组织蛋白酶D调控皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的研究

目的 探究组织蛋白酶D（CatD）对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物（AGE）的调控作用。方法 分别以CatB + CatL、CatD以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂（pepstatin A）、MG-132处理皮肤成纤维细胞,CCK8和荧光法检测细胞活性及蛋白酶活性。CA074Me、pepstatin A、MG-132组分别加入AGE-BSA孵育8 h,而对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）。孵育8 h后,置换含相应抑制剂的新鲜培养基继续培养24 h,流式细胞仪检测各时间点胞内AGE-BSA平均荧光强度。以不同浓度pepstatin A（37.5、75、150 μmol/L）或PBS处理皮肤成纤维细胞,加入AGE-BSA孵育,方法同前,ELISA检测各时间点胞内AGE-BSA平均浓度,计算降解率。慢病毒转染皮肤成纤维细胞,设空白对照组、空载病毒转染组、CatD高表达慢病毒转染组,荧光显微镜观察,RT-PCR、Western印迹法和荧光法检测各组CatD mRNA和蛋白表达及酶活性。分别加入AGE-BSA孵育,处理及检测方法同前,计算降解率。结果 1 μmol/L CA074Me组、75 μmol/L pepstatin A组及1 μmol/L MG-132组细胞增殖活性均在90%以上,与对照组（100%）差异无统计学意义（F = 1.525,P > 0.05）。去除AGE-BSA 24 h后,CA074Me + AGE-BSA组和MG-132 + AGE-BSA组胞内AGE-BSA荧光强度（275.00 ± 10.15、259.00 ± 11.14）均较其相应8 h点荧光强度（295.00 ± 6.56、285.67 ± 8.74）显著下降（配对t值分别为4.778、6.154,均P < 0.05）,而pepstatin A + AGE-BSA组8 h和32 h点细胞内AGE-BSA荧光强度差异无统计学意义（均P > 0.05）。37.5、75和150 μmol/L pepstatin A组24 h内对吞入胞内AGE-BSA的降解率分别为9.64% ± 1.27%、5.62% ± 0.47%和3.21% ± 0.73%,各组间差异有统计学意义（F = 45.876,P < 0.05）,且该降解率随pepstatin A浓度增加而降低（P < 0.05）。荧光显微镜下观察,空白对照组细胞未见荧光,空载病毒转染组和CatD高表达慢病毒转染组细胞荧光阳性率均在80%以上。CatD高表达慢病毒转染组CatD mRNA、蛋白表达及活性均较另2组显著上调（均P < 0.05）。CatD高表达慢病毒转染 + AGE-BSA组24 h内AGE-BSA的降解率显著高于AGE-BSA组和空载病毒转染 + AGE-BSA组（均P < 0.05）。结论 CatD可促进皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的AGE-BSA。     

持续镇静在重症肺炎机械通气患儿中的应用价值研究

目的探讨持续镇静在重症肺炎机械通气患儿中的应用价值。方法将2008年1月—2012年6月我院收治的80例重症肺炎需要行机械通气的患儿随机分成对照组和观察组,各40例。对照组进行机械通气后,采取常规治疗手段;观察组在此基础上对患儿进行持续镇静。比较两组患儿动脉血气分析指标(pH、PaO2、PaCO2、SaO2)、机械通气相关性肺炎发生率、重复插管发生率、病死率及机械通气天数。结果机械通气后观察组患儿pH、PaCO2、PaO2及SaO2异常率低于对照组(P0.05);PaCO2低于对照组,PaO2和SaO2高于对照组(P0.05);机械通气相关性肺炎发生率、重复插管发生率、机械通气天数及病死率均低于对照组(P0.05)。结论持续镇静能有效改善重症肺炎机械通气患儿的异常动脉血气指标,降低不良事件,减少医疗费用,具有极高的临床应用价值。     

