呼吸系统感染高毒力肺炎克雷伯杆菌的临床和分子特征

目的了解呼吸系统感染高毒力肺炎克雷伯杆菌(hvKP)的临床特征、常用抗生素的耐药性和分子特征。方法收集中山大学附属第三医院2016年8月至2017年8月呼吸系统感染患者分离的62株肺炎克雷伯杆菌作为实验菌株,分析病例的临床特征,采用药敏实验检测菌株耐药性,利用PCR检测菌株的毒力质粒和耐药质粒的分布。结果 62株呼吸系统感染肺炎克雷伯杆菌中11株是hvKP,检出率为17.7%,其中1株hvKP发生迁徙感染,hvKP感染成人患者的最高体温为(38.6±0.9)℃,其中63.6%(7/11)的患者表现为中高热,而普通肺炎克雷伯杆菌(cKP)感染成人患者的最高体温为(37.8±0.9)℃,其中60.9%(28/46)的患者表现为低热或无发热。hvKP感染成人病例平均年龄(53.3±13.1)岁,低于cKP感染成人病例平均年龄(65.6±18.6)岁,66.7%(6/9)hvKP感染病例胸部CT表现为结节渗出阴影或脓肿,cKP感染病例中25.6%(11/43)胸部CT表现结节渗出阴影或脓肿。所有(11/11)hvKP菌株都含有毒力质粒pLVPK的部分基因rep、rmpA或iuc,其中毒力质粒pLVPK特有序列rep只存在于hvKP菌株。hvKP菌株对大部分抗生素敏感,目前未发现含有耐碳青霉烯质粒KPC-2基因的hvKP菌株,hvKP菌株均对碳青霉烯类抗生素敏感。结论呼吸系统感染的hvKP病例临床特征有别于cKP病例,hvKP菌株对大部分抗生素敏感性高并含有毒力质粒pLVPK基因,但未发现含有耐药质粒KPC-2的hvKP菌株,指导临床可使用碳青霉烯类抗生素治疗hvKP感染。     

结核分枝杆菌katG基因突变对异烟肼耐药性的影响

目的探讨结核分枝杆菌katG基因突变TGG328TTT(Trp328Phe)对异烟肼耐药性的影响。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床突变株DNA为模板,采用PCR扩增野生型和双突变型(含Trp328Phe与Met420Thr)katG基因,采用重叠延伸PCR技术构建单突变型(Trp328Phe)katG基因。将各katG基因重组至质粒pET22b(+),再导入表达宿主菌BL21(DE3)pLySs中,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对重组KatG蛋白进行分离纯化。通过各重组KatG蛋白与过氧化氢和邻联大茴香胺反应,检测受试菌过氧化氢酶和过氧化物酶的活性。结果成功获得纯化的KatG蛋白。相比野生型KatG(19.05U/mg和7.05×10-3 U/mg),单突变型KatG(10.50U/mg和2.23×10-3 U/mg)过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降44.9%和68.3%,双突变型KatG(11.88U/mg和3.31×10-3 U/mg)则分别下降37.6%和53.0%。结论 katG基因(Trp328Phe)突变引起KatG酶活性部分缺失,与异烟肼耐药有关,可作为耐药菌株基因检测的标志用于基因芯片的开发。双突变时KatG蛋白活性较高,提示katG-328TTT具有代偿性突变的作用。     

江西省结核分枝杆菌耐二线抗结核药的分子学特征

目的 初步明确江西省耐二线抗结核药相关基因突变的特征,评价等位基因特异性多重PCR（multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR）检测二线抗结核药耐药性的可行性。 方法 采用DNA测序方法和MAS-PCR技术,对江西省52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌进行耐药相关基因突变位点检测。 结果DNA测序分析：39株耐氧氟沙星（Ofx）菌株中,32株存在gyrA基因错义突变,2株发生gyrB基因错义突变。29株耐卡那霉素（Km）或卷曲霉素（Cm）菌株中,22株为rrs1401位点A→G突变。52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌,40株为北京基因型（76.92%,40/52）,其中17株北京基因型菌株发生gyrA-GAC94GGC突变（42.50%,17/40）,19株北京基因型菌株发生rrs-A1401G突变（47.50%,19/40）。北京基因型与基因突变类型gyrA-GAC94GGC和rrs-A1401G无明显相关性（χ²=1.16、1.92,P值均＞0.05）。MAS-PCR检测Ofx耐药株的敏感度为61.54%（24/39）,检测Km或Cm耐药株的敏感度为79.31%（23/29）。 结论 gyrA基因94位密码子突变是江西省结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制; rrs-A1401G突变则是Km或Cm耐药的主要原因。MAS-PCR方法对于快速检测二线抗结核药的耐药性有一定的临床应用价值。