茶多酚单体对中波紫外线辐射培养的成纤维细胞氧化损伤的保护机制研究

目的：探讨茶多酚的活性单体表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)对紫外线辐射氧化损伤的保护机制。方法：用722分光光度计测定培养的人皮肤成纤维细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活性，以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量；采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法测定成纤维细胞合成基质金属蛋白酶1(MMP1)以及其组织抑制因子—1(TIMP—11的mRNA表达水平。结果：EGCG可以减少中波紫外线(UVB）辐射引起的丙二醛沉积，增加抗氧化酶的活性；并且可以抑制UVB诱导的MMP1 mRNA表达，减少胶原蛋白的降解。对TIMP—1的表达则没有观察到显著变化。结论：EGCG可以对UVB辐射损伤的体外培养成纤维细胞起到保护作用。     

皮肤光老化机制研究进展

长期紫外线辐射将导致皮肤胶原纤维减少和异常弹性纤维沉积而出现皮肤光老化。近年来大量研究表明紫外线作用于人体皮肤后通过产生的活性氧、细胞表面的生长因子受体、细胞因子受体及许多酶的级联，激活转录因子激活蛋白，使基质金属蛋白酶高表达而降解细胞外基质，最终导致皮肤光老化。     

国外皮肤病治疗速报

本文综述了１９９５年１１月～１９９６年５月部分国外期刊发表的皮肤病治疗方面的报道     

UVB应激性衰老成纤维细胞分泌细胞外基质对HaCaT细胞ERK信号的影响

目的 探讨UVB诱导的衰老（UVB-SIPS）成纤维细胞分泌的细胞外基质（ECM）对HaCaT细胞增殖的影响以及细胞外信号调节激酶（ERK）信号途径的作用。方法 采用辐射诱导人皮肤成纤维细胞衰老,分别制备由未衰老和衰老成纤维细胞分泌的ECM包被的培养皿（分别定为PRE-ECM组、SCIP-ECM组）。以空白培养皿（NON-ECM组）为参照,在HaCaT细胞接种于培养皿后,采用MTT法和流式细胞法检测其细胞增殖、细胞周期等指标的变化;免疫印迹法分析ERK活化水平。干预性研究ERK信号通路对上述功能的影响。结果 三组中,SCIP-ECM组可诱导最强烈的ERK1/2的活化。采用U0126抑制ERK信号活化可完全抑制衰老成纤维细胞来源的ECM的促细胞增殖效应。阻断HaCaT细胞的ERK活化,NON-ECM组、PRE-ECM组和SCIP-ECM组S + G2/M期细胞的比例明显下降,分别由处理前37.40%、41.34%和43.31%减少至29.41%、36.48%到39.96%。结论 UVB-SCIP成纤维细胞分泌的ECM通过刺激ERK磷酸化促进HaCaT细胞增殖。     

紫外线辐射的尿刊酸对T淋巴细胞分泌IL-10的影响

尿刊酸(urocanic acid,UCA)存在于哺乳动物表皮角质层中,在天然情况下以反力(trans-UCA)存在,当受到一定波长的中波紫外线照射后,部分异构为顺式(cis-UCA).近年来许多研究表明服刊酸在紫外线引起的免疫抑制中起着重要作用^[1].为了进一步了解UCA对T淋巴细胞的作用,我们观察了cis-UCA和trans-UCA对T淋巴细胞分泌IL-10的影响,以进一步探讨尿刊酸在紫外线引起的免疫抑制中的作用机理.     

特异性免疫治疗对单核细胞及其来源的树突状细胞表型的早期影响

目的探讨抗原特异性免疫治疗对单核细胞及其来源的树突状细胞表达与免疫相关的重要表型的早期影响。方法 20名接受黄蜂毒液免疫治疗的患者,在治疗前(day0)和治疗后第1天(day1)、第3天(day3)和第5天(day5)抽取外周静脉血分离单核细胞(Mo),其中10名患者的单核细胞在体外培养6d诱导分化为单核细胞来源的树突状细胞(MoDC),流式细胞仪检测其表面ILT3,ILT4,B7H1,B7H2,MHCⅠ,MHCⅡ,CD80和CD86的表达。结果单核细胞和MoDC表面ILT3和ILT4表达显著增高,B7H1和CD86表达显著降低,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。未观察到B7H2,MHCⅠ,MHCⅡ和CD80的显著性改变(P>0.05)。结论单核细胞和MoDC表面的ILT3,ILT4,B7H1和CD86分子参与抗原特异性免疫治疗的早期耐受。     

