Na^＋／H^＋交换器-1抑制诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的可能机制

背景：肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMC)的增殖在缺氧肺动脉高压肺血管重构中起重要作用。解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸研究所在前期实验中通过构建Na^+／H^+交换器-1(sodium／pmton exchanger isofom-1，Na^+／H^+exchanger isoflorm-1，Na^+／H^+ antiporter isoform-1，NHE-1)特异性核酶基因逆转录病毒载体，转染入体外培养的大鼠PASMC内表达，发现NHE-1抑制可诱导细胞内酸化而抑制PASMC增殖，并促进其凋亡。但这种促凋亡作用是通过什么途径来完成，尚不清楚。目的：探讨Bcl-2、Bax蛋白表达在NHE-1抑制而诱导大鼠PASMC凋亡中的作用。设计：分组对照实验。地点和材料：实验在解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所完成。转染表达NHE-1特异性核酶基因的体外培养大鼠PASMC(PRZ细胞)、转染PLXSN空载体的大鼠PASMC(PX细胞)、未处理大鼠PASMC细胞(PA细胞)为前期实验所制备。干预：已构建NHE-1特异性核酶基因逆转录病毒载体，转染入体外培养的大鼠PASMC内表达，同时转染pLXSN空载体入另一组大鼠PASMC内，后者与未转染的大鼠PASMC细胞为对照组。用荧光指示剂(Fura-2／AM)测定法检测转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca^2+([Ca^2+]i)变化；RT-PCR方法检测细胞内Bcl-2和Bax mRNA表达变化，免疫组化法检测细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。主要观察指标：①转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca^2+([Ca^2+]i)变化。②细胞内Bcl-2和Bax mRNA表达变化。③细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。结果：转染NHE-1特异性核酶基因后，大鼠PASMC内[Ca^2+]i显著升高，细胞内[Ca^2+]i在PA细胞[(95．94&;#177;6．39)nmol／L]与PX细胞[(98．08&;#177;7．37)nmol／L]之间差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，而PRZ细胞[(198．08&;#177;16．59)nmol／L]显著高于PA细胞及PX细胞，差异有显著性意义(P&;lt;0．001)。Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(PA细胞、PX细胞、PRZ细胞的平均积分光密度分别为2．21&;#177;0．18，2．09&;#177;0．30。1．45&;#177;0．20)，Bax mRNA和蛋白表达显著增加(PA细胞、PX细胞、PRZ细胞的ABax／Aβ-actin分别为0．17&;#177;0．02，0．23&;#177;0．06，0．59&;#177;0．08)。结论：NHE-1抑制诱导的PASMC凋亡与[Ca^2+]i增加、Bcl-2表达降低及Bax表达增加有关。     

呼吸病学进展与展望

呼吸系统疾病是临床常见病、多发病，由于吸烟、大气污染、人口老龄化等因素，肺癌、支气管哮喘发病率明显升高，慢性阻塞性肺疾病发病率也居高不下，急性呼吸窘迫综合征、慢性肺间质性疾病及免疫功能低下患者并发肺部感染等疑难危重症也日渐增多。本文主要就急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺部疾病、支气管哮喘、肺癌、呼吸系统感染等方面的进展与展望简述如下。     

西咪替丁对血浆氨茶碱浓度的影响

在１６例呼吸系疾病患者观察了西咪替丁对氨茶碱血浆浓度的影响。结果表明加服西咪替丁４００ｍｇ，３次／日，３天后血浆氨茶碱谷浓度和峰浓度均明显增高（ｐ＜０．０１），其中谷浓度升高４３．０±５１．１％，峰浓度升高２７．０±２９．０％。提示二者合用时，应适当减少氨茶碱用量，以避免氢茶碱中毒的发生。     

增强性功能药物的临床应用

增强性功能药物的临床应用吴国明（武汉铁路中心医院４３００６４）增加性功能的药物，因具有激发性欲的作用或增加性交的功能，所以常称作为性兴奋剂，亦称作为“壮阳药”、“催欲药”、“春药”等等￣［１］。临床上多用于因各种原因引起的阳萎及性功能异常的治疗。值得...     