无创呼吸机治疗老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并呼吸衰竭的临床疗效研究

目的探讨无创呼吸机治疗老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并呼吸衰竭的临床疗效。方法选取我院1998—2011年呼吸内科收治的老年AECOPD合并呼吸衰竭患者120例,将其随机分为无创呼吸机治疗组和常规治疗对照组,各60例。常规治疗对照组患者仅给予常规治疗,无创呼吸机治疗组患者在常规治疗的基础上加用无创呼吸机。观察两组患者临床疗效,比较两组患者治疗前后心率、呼吸频率及动脉血气分析指标变化。结果无创呼吸机治疗组患者治疗有效率为85%(51/60),高于常规治疗对照组的50%(30/60)(P0.05);病死率为5%(3/60),低于常规治疗对照组的25%(15/60)。治疗前两组患者心率、呼吸频率、pH值、PaO2、PaCO2及SaO2比较,差异均无统计学意义(P0.05);治疗后无创呼吸机治疗组心率、呼吸频率及PaCO2低于常规治疗对照组,pH值、PaO2及SaO2高于常规治疗对照组(P0.05)。结论无创呼吸机治疗老年AECOPD合并呼吸衰竭疗效显著,可以有效改善患者心率、呼吸及动脉血气分析指标,降低病死率,是一种有效且安全的方法。     

皮肤组织蛋白酶D表达与晚期糖基化终末产物堆积的相关性研究

目的 研究组织蛋白酶D（CatD）与晚期糖基化终末产物（AGE）在不同年龄、不同曝光程度皮肤中的表达及其相关性,初步探讨CatD在光老化皮肤AGE降解和堆积中的作用。方法 15 ~ 20岁、35 ~ 40岁、55 ~ 60岁及75 ~ 80岁患者曝光和非曝光部位皮肤组织,共8组,每组6份。采用免疫组化和免疫荧光双染法分别检测CatD和AGE在各组皮肤中的表达。采用析因设计方差分析、Wilcoxon秩和检验和Kruskal?Wallis秩和检验分析CatD和AGE表达与年龄、曝光的关系,并用Pearson相关系数分析CatD和AGE两者表达的相关性。结果 免疫组化显示,CatD表达随年龄增加而明显下降,而AGE的沉积则随年龄增加而逐渐增多;曝光部位CatD表达较同年龄组非曝光部位明显降低,而AGE沉积比同年龄组非曝光部位明显升高。析因设计方差分析显示,曝光会降低CatD的表达（F = 58.70,P < 0.001）,但会增加AGE的表达（F = 158.18,P < 0.001）。年龄的增长亦会引起CatD表达降低（F = 79.49,P < 0.001）,但AGE表达随年龄的增长而增加（F = 106.06,P < 0.001）。除了15 ~ 20岁年龄组,其他年龄组曝光组和非曝光组间CatD（35 ~ 40岁组：0.020 ± 0.005比0.032 ± 0.005;55 ~ 60岁组：0.012 ± 0.004比0.026 ± 0.002;75 ~ 80岁组：0.002 ± 0.001比0.013 ± 0.004）和AGE平均吸光度值（35 ~ 40岁组：0.030 ± 0.008比0.010 ± 0.003 ;55 ~ 60岁组：0.066 ± 0.010比0.021 ± 0.004 ;75 ~ 80岁组：0.085 ± 0.015比0.035 ± 0.009 ）差异均有统计学意义（均P < 0.001）。在固定曝光因素各水平条件下,不同年龄组间CatD和AGE表达差异亦均有统计学意义（均P < 0.001）。免疫荧光双染结果与免疫组化结果相似。Pearson相关分析显示,曝光部位皮肤CatD表达与AGE沉积呈高度负相关（r = -0.915,P < 0.05）,在非曝光皮肤中两者呈中度负相关（r = -0.730,P < 0.05）。结论 随年龄增长皮肤组织中CatD表达水平下降,而AGE表达水平上升。非曝光部位皮肤CatD和AGE表达呈中度负相关,曝光部位皮肤CatD和AGE表达呈高度负相关,CatD很可能在光老化皮肤AGE降解和堆积中起重要作用。