乏氧诱导的A549细胞外泌体特征及其对放射抗拒性的影响

目的 收集乏氧和常氧条件下人肺腺癌A549细胞产生的外泌体,观察常氧下A549细胞与外泌体共培养后对X射线敏感性及侵袭性的变化。方法 分别在乏氧（1% O₂）和常氧条件下（21% O₂）培养A549细胞,超高速离心法收集在细胞分泌的常氧外泌体（N-EXO）和乏氧外泌体（H-EXO）。NanoSight检测外泌体数量,扫描电镜观察外泌体的外观和大小。蛋白印迹检测外泌体蛋白CD63。CCK8检测细胞对X射线的耐受性。荧光显微镜观察A549细胞对PKH67标记的外泌体的摄取。细胞划痕实验和Transwell实验观察加入不同的外泌体后细胞侵袭和侵袭性变化,ELISA方法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。细胞克隆形成实验观察二种外泌体对细胞放射抵抗性的改变。结果 每ml细胞培养液中H-EXO的数量增多。H-EXO和N-EXO均呈现出典型的环饼状,H-EXO直径变小,粒径分布在30~200 nm,小于N-EXO的粒径（50~220 nm）。H-EXO和N-EXO的CD63表达无明显差别。乏氧条件培养的A549细胞接受2 Gy X射线后,细胞的增殖水平在4和6 d时远高于常氧条件下的细胞。PKH67绿色荧光标记的外泌体分布在细胞内部。12、24、48 h后,H-EXO组细胞划痕宽度远小于N-EXO组（t=2.96、6.76、3.35,P<0.05）。H-EXO组细胞穿膜细数量大于N-EXO组和对照组（t=4.84、7.88,P<0.01）。H-EXO组上清液中MMP2（t=4.70、3.21,P<0.05）和MMP9（t=5.61、3.76,P<0.05）表达水平较对照组和N-EXO组均明显增高。对照组、N-EXO和H-EXO的D₀值分别为2.614、2.552、4.850。H-EXO较N-EXO可以明显增强A549细胞的放射抵抗性。结论 乏氧条件下,A549细胞释放的外泌体数量增多、粒径变小,乏氧外泌体可以促进常氧细胞的侵袭性,并且能够增强细胞对X射线的耐受性。     

miR-21与舌鳞癌SCC9细胞干细胞样特性及顺铂敏感性的实验研究

目的 观察舌鳞癌SCC9细胞干细胞样特性、顺铂敏感性以及miR-21表达对其影响。方法 选取人舌鳞癌SCC9细胞分别通过贴壁、悬浮培养法培养获得SCC9a和SCC9f细胞;体外转染法将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor分别转染至SCC9f细胞,设为SCC9m和SCC9i细胞。实时荧光定量PCR（QPCR）法检测干细胞相关转录因子（Oct3／4、Sox2、Nanog）及miR-21表达水平,ALDEFLOR kit检测ALDH阳性细胞的比例。MTT法、Annexin V／PI双染法分别检测顺铂对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。结果 SCC9f细胞中Oct3／4、Sox2和Nanog表达以及ALDH阳性比例高于SCC9a细胞（P＜0.05）。顺铂对SCC9f细胞的增殖抑制率、凋亡率均低于SCC9a细胞。miR-21表达在SCC9f细胞中高于SCC9a细胞（P＜0.05）,而在SCC9m、SCC9i细胞中表达分别较SCC9f细胞明显升高与降低（均P＜0.05）。Oct3／4、Sox2和Nanog在SCC9m细胞中表达高于SCC9f细胞,其中Oct3／4上调差异具有统计学意义（P＜0.001）;而Oct3／4、Sox2和Nanog在SCC9i细胞中表达均较SCC9f细胞呈显著下调（P＜0.05）。SCC9a、SCC9m和SCC9i细胞中ALDH阳性率分别与SCC9f细胞中ALDH阳性率比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SCC9m、SCC9i细胞的凋亡率分别较SCC9f减低与增高（均P＜0.05）。结论 舌鳞癌SCC9细胞采用悬浮培养法培养获得的SCC9f细胞具有干细胞特性,对顺铂更为耐受;抑制miR-21表达可增强SCC9细胞对顺铂的敏感性,可能与miR-21调节其肿瘤干细胞相关转录因子表达有关。     

小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧的影响

目的 观察小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧动态变化的影响,并探讨乏氧改变与其抗血管生成效应的关系.方法 建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将成瘤小鼠随机分成对照组(5%葡萄糖20ml/kg)和治疗组(奥沙利铂1.5mg/kg),分别隔日腹腔给药(设为d0、d2、d4、d6).于d1、d3、d5、d7、行(99m)...     

长春瑞滨联合奈达铂治疗耐药性晚期口腔颌面部肿瘤的临床观察

目的 探讨长春瑞滨联合奈达铂治疗顺铂耐药的晚期口腔颌面部肿瘤的疗效和安全性。方法 收集2012年8月至2015年7月一线接受以顺铂为基础的化疗失败的42例晚期口腔颌面部肿瘤患者,均给予长春瑞滨联合奈达铂方案化疗。长春瑞滨25 mg／m2静滴,d1、d8;奈达铂 80 mg／m2静滴,d1、d2, 21天为1个周期。采用RECIST 1.1版标准评价近期疗效,NCI CTC 4.0版标准评价不良反应。结果 42例患者均可评价近期疗效,有效率为45.2％,疾病控制率为73.8％,中位无进展生存时间为7个月（95％CI：6.06～7.94个月）,中位总生存时间为13个月（95％CI：10.91～15.09个月）。主要毒副反应为骨髓抑制、恶心呕吐,1～2级居多。结论 长春瑞滨联合奈达铂治疗顺铂耐药的晚期口腔颌面部肿瘤疗效较好,耐受性好,安全性高,值得进一步临床观察和研究。     

谢晶日教授治疗幽门螺杆菌相关性胃炎特色心悟

文章对谢晶日教授治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的经验进行了总结,并提出谢晶日教授以"湿热"为病因,治疗上提出化湿三法:芳香醒脾化湿法、益气健脾化湿法以及理气调脾化湿法,改善脾胃湿热环境。同时顺应脾胃升降特性,治疗时强调"通降"、"消导",以通利肠腑泄热法、化瘀解毒通络法、消食导滞开胃法,实现腑以通为用。谢晶日教授治疗此病思路清晰,提纲挈领,具有较好的临床疗效,文章选取其临床验案一例,以供参考。     

谢晶日教授从“气湿瘀”论治慢性胆囊炎经验举隅

慢性胆囊炎是临床上常见的消化系统炎症性疾病之一,其以胆囊结石或非胆囊结石引起的右上腹反复发作性胀痛不适为主要表现在传统中医学中并无明确对应的病名,可归属于中医学胆胀、胁痛范畴。现代中医学认为慢性胆囊炎病位在胆,与肝、脾(胃)等脏腑密切相关,是由于肝胆气滞、湿热雍阻导致肝脏失于疏泄、胆腑通降失常而引起。