负调节子SODD在TNFR-Ⅰ信号转导中的研究

SODD是一由457个氨基酸编码的分子量约为60kD的胞浆蛋白质,广泛表达于人类各组织细胞中,其作用主要是在TNFR-Ⅰ信号转导通路中充当负调节子,阻止TNFR-Ⅰ信号转导通路呈持续激活状态,以稳定内环境,维持正常生命过程。病理状态下,SODD过表达的组织细胞对细胞表面死亡受体介导的凋亡敏感性降低,对化疗药物表现出耐受性。     

长春新碱通过下调SODD蛋白表达诱导白血病细胞凋亡新机制研究

 目的研究死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)、caspase3、caspase8及caspase9在长春新碱诱导Jurkat白血病细胞凋亡过程中的变化,探讨长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡的新机制。方法采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测长春新碱(VCR)作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;ELISA酶联免疫吸附技术检测VCR作用Jurkat细胞后TNF-α分泌的变化;采用RT-PCR检测VCR对细胞,TNFR1mRNA表达的调节。结果Jurkat白血病细胞SODD蛋白高表达且高表达的SODD蛋白抑制肿瘤细胞凋亡,VCR能特异下调SODD蛋白的表达,有效诱导Jurkat细胞凋亡,但并不影响细胞TNF-α的分泌及TNFR1的表达;VCR诱导细胞凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9在该凋亡过程中无明显变化趋势。结论VCR下调SODD蛋白表达并启动外源性凋亡途径caspases级联(caspase8、caspase3),最终诱导Jurkat细胞凋亡,且VCR下调SODD蛋白的表达无需激活TNF/TNFR1信号途径即可导致凋亡的发生。     

儿童白血病细胞DNA含量及细胞周期的临床分析

目的:探讨小儿急性白血病(AL)患者骨髓细胞周期分布与分型和治疗的关系。方法:应用图像分析系统测定96例小儿AL骨髓单个核细胞DNA含量和细胞周期。结果:不同类型的AL异倍体发生率不同,急性淋巴细胞白血病(ALL)异倍体率55.7%(44/79),明显高于急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的29.41%(5/17),T-ALL异倍体率(77.42%)明显高于B-ALL(41.67%),统计学差异均有显著意义。AL初诊病例和复发病例的G0/G1期细胞比例高于完全缓解组和对照组,G2M+S期比例低于完全缓解组和对照组(P<0.05),完全缓解组和对照组无显著差异。结论:图像分析系统对AL尤其是ALL异倍体的分析,有利于判断高危ALL,对细胞周期的测定给化疗个体化提供了具体的参考指标。     

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目的探讨儿童急性白血病SODD和P65蛋白的表达及其临床意义。方法2004年3～11月采用免疫组化SABC法,检测华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科住院急性白血病(AL)患儿骨髓涂片中SODD、P65蛋白表达。结果33例AL中,SODD和P65表达阳性率分别为54.5%(18/33)和45.5%(15/33),与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);25例急性淋巴细胞白血病(ALL)中,SODD和P65表达的阳性率分别为56.0%(14/25)和48.0%(12/25),与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)。ALL高危病例组中SODD阳性表达率为75.0%(12/16),较标危病例组阳性率高,差异有显著性(P<0.05)。33例AL患儿中SODD和P65均为阳性12例,均阴性16例,表达一致符合率为84.8%(28/33),两者的表达呈正相关(P<0.01,r=0.69)。结论SODD和P65均参与了AL的发生发展;SODD过表达与儿童ALL的发生、临床分型以及预后均有密切关系。     

死亡结构域沉默子和p65在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及与化疗的关系

目的 探讨凋亡调控基因死亡结构域沉默子(SODD)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达、临床意义及与磷酸化-NF-κB-p65表达的相关性,研究ALL 2种常用化疗药物对SODD表达的影响,试图寻找化疗新靶点.方法 免疫组织化学SABC法检测25例儿童ALL骨髓细胞SODD、p65蛋白表达水平;长春新碱(VCR)处理Jurkat细胞后,Annexin-V-Fluorescence/PI双标记的流式细胞术检测细胞凋亡发生率,免疫印迹法检测SODD及p65在化疗药物作用下的表达变化.结果 25例ALL中,SODD和065表达的阳性率较健康对照组高,其中高危病例组SODD阳性表达率较标危病例组阳性表达率高,有显著性差异(Pa＜0.05),且骨髓细胞中SODD与p65表达呈正相关(r=0.69 P＜0.01);VCR能有效诱导Jurkat细胞凋亡,在该凋亡过程中,SODD及p65表达下调,并呈时间依赖性,但柔红霉素(DNR)不能有效下调SODD的表达.结论 SODD和p65均参与了ALL的发生发展,且存在一定的协同关系,SODD与ALL临床分型及预后有密切关系;VCR特异下调白血病细胞中SODD的表达及抑制NF-κB的活化,恢复白血病细胞的凋亡敏感性.     

