TAR DNA结合蛋白43与泛素体外共相分离机制初步研究

目的 探究TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)与泛素共相分离的动态变化特征及机制。方法 构建TDP-43全长及各结构域原核表达质粒,纯化泛素和TDP-43全长及各结构域截短体蛋白,构建泛素和TDP-43体外的相分离体系,利用荧光显微镜观测通过液-液相分离形成的液滴的动态特征。将泛素和TDP-43真核表达质粒转染入HEK293T细胞内表达,利用荧光显微镜观察TDP-43与泛素形成聚集体并通过pull-down实验检测TDP-43泛素化修饰。结果 成功纯化得到泛素和TDP-43全长及各结构域截短体蛋白。体外相分离体系中发现TDP-43全长和CTD截短体蛋白能够与泛素发生共相分离,且延长孵育时间液滴最终变成流动性较差的聚集体。在细胞内共转染泛素和TDP-43质粒,二者形成不可溶的聚集体,应激条件下TDP-43能够被泛素化修饰。结论 TDP-43能够与泛素蛋白发生共相分离,主要通过TDP-43的CTD结构域与泛素间的多价相互作用驱动,且该凝聚体液滴易形成流动性差的聚集体。在应激条件下,当细胞内蛋白稳态失衡时,TDP-43与泛素被募集到一起形成聚集体且聚集体内的TDP-43会被泛素化修饰。...     

谷氨酰胺对慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者免疫功能的影响

目的探讨谷氨酰胺（Gin）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）并呼吸衰竭患者免疫功能的影响。方法选择COPD呼吸衰竭患者40例,随机均分为观察组和对照组。两组患者均给予医院配制的高能鼻饲膳,观察组从每13蛋白质摄入总量中减去20g,替换为静脉给予等量的丙氨酸一谷氨酰胺（Aln—Gin）双肽,在营养治疗前1d及治疗后7、14、21、28d测定免疫学指标。结果营养支持28d后,观察组的血总淋巴细胞计数（TLC）,CD3,CIM,CD4／CD8以及免疫球蛋白IgA、IgG显著增加（P〈0．05）,对照组血TLC显著增加（P〈0．05）。治疗4周后两组各项指标比较有统计学差异（P〈0．05）。观察组在治疗后不同监测时间组分别与治疗前比较均有统计学差异（P〈0．05）;对照组TLC在治疗21、28d与治疗前比较有统计学差异（P〈0．05）。结论Aln-Gin对COPD合并呼吸衰竭患者具有调节细胞、体液免疫功能的作用。