放射耐受性肝癌细胞亚株的筛选与建立

目的 诱导并筛选具有放射耐受性的单克隆肝癌细胞亚株,为进一步研究细胞抗放射生物学变化构建实验模型。方法 采用人肝癌HepG2细胞进行放射诱导,分次照射,累积吸收剂量为60 Gy。经细胞克隆筛选、建株。进行形态学和细胞超微结构观察,同时测定细胞生长特性以及放射敏感性变化与亲本HepG2细胞进行比较,并观察2 Gy照射后细胞内放射相关抗拒基因mRNA表达水平的变化,对该细胞亚株进行鉴定,定名为HepG2/R60细胞亚株。结果 通过2 Gy×30次分割照射诱导,成功建立HepG2/R60细胞亚株。细胞鉴定结果显示,与亲本HepG2细胞比较,细胞形态不规则,伪足伸展,折光度清晰,细胞间连接较为松散。透射电镜观察HepG2/R60细胞表面微绒毛明显增多,线粒体丰富,高尔基体发达。细胞生长延缓,倍增时间明显延迟为34.9 h,与HepG2细胞比较,放射敏感性显著降低,放射相关抗拒基因表达明显升高。结论 成功建立具有放射耐受性的人肝癌细胞亚株:HepG2/R60。经鉴定与其亲本的HepG2细胞比较,其放射敏感性显著降低。     

γ射线照射后乏氧诱导因子1α对肝癌细胞存活的影响

目的 研究辐射对肝癌细胞内乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用以及HIF-1α的变化对肝癌细胞存活的影响。方法 采用CoCl₂化学模拟乏氧预处理人肝癌HepG2细胞,经不同剂量的γ射线照射后,通过细胞集落形成实验,比较有氧及化学模拟乏氧条件下细胞存活水平的差异。同时采用RT-PCR和Western blot方法检测照射后细胞内HIF-1α在转录和翻译水平上的变化。结果 在化学模拟乏氧条件下,细胞存活分数(SF)显著增加,与有氧对照组比较差异有统计学意义,且两种不同作用条件下的SF比值(SF_CO/SF_O2)随照射剂量逐渐增加,同时,经照射后细胞内的HIF-1α表达升高,并呈剂量依赖模式,HIF-1α的表达与照射后的细胞存活水平具有较强的关联性。结论 辐射可诱导肝癌细胞内HIF-1α的表达升高,HIF-1α的表达变化可能影响细胞的存活水平。