骨髓干细胞在肝纤维化中的作用

近年来,对骨髓干细胞向肝细胞分化,并对肝纤维化的治疗作用的研究日益增多.随着研究的不断深入有研究者也对这个观点提出反对意见,认为骨髓干细胞没有这种能力,同时还有一些研究者提出骨髓干细胞可以分化成为星状细胞或者成纤维细胞,从而参与肝纤维化的发生.本文将骨髓干细胞在肝纤维化中的作用作一阐述.     

人脐带间充质干细胞体外长期培养及向肝样细胞的分化

目的：观察人脐带间充质干细胞体外长期培养的生物学特性,探讨其向肝样细胞分化的可能性。 方法：脐带来源于天津市第三中心医院住院的健康足月产妇,采用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,待细胞生长至80%~90%融合时传代。取传至第9代细胞接种于12孔板内,调整细胞浓度为5×1010 L-1,加入含肝细胞生长因子、成纤维生长因子4、抑瘤素的DMEM培养基,诱导28 d。MTT法测定细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学及流式细胞仪鉴定细胞表型;免疫细胞化学染色鉴定诱导后肝细胞特异表面标志物的表达,以及糖原染色结果。 结果：从人脐带中分离得到的间充质干细胞贴壁生长,形态类似于成纤维细胞,80%以上处于G0/G1期,具有良好的生长活性,可在体外稳定传代20次以上;CD29,CD90,CD105,Vimentin呈阳性表达,基本不表达造血细胞标志CD34和内皮细胞标志CD31。随诱导时间的延长,圆形细胞逐渐增多,形态似肝细胞;诱导1周时细胞开始表达肝细胞表面标志物甲胎蛋白、细胞胶蛋白18、细胞胶蛋白19;诱导3周时开始表达成熟肝细胞标志白蛋白;诱导4周时白蛋白表达增强,且诱导细胞糖原染色呈阳性。 结论：从人脐带中可成功分离出间充质干细胞,实现体外长期培养,并可诱导分化为肝样细胞。     

胎肝间充质干细胞和皮肤成纤维细胞有限细胞系的建立及肝向分化研究

通过体外长期培养胎肝间充值干细胞和皮肤成纤维细胞,建立两种细胞长期培养体系并比较此两种细胞的表型特征及向肝细胞分化的潜能。方法 从人胎肝中分离贴壁生长的间充质干细胞,同时取同一个体的皮肤组织,分离培养成纤维细胞。采用免疫细胞化学法及流式细胞术检测上述两种细胞的CD34,CD90,CD105等细胞表型;染色体分析及软琼脂...     

Wnt途径拮抗剂Dickkopf-3蛋白在肝细胞癌中表达亚细胞定位及临床意义

  目的  分析Wnt途径拮抗剂Dickkopf-3(DKK3)蛋白在肝细胞癌中表达和亚细胞定位, 探讨其在肝细胞癌中的临床意义。  方法  采用细胞免疫荧光和免疫组织化学方法, 分析肝癌细胞系及43例肝细胞癌与相应癌旁组织中DKK3的蛋白表达, 并对其中31例中DKK3基因的甲基化状态进行检测。  结果  DKK3蛋白在肝细胞癌组织中的高表达率为67.4%(29/43), 显著高于相应癌旁组织中的41.8%(18/43)(P=0.017), 且细胞核内呈明显高表达; 肝细胞癌组织中DKK3基因甲基化发生率为90.3%(28/31), 显著高于相应的癌旁组织中的64.5%(20/31)(P=0.015), DKK3基因的甲基化状态与蛋白表达无明显相关性(P=0.844);DKK3低表达的肝细胞癌患者5年总生存率和无瘤生存率明显高于高表达者(P=0.049, P=0.001)。  结论  肝细胞癌中DKK3基因的甲基化状态可能与肝细胞癌中DKK3蛋白表达呈负相关; DKK3在癌组织中的高表达可能对肝细胞癌具有促进而非抑制性作用, 可以作为判断肝细胞癌预后的指标。      

