99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

目的 制备新型的靶向长链非编码RNA（lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA（HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针99Tcm-HYNIC-ASON（HYNIC为联肼尼克酰胺）,探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法 设计并通过化学修饰合成HOTAIR的ASON,使用双功能螯合剂HYNIC偶联99Tcm并进行纯化。采用快速薄层层析(ITLC)法和琼脂糖凝胶电泳分别检测探针的标记率、放射化学纯度、体外稳定性及完整性。细胞摄取实验分为2组:Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON组（转染组）和99Tcm-HYNIC-ASON组（未转染组）,通过脂质体转染探针,测定人脑胶质瘤U87细胞对探针的摄取率;细胞计数试剂盒8（CCK-8）实验和细胞划痕实验分为3组:Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON组（转染组）、99Tcm-HYNIC-ASON组（未转染组）、99Tcm-Control组（对照组）,分别检测转染探针后细胞增殖和迁移能力的变化。2组间比较采用Student t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果 99Tcm-HYNIC-ASON的标记率为（90.0±5.6）%。琼脂糖凝胶电泳结果显示,99Tcm与探针成功标记并且没有明显的降解,探针孵育12 h的放射化学纯度>80%。细胞摄取实验结果显示,转染后5 h,探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON在人脑胶质瘤U87细胞中的摄取率最大（0.70%）,与未转染组（0.16%）相比,差异有统计学意义（t=17.81,P<0.01）。CCK-8实验结果显示,转染探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖能力,与未转染组相比,在各个时间点（1、2、3、4、5 d）的差异均有统计学意义（t=2.336~30.230, 均P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,转染探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的迁移,3组细胞间隙融合率的差异有统计学意义(F=331.8,P<0.01),与未转染组相比,转染组细胞间隙融合率明显降低,且差异有统计学意义（60.0%对23.6%, t=51.54,P<0.01）。 结论 成功合成了靶向人脑胶质瘤lncRNA HOTAIR的探针99Tcm-HYNIC-ASON,该探针具有良好的体外稳定性和靶向结合能力,能够抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖和迁移。