抗SSA／Ro抗体研究的新进展

1979年Alspaugh等使用培养人淋巴细胞提取物与原发性Sjogren＇s综合征（pSS）患者的血清进行研究。发现该提取物中含有两种新的自身核抗原即SSA和SSB抗原，1979年Alspaugh与Clark又证明SSA抗原与Clark1968年发现的Ro抗原是同一种物质。故命名为SSA／Ro抗原，针对SSA／Ro抗原的自身抗体是已知的核糖核蛋白（fibonudeopro-teincomplex，RNP）抗体中分布最广、最常见的自身抗体之一。     

Smith抗原的性质特征及临床意义

系统性红斑狼疮（SLE）是一种自身免疫性疾病，患者血清中可检出多种自身抗体，但抗Smith（Sm）抗体是SLE的标记性抗体。作者就Sm抗原的理化特性、生物学作用和抗Sm抗体的检测作一综述。     

人自身抗原Sm B'基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

目的 通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母中表达人自身抗原Sm B'.方法 PCR扩增Sm B'基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-Sm B'.用电穿孔法转化酵母菌Sm D1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(WB)鉴定,并用免疫酶斑点法和免疫印迹法(immunoblot,IBT)检测与评价分析30例系统性红斑狼疮(SLE)患者、30例混合结缔组织病患者和30名健康体检者血清中抗-Sm B'水平差异.结果 PCR产物约700 bp,与预期657 bp接近,pPIC9k-Sm B'重组阳性克隆测序结果与核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物Sm B'的相对分子质量约32 000,WB法证实表达产物具有天然Sm B'分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的 表达条带.免疫酶斑点法检测阳性率为46.7%(42/90),IBT的检测阳性率为51.1%(46/90);2种方法检测结果一致性较佳(Kappa值=0.911 2,P<0.01).结论 Sm B'在巴斯德毕赤酵母中分泌表达成功,这为Sm B'试剂盒研究奠定了基础.     

eEF1A2基因沉默的原发性肝细胞癌BEL-7402细胞株的建立

目的本研究旨在构建针对高表达真核翻译延长因子1A2(eEF1A2)的原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7402细胞株的eEF1A2-RNAi的细胞模型,为从基因沉默基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用的功能奠定实验基础。方法通过针对eEF1A2基因的shRNA与线性化的GV115-GFP载体进行连接转化,对获得的重组子(GV115-GFP-eEF1A2-shRNA)进行PCR和测序鉴定。采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与GV115-GFP-eEF1A2-shRNA共转染293T细胞,包装成eEF1A2-RNAi-LV,并感染高表达eEF1A2的BEL-7402细胞。采用Real time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证eEF1A2-RNAi-LV对BEL-7402细胞eEF1A2表达的抑制作用。结果成功构建了重组真核表达载体GV115-GFP-eEF1A2-shRNA,并通过慢病毒载体系统包装成eEF1A2-RNAi-LV;将eEF1A2-RNAi-LV转染至BEL-7402细胞后,细胞eEF1A2 mRNA和蛋白的表达水平分别下降了84.1%和64.5%,与阴性对照组相比较具显著性差异(P0.01),表明转染后的BEL-7402细胞eEF1A2基因被特异性沉默。结论成功构建了eEF1A2-RNAi的BEL-7402细胞模型,为进一步从基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用奠定了良好的实验基础。     

四种血细胞分析仪检测结果的对比分析

目的评价四种血细胞分析仪的主要测定指标的可靠性。方法根据1986年国际血液学标准化委员会ICSH公布的关于自动血细胞计数仪评价的文件,用标准全血质控液以白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）及血小板（PLT）4个测试项目评价Beckman Coulter LH750、Beckman Coulter ACT5dif、Abbott Cell Dyn3700以及迈瑞BC5500四种血细胞分析仪的批内精密度、批间精密度等指标,然后比较150份新鲜全血样本在四种仪器上的测定结果。结果四种血细胞分析仪的批内精密度、批间精密度等结果经单个样本t检验差异无统计学意义（P〉0.05）;临床标本在四种仪器上的测定结果经方差分析差异无统计学意义（P〉0.05）。结论四种血细胞分析仪的主要性能指标均符合要求,四项测定指标结果差异在允许范围内;同一实验室对不同血细胞分析仪结果进行定期比对和偏差评估是十分重要的,是保证检测结果准确可靠的有效方法。     

