接测定鲜牛乳中全乳的固体。结果本法与经典测定方法之间的测定结果没有差异。结论水分测定仪法直接测定结果的精密度和不确定度都要优于国家标准方法。