猪囊尾蚴抗原基因GP50的表达及鉴定

目的为了寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子,克隆猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并进行表达、鉴定。方法设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴抗原GP50基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,然后在真核表达载体pBKCMV中亚克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot观察表达结果。结果RT-PCR法扩增出一条大小约897bp的特异性片段,克隆质粒pGEM-GP50和真核表达质粒pBKCMV作BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段。诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约36kDa大小的融合蛋白条带,Western blot结果显示其可与猪囊尾蚴病人血清起反应。结论本实验成功地克隆了猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并在原核细胞中进行了表达及鉴定,为进一步的免疫诊断研究奠定了基础。     

一种新的猪囊尾蚴蛋白的cDNA分子筛选、序列分析和克隆

目的免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,为猪囊尾蚴病临床免疫学诊断提供新的候选抗原分子。方法利用脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,测序后与生物信息网站进行分析,并将一个类似血吸虫核糖体蛋白的基因克隆入PMD-18T载体。结果从cDNA文库中筛选出1个编号为5H的基因,长度是528bp;对其编码的氨基酸序列的分析显示其与日本血吸虫的L18a核糖体蛋白具有高度同源性。结论克隆了猪囊尾蚴的未知核糖体蛋白基因。     

犬弓首线虫感染小鼠脑组织细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax的表达

目的研究犬弓首线虫(Toxocaracanis)感染小鼠脑组织细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、baxmRNA表达情况,探讨幼虫移行症对脑组织细胞影响可能机理。方法取狗小肠内犬弓首线虫成虫进行解剖,取子宫段的虫卵培养至感染期,感染小鼠后不同时间段取脑组织采用流式细胞仪检测小鼠脑组织细胞凋亡;应用原位杂交技术检测bcl-2、baxmRNA表达情况。结果1.犬弓首线虫子宫段虫卵经培养有98%达感染期。2.病理切片HE染色均见感染小鼠脑组织有犬弓首线虫幼虫。3.流式细胞仪检测小鼠脑组织细胞凋亡10d、15d、20d、25d对照组与实验组比较,具统计学意义差别(P<0.05);各时间段原位杂交方法显示bcl-2、baxmRNA均无显著表达,与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论1.犬弓首线虫感染小鼠早期,脑组织细胞有不同程度细胞凋亡出现。2.其细胞凋亡与凋亡基因bcl-2、bax无明显关系。     

猪囊尾蚴Ts3基因的克隆表达及编码蛋白的结构预测

目的寻找猪囊尾蚴病诊断抗原候选分子基因。方法用猪囊尾蚴病患者血清免疫筛选cDNA文库,用生物学软件EXPASY预测分析所获阳性蛋白基因(Ts3)及其编码蛋白的理化性质。对Ts3基因进行克隆,构建原核表达载体pET28a(+)-Ts3,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析观察其表达情况。结果获得大小为531bp的含完整阅读框(ORF)DNA序列的基因Ts3(GenBank登录号为EU338456),预测分析该蛋白结构和理化性质比较稳定,为非跨膜蛋白和含有较多蛋白激酶C磷酸化位点;将Ts3基因克隆入载体pET28a(+)诱导表达,获得相对分子质量(Mr)约21000蛋白,并能被囊尾蚴病患者血清识别。结论囊尾蚴Ts3重组蛋白具有免疫反应性。     

猪囊尾蚴cDNA文库的免疫学筛选和新基因的发现

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选免疫学阳性蛋白的编码基因,为临床猪囊尾蚴患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原。方法用脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cDNA文库,阳性克隆经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的DNA片段,并将其克隆入PMD-18T质粒载体中,测序结果与GenBank中的核苷酸序列进行同源性分析。结果血清免疫学筛选后,从猪囊尾蚴cDNA文库中挑取了4个阳性斑,PCR后4个片段大小约在200～1800bp,3个大的片段测序结果经分析表明均含有完整开放阅读框,同源序列分析结果显示获得的3个基因片段与GenBank中已知的猪囊尾蚴蛋白基因无同源性。结论本试验中所发现的基因均是猪囊尾蚴新基因,为进一步基因克隆、表达和鉴定等研究奠定了基础。     

高校人体寄生虫学教学思考和实践

随着国民经济发展．医学的进步．人们卫生知识水平提高．曾经广泛流行而又严重影响人类健康的某些寄生虫病已经得到有效控制甚至达到基本消除。然而,人体寄生虫病依然存在,     

高校人体寄生虫学教学思考和实践

随着国民经济发展．医学的进步．人们卫生知识水平提高．曾经广泛流行而又严重影响人类健康的某些寄生虫病已经得到有效控制甚至达到基本消除。然而,人体寄生虫病依然存在,     

猪囊尾蚴Ts2基因的免疫筛选克隆及生物信息学分析

目的筛选并分析猪囊尾蚴新基因,为猪囊尾蚴病患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原及有效的疫苗候选分子。方法用猪囊尾蚴病患者血清抗体筛选猪囊尾蚴cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片段进行扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果筛选阳性克隆,经分析具有738bp完整开放阅读框,是1个新基因,登录号EU221317,命名为Ts2。结论成功克隆了猪囊尾蚴Ts2基因片段,为进一步实验提供了条件。     

猪囊尾蚴cDNA文库的筛选与重组蛋白的初步鉴定

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中免疫学筛选阳性蛋白的编码基因,以期获得囊尾蚴病新的免疫学诊断候选分子。方法免疫学筛选cDNA文库,用PCR法扩增出猪囊尾蚴候选蛋白基因编码序列,T载体连接,鉴定后将其亚克隆入pET28a(+)载体中,经酶切、测序证实正确后,转化入大肠杆菌BL21并用IPTG对该重组菌诱导表达,SDS-PAGE和Western blot方法观察表达结果。结果通过cDNA文库免疫筛选、测序和EXPASY软件分析,其一个684bp ORF DNA序列为新基因(命名为Ts1),录入号为EU009656;将Ts1基因克隆入pET28a(+)载体中诱导表达,可得到一分子量约28.0kDa融合蛋白,并能被囊尾蚴病人血清识别。结论本试验成功筛选、克隆出一个新囊尾蚴编码基因,并在原核细胞中表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础。     

日本血吸虫感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2的表达

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧光显微镜下观察：肝肉芽肿内可见似＂咖啡豆样＂散在分布的IL-13Rα2免疫阳性信号,巨噬细胞膜内缘呈异常增强的环状荧光。结论巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞,IL-13Rα2是血吸虫病重要的免疫病理调节分子。