抗Sm D1抗体在系统性红斑狼疮诊断中的应用

[摘要] 目的 探讨抗Sm D1抗体在系统性红斑狼疮（SLE）诊断中的应用。方法 93例SLE患者、15例皮肌炎患者、30例干燥综合征患者和50例健康体检者血清。用线性免疫分析法检测抗Sm D1抗体,免疫印迹法检测抗Sm抗体,间接免疫荧光法检测抗ds-DNA抗体。结果 SLE患者抗Sm D1抗体的阳性率高于抗Sm抗体（P＜0.01）,与抗ds-DNA抗体阳性率相似（P＞0.05）,在非SLE患者中抗Sm D1抗体均阴性。结论 抗Sm D1抗体是SLE的特异性指标,其敏感性高于抗Sm抗体,可作为SLE实验室诊断的常规项目之一。     

ADD3可变剪接在结肠癌与正常组织间的差异表达

 目的: 探讨内收蛋白3(ADD3)及其剪接体与结直肠癌(CRC)的关系。方法: Real-time PCR方法检测50对CRC组织、20对结直肠息肉组织、经5-氟尿嘧啶(5-FU)或奥沙利铂干预前后的SW480(低转移性)和SW620(高转移性)结肠癌细胞中ADD3-、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量。用MTT检测细胞的活力,用划痕实验检测细胞的转移能力,用Transwell实验检测细胞的侵袭性。结果: CRC组织中ADD3与ADD3-Ib的表达量低于正常组织(P<0.01),ADD3-Ia/Ib比值高于正常组织(P<0.01);病理分组发现ADD3-Ia在T3-4组的表达量较T1-2组高(P<0.05)。结直肠息肉组织中ADD3、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量低于正常组织(P<0.01)。SW620细胞中ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量低于SW480细胞(P<0.05),ADD3-Ia/Ib比值高于SW480(P<0.01);在经奥沙利铂和5-FU分别处理后,在SW620和SW480细胞活力、迁移和侵袭能力减弱,而ADD3、ADD3-Ia和ADD3-Ib的表达量均有不同程度增高。结论: CRC中ADD3-Ib和ADD3减少,并伴随ADD3-Ia/Ib比值升高。ADD3及其剪接体的改变可能跟CRC的侵袭能力有关。     

人Smith D1抗原在原核细胞中的表达与纯化及临床应用

目的获得人Smith D1（Sm D1）抗原基因，并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑（dot immunogold filtration assay，DIGFA）检测方法。方法采用基因工程技术，通过PCR从人白血病HL-60细胞cDNA文库中扩增人Sm D1抗原基因，构建pGEX-5T-Sm D1重组表达载体，在大肠杆菌B1221中通过异丙基硫代半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达Sm D1蛋白。利用初步纯化的Sm D1抗原建立DIGFA。结果重组质粒测序和酶切结果显示Sm D1抗原基因正确插入pGEX-5T，重组蛋白、复性及纯化产物经12％十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），在相对分子质量为39000处有一明显的蛋白表达条带，免疫印迹法分析表明，重组蛋白具有人Sm D1抗原的抗原性。DIGFA与色疫印迹法检测结果的差异无统计学意义（P〉0．05），二者的符合率为91．7％。DIGFA敏感度为100％，特异度为83．3％结论通过基因工程技术制备获得初步纯化的谷胱苷肽转移酶（GST）-Sm D1融合蛋白，用该抗原建立的DIGFA与免疫印迹法相似，且具有快速、简便和可靠等优点。     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。     

应用变性高效液相色谱法检测幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性

目的建立DHPLC快速检测Hp对克拉霉素耐药性的新方法。方法抽提56份经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的Hp菌株DNA及其对应的胃粘膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23S rRNA区187 bp基因,运用DHPLC技术对PCR产物进行突变分析,并进行DNA测序。结果56份克拉霉素耐药的Hp菌株DNA经DHPLC分析,有51份存在异源双链峰,测序证实均存在点突变,5份无异源双链峰,测序证实无点突变,故DHPLC对基因突变耐药菌株的敏感性和特异性为100%,而且56份组织标本DNA检测结果与菌株DNA检测结果一致。结论DHPLC可应用于Hp对克拉霉素耐药性的快速检测,具有广阔的临床应用前景。