猪卵泡闭锁过程中颗粒细胞凋亡现象的检测

目的　验证猪卵泡闭锁过程中是否存在细胞凋亡及其发生的范围。　方法　用透射电镜观察猪各类卵泡的超微结构 ,对颗粒细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳图谱分析 ,对颗粒细胞涂片进行了DNA末端原位标记(TUNEL)及HE染色检测。　结果　猪的闭锁卵泡中存在大量的凋亡颗粒细胞 ,而健康卵泡中凋亡颗粒细胞则很少 ;对颗粒细胞涂片进行DNA末端标记和常规HE染色检测所得到的颗粒细胞凋亡比例分别为 :健康卵泡TUNEL法为 9% ,HE法为 3 6 % ;闭锁卵泡TUNEL法为 39 2 % ,HE法为 34 % ,尽管两种方法检测的结果之间有差异 ,但两者之间的相关系数达到 0 94。　结论　猪卵泡闭锁过程中确实存在细胞凋亡现象 ,并且凋亡细胞主要集中于颗粒层 ;同时DNA末端标记和常规HE染色检测所得到的颗粒细胞凋亡比例结果说明在某些情况下可以采用简单易行的HE法替代TUNEL法进行细胞凋亡趋势判定     

小鼠裸半胚冷冻试验

本试验研究了以含0.2M蔗糖的1.4M甘油20％FCS-PBS液和0.2M蔗糖PBS液一步法冷冻小鼠裸半胚,于-7℃植冰,以0.45℃/分速度降至-25℃或-30℃浸入液氮;以0.5M蔗糖PBS液为稀释液玻璃化冷冻小鼠裸半胚的效果。结果以一步法冷冻-25℃、-30℃浸入液氮和玻璃化冷冻组半胚培养存活率分别为73.3％(22/30)、85.7％(24/28)和45.2％(14/31)。以一步冷冻-30℃浸入液氮组半胚存活率最佳,与鲜半胚的培养存活率100％(19/19)差异不显著(P>0.05)。     

利用显微注射生产转基因绵羊

利用显微注射生产转基因绵羊岳奎忠，赵波（黑龙江省畜牧研究所动物胚胎工程研究室）重组基因导入动物的技术是８０年代初发展起来的一门新技术。采用这种技术，将有益的基因注入动物原核胚的原核中，由此所产生的动物体每个细胞都含注入的外源基因。这种转基因动物的基因...     

猪卵巢卵母细胞体外成熟及体外受精过程中皮质颗粒变化的研究

目的　研究猪皮质颗粒在体外成熟及体外受精过程中的变化 ,以及皮质颗粒与多精受精的关系。　方法　用异硫氰荧光素联接的花生四烯酸 (FITC- PNA)标记体外成熟不同时间及体外受精不同时间皮质颗粒。　结果　皮质颗粒在猪卵母细胞体外成熟过程中逐渐由皮质部向卵质膜下迁移 ,并在质膜下排布成单层。体外成熟过程中所排出的第 1极体也被 FITC- PNA所标记 ,说明第 1极体中含有皮质颗粒。在对不同体外成熟时间的卵母细胞进行授精时发现 ,皮质颗粒的释放速度与体外成熟时间呈正比例关系。为进一步证实皮质颗粒的排放速度与多精受精之间的关系 ,还进行了精子穿透实验。结果显示 ,体外成熟 48h的卵母细胞其多精受精率为 73% ,比体外成熟36 h(83% )、2 4h(80 % )的卵母细胞要低。并且进入卵子的精子数目 (1.7)比后两者 (分别为 3.1和 2 .9)的少。　结论　多精受精率与皮质颗粒释放的速度和数量的大小有关     

奶牛胚胎移植引进技术的消化吸收总结报告(1986—1990)

1986—1990年利用FSH对136头黑白花奶牛进行超数排卵处理328次,有效率77.7％,采卵成功率91.4％,共获卵1791枚,其中可用胚胎1127枚,可用率为62.9％,平均每次采卵得可用胚4.84±4.66枚。 冷冻保存胚胎1015枚,解冻后胚胎可用率平均为84.6%。1990年将奶牛冷冻胚胎移植给黄牛和杂种牛205头,妊娠85头,妊娠率为41.6％。通过试验,肯定了国产激素的适宜剂量及其可与进口激素相比的超排效果,但同种FSH不同批号间存在差异。对29头供体母牛重复超排处理129次,各次处理间各项指标差异均不显著,获可用胚≥5枚的供体牛比率,在2—3次重复处理中均显著高于首次,指出由于供体对激素反应的个体效应,筛选对激素反应敏感的供体重复超排是可行的。同时探讨了胚胎品质、发育阶段以及黄体等级与移植妊娠率的关系。     

山羊耳皮肤成纤维细胞的传代培养及活力分析

目的　研究体外传代培养山羊耳皮肤成纤维细胞活力及染色体倍性。　方法　体外培养山羊耳皮肤成纤维细胞至 17代 ,并利用TUNEL原位分析、BrDU结合免疫标记以及低渗悬滴制备染色体的方法 ,对第 5代和第 17代细胞的细胞凋亡、DNA合成和染色体倍性进行了分析。　结果　山羊皮肤成纤维细胞在体外能够传代到17代以上 ,85 %以上 (42 4 9)的细胞染色体为正常的 2倍体 ,并且与第 5代的细胞相比较 ,细胞凋亡 (1 75 %vs1 15 % )、DNA合成 (17 4 3%vs 16 89% )都没有显著的变化 (P >0 0 5 )。　结论　长期传代培养 (17代 )的成纤维细胞的活力和DNA物质没有受到严重损伤 ,可以用来作为核移植的供体