全反式维甲酸联合肝动脉化疗栓塞治疗大鼠移植性肝癌的实验研究

目的评价全反式维甲酸（ATRA）联合肝动脉化疗栓塞术（TACE）治疗大鼠移植性肝癌的疗效。材料和方法将27只Wistar大鼠采用移植法建立Walker-256肝癌模型,于移植术后11天后行MRI检查,测量肿瘤体积（V1）,再随机分成3组：A组：经肝动脉灌注ATRA0.1mg＋MMC0.05mg＋超液态碘油0.05ml＋0.025mg明胶海绵粉;B组：MMC0.05mg＋超液态碘油0.05ml＋0.025mg明胶海绵粉;C组：经肝动脉灌注生理盐水0.2ml。14天后再行磁共振检查以确定肿瘤体积（V2）,对三组间肿瘤生长率（V2/V1）进行比较。通过病理检查检测A、B、C三组间肿瘤大体表现及组织学表现,通过免疫组织化学方法检测von-Willebrandfactor（Ⅷ因子）和Ki67在肿瘤组织中的表达。结果27只大鼠经MRI检查证实均种植成功。A、B、C三组间肿瘤生长速率不完全相同（P〈0.01）,肿瘤大小术前分别为88.26±3.47mm3,87.91±5.63mm3,87.08±6.51mm3;术后两周分别为389.77±54.13mm3,609.05±106.91mm3,1116.64±120.96mm3,两两比较各组间均有显著性差异（P〈0.05）;A组肿瘤呈膨胀性生长,界限清楚,B组呈膨胀-浸润性生长,界限较模糊,C组标本光镜下提示肿瘤界限难以分清,呈现浸润性生长;A、B、C三组Ⅷ因子和Ki67阳性表达率均依次增高。结论全反式维甲酸（ATRA）联合肝动脉化疗栓塞术（TACE）对大鼠移植性肝癌具有显著的生长抑制作用,其疗效优于单纯的TACE。     

TRAIL受体在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的4种受体TR1～R4在儿童急性白血病(AL)中的表达,及其与临床分型和预后的关系.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定22例AL患儿(AL组)和10例骨髓正常的非恶性血液病患儿(对照组)TR1～R4 mRNA的表达情况.结果 AL组死亡受体DR4(TR1)和DR5(TR2)mRNA的表达明显高于对照组(P<0.01);而AL组蒙骗受体DcR1(TR3)和DcR2(TR4)mRNA的表达明显低于对照组(P<0.05).AL组与对照组均表达DR5,但AL组内DR5表达相对量明显高于DR4,差异具有统计学意义(P<0.05).AL患儿不同亚型之间TRAIL受体表达差异无统计学意义.结论 TRAIL受体TR1～R4在儿童急性白血病中表达有明显差异性,TRAIL及其受体在白血病细胞凋亡中起重要作用.     

死亡结构域沉默子在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及对化疗疗效的影响

急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童最常见的恶性肿瘤,其发生与细胞凋亡相关基因的表达及调控异常有关[1].     

Survivin在儿童急性白血病中的表达和P53的相关性及其临床意义

目的探讨Survivin在儿童急性白血病(AL)中的表达及其与抑癌基因P53的相关性，同时观察Survivin与急性淋巴细胞白血病(ALL)临床分型的关系。方法应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)方法，检测华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科2004年1~7月收治的37例儿童AL骨髓细胞Survivin和P53的表达，对照组为10例非恶性血液病且骨髓正常患儿。结果在37例AL患儿中，Survivin蛋白表达阳性率为35.14%，P53表达阳性率为32.43%，显著高于正常骨髓组织(P均<0.05)，Survivin和P53表达呈强相关性(P<0.05)，Survivin在高危(HR)ALL患儿的表达为46.15%，在标危(SR)ALL患儿的表达为0，差异有显著性意义(P<0.05)。结论(1)Survivin在儿童AL中异常表达，且与ALL的临床分型有关，提示其在判定儿童ALL预后中有意义；(2)抑癌基因Ｐ53的失活与Survivin的表达可能在AL发生中起协同作用。 Abstract Objective To investigate the expression of Survivin in pediatric acute leukemia and its relationship with expression of P53 and clinical significance.Methods The expression of Survivin and P53 proteins were detected by immunohistochemical assay in 37 acute leukemia children.The control included 10 children with normal bone marrow.Results Survivin protein expression rate was 35.14% and P53 protein expression rate was 32.43% in 37 AL children.Both of them were significantly higher than that in control group (P<0.05).The expression of Survivin and P53 being strongly related (P<0.05).The expression rate of Survivin was 46.15% in HR ALL and 0% in SR ALL,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion (1)Survivin protein expression rate is abnormal and is associated with the clinical typing of ALL.It may play an important role in the prognosis of ALL.(2)Expression of Survivin and de activation of anti oncogene P53 might play synergetic roles in the process of genesis of AL. Key words Survivin;P53;Children;Acute leukemia     

SODD和Survivin在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的作用

为了研究死亡结构域沉默子（SODD）、survivin、caspase3、caspase8及caspase9在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的变化,以进一步明确凋亡调控基因的调控机制和寻找药物作用新靶点,采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测化疗药物作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化;采用免疫组织化学SABC法检测survivin蛋白表达的变化。结果表明：SODD及survivn高表达均抑制肿瘤细胞凋亡,VCR具有时间依赖性特异下调SODD蛋白的功能并能有效诱导Jurkat细胞凋亡,在该凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9及survivin均无明显变化趋势。结论：SODD参与了VCR诱导白血病细胞凋亡过程,VCR通过下调SODD表达并启动受体配体介导途径诱导Jurkat细胞凋亡,在该过程中线粒体凋亡途径并未被启动。