蛋白酶激活受体2在人角质形成细胞中的表达及功能测定

目的 分析人皮肤角质形成细胞中蛋白酶激活受体2（PAR2） 的表达及其生物学功能,探讨其在皮肤屏障中的作用。方法 以体外培养的人皮肤角质形成细胞原代细胞或细胞系N//TERT 细胞为研究对象,通过免疫荧光染色及蛋白印迹分析细胞中PAR2的表达及分布特点,采用荧光标记的钙流释放法测定PAR2的生物学功能,利用PAR2 的天然底物胰蛋白酶或其激活肽、对照肽及拮抗肽诱导PAR2的活化,观察不同作用底物诱导PAR2活化的特点。 结果 在正常培养条件下,PAR2在皮肤角质形成细胞中呈中低水平表达,不同的培养基组成及培养时间对PAR2的表达水平无明显影响。PAR2的作用底物诱导细胞的钙流释放具有时间及浓度依赖性特点,其中使用50 ～ 250 nmol/L胰蛋白酶作用于角质形成细胞后,可以诱导细胞内钙流释放;使用75 ～ 250 μmol/L PAR2特异性激活肽PAR2-AP （H2N-SLIGKV-COOH）处理角质形成细胞后,即可最大程度地诱发PAR2的活化。而在相同浓度PAR2的拮抗肽PAR2-ANTAP （H2N-FSLLRY-COOH）作用下,PAR2的作用底物所诱导的细胞钙流释放明显受到抑制。分析比较相关荧光强度发现,PAR2激活底物诱导的细胞内钙流释放可以在瞬间（0 ～ 250 s）完成,以50 s的作用时间点细胞内钙流释放强度最大。此外,PAR2的激活可以显著增加皮肤角质形成细胞ERK蛋白的磷酸化水平,从而激发细胞内MAPK信号转导通路。结论 皮肤角质形成细胞表面表达有PAR2受体,该受体活化受胰蛋白酶及PAR2的特异性激活肽调控,PAR2的活化可影响角质形成细胞的生理功能,诱导细胞内钙流释放。     

茶多酚对紫外线辐射后的角质形成细胞和成纤维细胞增生影响的保护作用

紫外线辐射(UVR)是皮肤生物性损伤的主要因素,而皮肤角质形成细胞和成纤维细胞是此生物损伤过程中受到影响的主要细胞[1]。本实验通过MTT法(四甲基偶氮唑盐)研究不同剂量的中波紫外线(UVB)和长波紫外线(UVA),对体外培养的人角质形成细胞株HaCaT和皮肤成纤维细胞增生的影响,并探讨具有抗氧化作用的茶多酚(teapolyphenol,TPP)对此影响的保护作用。1材料和方法1.1主要仪器和试剂酶联检测仪(Clinibio公司),紫外线辐照仪(Sigma公司,UVB光谱峰值为310～315nm,UVA为365nm),96孔培养板(Costar公司),DMEM培养基(Gibeco公司),小牛血清(杭…     

紫外线诱导角质形成细胞凋亡和表没食子儿茶酚没食子酸酯保护机理的探讨

目的探讨不同剂量的中波紫外线(UVB)辐射对体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞株)凋亡和死亡的影响,探讨表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用,以及与凋亡相关的bcl-2和Fas基因之间的关系。方法流式细胞仪检测不同剂量UVB辐照及EGCG处理后角质形成细胞凋亡和死亡数量以及bcl-2蛋白水平的变化,RT-PCR检测FasmRNA的表达水平。结果UVB辐照组凋亡细胞数和死亡细胞数显著高于对照组(P<0.01),bcl-2和FasmRNA量与对照组差异也有显著性(P<0.01)。UVB辐照126mJ/cm2组凋亡细胞数低于辐照42mJ/cm2组(t=2.39,P<0.05),但死亡细胞比例显著增加(t=4.82,P<0.01),两组bcl-2和FasmRNA表达量差异均无显著性(t=1.30,P>0.25;t=0.32,P>0.25)。UVB辐照42mJ/cm2立即加入EGCG组较辐照42mJ/cm2未加EGCG组凋亡和死亡细胞数降低(t=7.64,P<0.01;t=3.49,P<0.05),bcl-2增加(t=3.62,P<0.05),FasmRNA表达量减少(t=6.83,P<0.01)。结论小剂量UVB辐照可以诱导体外培养的角质形成细胞凋亡,大剂量UVB辐照则导致细胞死亡,EGCG通过与凋亡相关的bcl-2和Fas减少紫外线诱导的角质形成细胞凋亡。     

中波紫外线通过EGFR／P13K／AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达

目的探讨中波紫外线辐射对HaCaT转铁蛋白受体表达的影响及其信号途径。方法流式细胞仪检测HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。实时PCR检测转铁蛋白受体mRNA表达。结果UVB辐射可上调HaCaT细胞转铁蛋白受体mRNA及其蛋白的表达，并在一定范围内（10mJ／cm^2-30mJ／cm^2）呈剂量依赖性。表皮生长因子受体（EGFR）抑制因子PD153035、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制因子LY294002和渥曼青霉素（Wortmannin）均可显著抑制UVB辐射对转铁蛋白受体的上调作用（P〈0．01）。结论紫外线可通过EGFR／P13K／AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。