甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析

目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。     

甲型H1N1流感病毒HA基因与沙门菌fljB基因的融合表达与鉴定

目的 研发基于鞭毛蛋白的新型甲型H1N1流感疫苗。方法 分别以鼠伤寒沙门菌SL7202基因组和含有甲型H1N1流感病毒HA基因的重组质粒pET-HA为模板, 通过 PCR扩增Ⅱ相鞭毛蛋白fljB和HA1-2基因,再通过overlap PCR将这两基因片段拼接成HA1-2-fljB,将其插入原核表达质粒pET30a(+),构建重组质粒pET-HA1-2-fljB,并转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3) 中,以 IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白HA1-2-fljB的表达。结果 正确构建出重组质粒pET-HA1-2-fljB,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,融合蛋白分子量约94 KD,并具有良好的免疫反应性,能强烈诱导HEK293-mTLR5细胞分泌IL-8。结论 成功表达具有TLR5生物学活性的融合蛋白HA1-2-fljB, 为研究甲型H1N1流感疫苗奠定了基础。