前列腺素E1对脂肪所致犬呼吸窘迫综合征的治疗作用

采用同种脂肪提取液复制犬呼吸窘迫综合征模型,观察前列腺素E_1(PGE_1)对其治疗作用。结果表明,PGE_1可改善该模型的低氧血症,降低肺毛细血管通透性,减轻肺水肿,其减轻肺损伤的机理与其抑制多形核白细胞粘附、氧自由基产生及保护Ⅱ-型肺泡上皮细胞等有关。     

人肺癌细胞转录因子--C/EBP和HMG样蛋白的EMSA检测

目的：检测人肺癌细胞中是否存在与Na^ /H^ 交换蛋白-1（NHE-1）基因转录相关的重要转录因子--C/EBP和HMG样蛋白。方法：采用电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测人肺癌细胞株核蛋白中C/EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果：EMSA检测到A549细胞和转染NHE-1反义载体的A549细胞均有转录因子C/EBP和HMG样蛋白的表达，且后者表达水平高于前者；采用50倍未标记的片段能完全抑制相应转录因子与^32P标记的相同片段的结合。结论：A549细胞核蛋白中存在能与C/EBP结合序列和Poly(dA：dT)区结合的转录因子，即C/EBP和HMG样蛋白，后者的表达水平高于前者。特异性竞争抑制试验表明外源性特异DNA片段能抑制相同片段与转录因子的结合。     

人肺癌细胞NHE-1基因部分正调控序列的克隆

目的 克隆人肺癌细胞Na∧ /H∧ 交换泵-1（NHE-1）基因上游正调控序列部分,为进一步将该片段导入肺癌细胞株,竞争性结合转录因子,达到抑制细胞内NHE-1基因的表达奠定基础。方法 采用PCR技术从人肺癌A549细胞基因组中扩增长约170bp的NHE-1基因调控序列中起正调控作用的片段。在上、下游引物的5′-端带上BanHI和EcoRI酶切位点。然后将该片段连接到pUC18载体上,最后对产生的重组子进行酶切、PCR和测序鉴定。结果 经酶切及PCR鉴定,所克隆的目的片段大约为180bp,而NDA测序证实克隆并插入到载体中的片段为目的的片段,长度为168bp,与报道的序列比较缺失2个t。结论 本实验已成功地克隆了人肺癌细胞NHE-1基因调控序列中正调控序列片段。     

NHE-1基因的反义核酸对人肺癌细胞的酸化作用及其意义

目的探讨Na~ ／H~ 交换系-1（NHE-1）基因在肿瘤细胞内pH（pHi）调节及细胞增殖／死亡中的作用,方法采用荧光探针法检测与NHE-1基因的反义核酸片段（AS-ODN）共孵育后PLA-801D细胞的PHi;用活细胞计数法观察AS-ODN对PLA-801D细胞的毒性作用.结果发现20uMAS-ODN处理24至48小时后即能明显酸化PLA-801D细胞（P＜0.01）,且能显著抑制肿瘤细胞的增殖并导致其死亡。结论NHE-1基因的表达在肿瘤细胞pHi调节及增殖／死亡的调控中起重要作用,抑制其超表达和NHE-1活性有一定的应用价值.     

人β防御素-2基因在SPC细胞中的转染表达

目的合成人β防御素-2(hum anβ-defensin-2,hBD-2)基因并构建其真核表达载体,转染SPC细胞,检测其表达,明确hBD-2重组载体的表达活性,为hBD-2基因转染和表达的研究奠定基础。方法根据Genebank中的hBD-2结构基因序列设计合成三条引物,用PCR延伸扩增的方法合成hBD-2基因,克隆入真核表达载体pLXSN;通过脂质体转染法将pLXSN-hBD-2导入SPC细胞,采用W estern-b lot法检测hBD-2的表达。结果经凝胶电泳及测序分析,证实合成的基因与原序列一致,并成功克隆到真核表达载体pLXSN上,所构建的真核表达重组载体pLX-SN-hBD-2转染SPC细胞后呈现有效表达。结论成功构建了PCR合成的hBD-2基因真核表达重组载体pLXSN-hBD-2,通过基因转染的方法导入SPC细胞并获得表达hBD-2,为进一步的动物转基因抗感染实验研究提供了依据。     

支气管镜检查在气管和支气管结核诊断中的作用

目的探讨气管、支气管结核的临床特征及支气管镜检查在气管、支气管结核诊断中的作用。方法回顾性分析经Olympus电子或纤维支气管镜检查,后经病理学或抗酸染色证实为气管、支气管结核216例患者的临床资料及支气管镜检查资料。结果临床主要症状为刺激性干咳(72．7％)和间断性咯血(34．7％),缺乏典型的结核中毒表现。胸部影像学检查以肺内片状阴影(31．0％)和肺不张(24．1％)多见,影像学无明显异常者占16．7％。气管镜下表现为肉芽增殖型 (36．1％)、炎症浸润型(31．0％)、溃疡坏死型(24．1％)、瘢痕狭窄型(8．8％)。病变部位左肺 (56．2％)多于右肺(37．6％),左主支气管受累比例最大(26．9％),病变遍及所有叶、段支气管。 216例中经病理学诊断178例(82．4％),毛刷涂片抗酸染色细菌学诊断68例(31．5％)。结论气管、支气管结核缺乏特异性临床表现,误诊率较高,不重视支气管镜检查是误诊主要原因。支气管镜检查是气管、支气管结核最可靠和最准确的诊断方法。