人脐带间充质干细胞分泌物对肝细胞增殖和凋亡的影响

Objective To investigate the effect of human umbilical cord mesenchymal stem cell paracrine substance on proliferation and apoptosis of liver cells in vitro. Methods Mesenchymal stem cells (MSC)were separated from human umbilical cord with type Ⅳ collagenase and trypsogen digestion method and cultured in vitro. The human umbilical cord mesenchymal stem cells-conditioned medium(MSC-CM) which contain paracrine substance of human umbilical cord mesenchymal stem cells (HUCMSC) was prepared. Hepatocytes were isolated from SD rats by low concentration collagenase perfusion procedure. There were three groups in the experiment, control group, 2% MSC-CM group and 8% MSC-CM group. The proliferation of normal hepatocytes were assayed with MTT method. We detected the urea and albumin level in culture supernatant to assay the hepatocyte function under different concentration MSC-CM. Hepatocytes were induced for apoptosis by Actinomycin D and tumor necrosis factor alpha (TNF-α),and the apoptosis effect of different concentration MSC-CM was assayed with LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit. Results The MTT assay showed that the absorbance of 2% MSC-CM group was significantly increased (P＜0. 01), and the urea and albumin levels of 2 % MSC-CM group were also significantly increased when compared with control group(P＜0. 01).LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit revealed that hepatocyte survival rate of 2 % MSC-CM group was increased when compared with control group(P＜0. 05), there were no significant differences in above-mentioned experiments when 8% MSC-CM group compared with control group. Conclusion The low concentration MSC-CM could stimulate normal hepatocyte proliferation, inhibit impaired hepatocyte apoptosis and improve hepatocyte function.     

肢体语言结合称赞性语言对小儿护理的应用价值分析

目的 分析小儿临床护理干预中应用肢体语言结合称赞性语言的价值及效果。方法 纳入 2020 年 5 月至 2021 年 6 月在我 院开展治疗的 70 例患儿,用奇偶数的方式分为参照组和观察组。参照组实施常规的护理干预,观察组在此基础实施肢体语言 结合称赞性语言护理。分析对比临床中的护理依从性、护理质量以及护理效果。结果 观察组护理依从性相比参照组较高（P<0.05）。 观察组临床护理质量各项指标评分相比参照组较高（P<0.05）。观察组护理不良事件以及并发症等发生率相比参照组较低 （P<0.05）。结论 肢体语言结合称赞性语言应用在小儿护理干预中有较好的效果,可以提高患儿在临床中的依从性以及配合度, 保证护理工作的顺利开展。     

大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基对大鼠肝癌细胞系CBRH-7919增殖能力的影响

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基对大鼠CBRH-7919肝癌细胞增殖能力的影响。方法：分离Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,鉴定后进行体外培养,制备骨髓间充质干细胞条件培养基（BMSC—CM）,MTT比色法检测BMSC—CM对7919肝癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测BMSC—CM对7919肝癌细胞周期的影响,EHSA检测BMSC-CM对7919肝癌细胞分泌AFP的影响。结果：MTT比色法结果显示：25％、50％、75％及100％BMSC—CM组的吸光度值（A值）分别为：0．395±0．050、0．459±0．079、0．501±0．084及0．566±0．099,各组均高于0BMSC—CM组（0．277±0．064）（P均〈0．05）,并且随着浓度的增加,A值逐渐升高,呈浓度依赖性。流式细胞仪结果显示：25％、50％、75％及100％BMSC—CM组的细胞增殖指数均高于0BMSC—CM组,P均〈0．05,差异有统计学意义,并且随着浓度的升高,细胞增殖指数逐渐增加。ELISA结果显示：25％、50％、75％及100％BMSC—CM组的AFP值分别为：12．562±0．071、14．660±0．106、16．397±0．058及23．196±0．137,均高于0BMSC—CM组（3．143±0．033）（P均〈0．05）,并且随着浓度的增加,AFP值逐渐升高。结论：大鼠骨髓间充质干细胞的条件培养基可以促进大鼠肝癌细胞系CBRH-7919肝癌细胞的增殖。     

