不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其？…

目的：为满足丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＥＩＡ检测的需要，构建含优势抗原表位的ＨＣＶ嵌合重组抗原。方法：利用基因工程重组技术，获得了不同的ＨＣＶ嵌合抗原ＮＣ１和ＮＣ２。含嵌合基因的表达质粒在大肠杆菌中表达了目的抗原，其中包括结构区核壳蛋白Ｃ２２和不同长度的非结构区蛋白ＮＳ３；表达产物经离子交换和盐析纯化。结果：用针对Ｃ２２或ＮＳ３抗原表位特异 血清及系列血清进行了检测，表明ＮＣ１和ＮＣ２均同时具有Ｃ２２     

庚型肝炎病毒研究近况

庚型肝炎病毒研究近况孙柯儿综述凌世淦审校（北京军事医学科学院三所１００８５０）庚型肝炎（ＨＧＶ）是１９９５年下半年刚刚发现的人类致肝炎病毒。开始是Ａｂｂｏｔｔ实验室的Ｓｉｍｏｎｓ等研究人员从感染过ＧＢ肝炎病人血清的绢毛猴血清中，先后分离了三株病毒，分...     

人白介素1受体拮抗剂的cDNA克隆和原核表达

从活化的正常人外周血单核细胞中提取总ＲＮＡ，经逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）获得了人白介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１Ｒａ）ｃＤＮＡ。经过ＤＮＡ测序分析，发现该片段和国外发表的ＩＬ－１ＲａｃＤＮＡ序列一致，将该目的基因插入ｐＢＶ２２０载体，并转入大肠杆菌ＨＢ１０１中，经热诱导表达重组蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后发现，菌体超声裂解后，在可溶性上清中有一Ｍ１７０００的特异带，约占菌体可溶性总蛋白的８０％以上     

丙型肝炎病毒NS4区多肽的抗原性研究及应用

为挑选NS4中的优势抗原表位用于丙型肝炎病毒(HCV)的血清学检测,对相应区段的多肽进行了细致分析,以选择合适的肽段进行研究。在以Goldkey软件分析NS4肽氨基酸序列的基础上,采用人工合成肽技术合成了3条多肽,分别含15,21和28个氨基酸残基(依次命名为P15P21和P28),并研究了各肽段的抗原性。通过DNA合成和基因工程技术,表达了选择的优势抗原决定簇。将其用于HCV阳性和阴性系列血清的检测,结果表明,根据上述研究构建的融合NS4多肽抗原的抗原性优于合成肽,可用于作为HCVEIA的试剂。     

IL—1受体拮抗剂的临床应用前景

到目前为止，已经就白介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１Ｒａ）在败血性休克、类风湿性关节炎、类固醇耐受移植物抗宿主反应等病人的治疗中的作用进行了临床试验。ＩＬ－１Ｒａ对这些病人的治疗是剂量依赖性的。动物实验更证实了这些临床上的结果。ＩＬ－１Ｒａ用于临床治疗时需要很高的血清浓度，但无论是在健康人或病人中，持续的高ＩＬ－１Ｒａ血清浓度并没有不良反应倾向     

不同HCV优势抗原嵌合基因在大肠杆菌中的表达及其产物的分析

目的：为满足丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＥＩＡ检测的需要，构建含优势抗原表位的ＨＣＶ嵌合重组抗原。方法：利用基因工程重组技术，获得了不同的ＨＣＶ嵌合抗原ＮＣ１和ＮＣ２。含嵌合基因的表达质粒在大肠杆菌中表达了目的抗原，其中包括结构区核壳蛋白Ｃ２２和不同长度的非结构区蛋白ＮＳ３；表达产物经离子交换和盐析纯化。结果：用针对Ｃ２２或ＮＳ３抗原表位特异性血清及系列血清进行了检测，表明ＮＣ１和ＮＣ２均同时具有Ｃ２２和ＮＳ３抗原的免疫反应性。以嵌合抗原制备的抗ＨＣＶＥＩＡ试剂检测中国药品生物制品检定所的第三代Ｐａｎｅｌ血清时，其阳性、阴性通过率都符合要求。结论：构建的嵌合抗原有多个优势抗原表位，可用于ＨＣＶＥＩＡ检测     

重组丙型肝炎病毒表位抗原的研究

目的：研究丙型肝炎病毒（HCV）表位抗原,以满足丙肝抗体确认试剂研究的需要,方法;构建原核融合表达载体pBVIL1,精选HCV不同区抗原,C区,NS3,NS4和NS5的主要抗原表位,用PCR方法从不同HCV抗原表达质粒中扩增出相应抗原表位,构建pBVIL1表达质粒,并在HB101受体菌中表达,纯的单片段抗原经包被测定板和用间接ELISA法对阴性及阳性血清测定其活性,结果与结论：所克隆的单片段抗原均在表达载体pBVIL1中获得高效表达,单片段抗原纯品用卫生部的Ｐanel测定,所得结果和进口Ｏrtho公司ＲＩＢＡ３．０结果进行比较,其中Ｃ和ＮＳ４抗原活性略高于ＲＩＢＡ３．０中的相应抗原,ＮＳ３抗原活性则略低于ＲＩＢＡ３．０中的c33cr抗原,但对４０份阳性血清的总评价和ＲＩＢＡ３．０完全一致,表明目前抗原已可满足要求。     

高效原核融合表达载体（pBVIL1）的构建及在HCV抗原表达中的应用

在对作为试剂抗原的研究中,为尽量减少抗原中无关片段可能引起的非特异性反应,常需采用以特异性抗原表位为主的小分子肽。但有时为了增加抗原的覆盖面以提高检测的灵敏度,又需用含有多个抗原表位的融合抗原〔１,２〕。用人工合成肽成本较高,且肽与肽间的化学连接难以达到定向和得到稳定的产物。若能进行小分子肽基因的重组表达,并进而将其相互连接融合表达最为理想。为实现上述目的,我们构建了表达载体pBVIL１。此载体是我们在以前克隆的表达质粒〔３〕pBV２２０／IL－１β的基础上而构建的。即在相当原质粒中的IL－１β基因中,…     

人白介素-1β及其突变体的克隆、表达与活性研究

人白介素１（ＩＬ１）是一种多功能细胞因子,其生物作用非常广泛,可能有一定的开发前景。但Ｉ期临床试验结果表明ＩＬ１具有促炎症、发热、寒颤、低血压等严重副作用〔１〕,限制了其临床应用。我们根据已有研究结果,通过定点突变来改变ＩＬ１β的一级结构,以期改变其某些生物活性,从而达到减小其毒副作用的目的。ＩＬ１结构与功能关系的研究表明,分子中９２～１２４位氨基酸和ＩＬ１β热原活性关系密切。国外ＩＬ１β定点突变研究证明,１０５、１１３位氨基酸与发热有关,但１０５位和１１３位的突变体在热原活性降低…