外周血IL-6对早期肝癌微波消融后复发的预测

目的 探讨血清中白细胞介素-6(IL-6)和IL-22对早期乙型病毒性肝炎相关肝细胞癌患者(HBV-HCC)微波消融(MWA)治疗后复发的预测作用.方法 收集49例经MWA治疗早期HBV-HCC患者术前外周血,应用ELISA检测外周血IL-6与IL-22的含量,同期30例健康人作对照.据x-tile软件计算cut-off值将IL-6和IL-22水平分为高水平组和低水平组,Kaplan-Meier分析两组的无瘤生存期,Log rank检验差异性,Cox回归筛选影响HBV-HCC复发的危险因素.结果 HCC组的IL-6与IL-22水平明显高于对照组(IL-6:13.20(11.87～15.79) pg/ml和10.47(9.50～13.82) pg/ml,P=0.001;IL-22:42.18(34.39～57.44) pg/ml和25.45(22.31～30.12) pg/ml,P＜0.001).Kaplan-Meier分析显示HCC患者术前低IL-6、高总胆红素和低白蛋白水平预示较短无瘤生存期,IL-22对HCC复发的影响差异无统计学意义.Cox回归多因素分析显示低IL-6(≤13.2 pg/ml,HR:3.721,95％CI:1.674～8.272,P=0.001)与低白蛋白水平(≤41.0 g/L,HR:2.085,95％CI:1.101～3.950,P=0.024)是影响肝癌复发的独立危险因素.结论术前IL-6和白蛋白水平可作为MWA治疗HBV-HCC患者预测复发的指标.     

人脐带间充质干细胞分泌物对肝细胞增殖和凋亡的影响

Objective To investigate the effect of human umbilical cord mesenchymal stem cell paracrine substance on proliferation and apoptosis of liver cells in vitro. Methods Mesenchymal stem cells (MSC)were separated from human umbilical cord with type Ⅳ collagenase and trypsogen digestion method and cultured in vitro. The human umbilical cord mesenchymal stem cells-conditioned medium(MSC-CM) which contain paracrine substance of human umbilical cord mesenchymal stem cells (HUCMSC) was prepared. Hepatocytes were isolated from SD rats by low concentration collagenase perfusion procedure. There were three groups in the experiment, control group, 2% MSC-CM group and 8% MSC-CM group. The proliferation of normal hepatocytes were assayed with MTT method. We detected the urea and albumin level in culture supernatant to assay the hepatocyte function under different concentration MSC-CM. Hepatocytes were induced for apoptosis by Actinomycin D and tumor necrosis factor alpha (TNF-α),and the apoptosis effect of different concentration MSC-CM was assayed with LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit. Results The MTT assay showed that the absorbance of 2% MSC-CM group was significantly increased (P＜0. 01), and the urea and albumin levels of 2 % MSC-CM group were also significantly increased when compared with control group(P＜0. 01).LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit revealed that hepatocyte survival rate of 2 % MSC-CM group was increased when compared with control group(P＜0. 05), there were no significant differences in above-mentioned experiments when 8% MSC-CM group compared with control group. Conclusion The low concentration MSC-CM could stimulate normal hepatocyte proliferation, inhibit impaired hepatocyte apoptosis and improve hepatocyte function.     

人脐带间充质干细胞分泌物对肝细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC MSC)旁分泌物质在体外对肝细胞再生和凋亡的影响.方法 利用Ⅳ型胶原酶和胰酶消化法从脐带中分离间充质干细胞,制备含有HUCMSC旁分泌物质的条件培养基(mesenchymal stem cells-conditioned medium,MSC-CM),采用低浓度胶原酶原位循环灌流法分离肝细胞.试验分为对照组、2%MSC-CM组和8%MSC-CM组三组.采用MTT比色法观察不同浓度MSC-CM对正常肝细胞增殖的影响.测定上清中尿素、白蛋白的含量,观察不同浓度MSC-CM对肝细胞功能的影响.利用放线菌素D和肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡,采用细胞活性分析试剂盒检测不同浓度MSC-CM对肝细胞凋亡的影响.结果 与对照组比较,2%MSC-CM组吸光度(A)540nm值(P＜0.01)以及上清尿素和白蛋白含量显著升高(P＜0.01),肝细胞存活率增加(P＜0.05);8%MSC-CM组与对照组无显著差异.结论 低浓度的MSC-CM在体外可以刺激正常肝细胞再生,抑制受损肝细胞凋亡,改善肝细胞功能.