旋毛虫Ts87重组蛋白诱导的小鼠黏膜免疫保护性研究

本实验探讨旋毛虫Ts87重组蛋白灌胃免疫小鼠诱导的黏膜免疫保护性作用。实验分对照组、佐剂组(霍乱毒素B亚单位组,CTB)和免疫组(CTB Ts87重组蛋白),灌胃免疫,间隔1周共免疫3次。末次免疫后第7天用400条旋毛虫感染期幼虫攻击,比较3组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数。且于末次免疫后第7天刮取肠黏液、取血检测特异性sIgA、IgG抗体水平。结果显示免疫组小鼠成虫减虫率、新生蚴减虫率、肌幼虫减虫率分别是81·34%、67·02%、84·49%;小鼠肠黏液sIgA水平及血清IgG水平显著高于对照组和佐剂组。结果表明Ts87重组蛋白黏膜免疫能够诱导小鼠产生抗旋毛虫的保护性免疫。灌胃免疫能显著提高肠黏液特异性sIgA水平,对促进肠道成虫的排出有明显作用。     

嗜酸性粒细胞在蠕虫感染免疫中的作用

嗜酸性粒细胞增多是蠕虫感染的重要特征。蠕虫造成的宿主上皮损伤能诱导2型免疫细胞的激活和分化。其中,嗜酸性粒细胞在细胞因子、趋化因子以及黏附分子的作用下发育成熟并募集到蠕虫感染部位,通过分泌一系列颗粒蛋白与免疫调节因子发挥免疫效应。本文就嗜酸性粒细胞和蠕虫之间关系的最新进展进行综述,探讨嗜酸性粒细胞对宿主的保护性免疫与病理损伤的两面性,及其对宿主机体的免疫调节作用。     

旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建

目的为寻找更多有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子,构建旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。方法以旋毛虫成虫cDNA文库为模板,进行PCR扩增。扩增产物500~2 000 bp之间的DNA片段用BamHⅠ、HindⅢ酶切,将酶切产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1,对部分转化子进行酶切鉴定。结果构建了插入片段在500~1 500 bp之间的旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库,90%以上的转化子都含有插入的DNA片段。结论成功构建一个旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。     

人体寄生虫学多媒体教学的应用

为深化教学改革、提高教学质量,多媒体技术作为一种新兴的教学手段和模式,已广泛应用于教学活动中。分析了在人体寄生虫学教学中应用多媒体技术的优势及存在的问题,并探讨了解决问题的对策,指出要正确认识它在教学中的作用。     

旋毛虫Hsp70与Ts87融合蛋白的构建表达及鉴定

本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70（Ts－Hsp70）与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白,并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRⅠ酶切位点将目的基因Ts－Hsp70与Ts87相连接,插入pET28－a （＋）质粒,转入大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达、纯化,获得的融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87用Western blot的方法鉴定。经PCR、酶切鉴定、测序分析,结果显示,目的基因片段大小为2721 bp,构建的重组质粒与预期相符。经IPTG诱导表达,通过镍离子柱层析纯化复性后得到可溶的融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87,其相对分子质量约为100 kDa; Western blot结果显示,该蛋白可被抗His标签单抗、 rTs－Hsp70免疫血清、 rTs87免疫血清识别。以上结果表明,本研究成功构建并表达了融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87,为进一步研究rTs－Hsp70－Ts87的免疫保护性,开发新的有效抗旋毛虫病的疫苗奠定基础。     

聚合酶反应扩增谷氨酸富有蛋白基因片段应用于恶性疟原虫基因分型

目的：建立恶性疟原虫谷氨酸富有蛋白（ＧＬＵＲＰ）基因分型诊断鉴别系统。方法：设计并合成两对针对恶性疟原虫ＧＬＵＲＰ基因的特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增ＧＬＵＲＰ基因Ｒ２多态区目的基因，并应用于泰国Ｂｏｒａｉ疟区恶性疟患者虫株基因分型。结果：在自然感染的恶性疟原虫株群中，ＧＬＵＲＰ基因存在明显的多态性。在１５４份恶性疟感染血样中，共检查出２９０个基因株，它们属于１２种ＤＮＡ片段长度不同的ＧＬＵＲＰ基因型；其中以７７０ｂｐ片段基因型较为常见，１１００ｂｐ片段基因型较少见。４３％以上病人为不同恶性疟原虫基因株混合感染者。在９个月的流行季节中，１２种不同基因株的频率构成比无明显变化。结论：建立ＧＬＵＲＰ基因分型诊断鉴别系统，将有助于疟原虫虫株分类和致病性研究，对疟疾的流行病学研究与防治具有实用意义。     

旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

目的　获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。　方法　旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入PET-28a(+)表达载体,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物,SDS-PAGE、ELISA和Westernblotting对表达产物进行分析鉴定,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果　SDS-PAGE结果显示,表达产物为分子量约为40kDa的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。　结论　获得一个新的旋毛虫成虫Ts87基因重组蛋白,该蛋白具有特异的抗原性。     

噬菌体展示技术的应用及研究进展

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面,利用外源蛋白或多肽与筛选靶标的特异性亲和作用,通过吸附、洗脱、扩增的重复过程,将含有特异性外源蛋白的噬菌体从表达有各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来,并得到大量富集,而后进行基因序列测定.1985年,Smith通过基因工程手段将外源蛋白质与噬菌体的次要外壳蛋白pⅢ形成融合蛋白展示于噬菌体颗粒表面,可保持相对独立的空间构象和生物活性,而不影响重组噬菌体对宿主菌的感染能力.与其他表达系统相比噬菌体展示技术具有显著的优点：可将基因型和表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起,是一种高效的筛选系统.最近几年, 噬菌体展示技术发展迅猛,在细胞信号转导、基因表达调控、人源单克隆抗体的制备、药物筛选和疫苗研制以及疾病诊断、治疗等研究领域得到广泛的应用.本文将概述用于筛选多肽噬菌体展示库所表达的外源蛋白的各种靶分子,并介绍此项技术在各个领域的应用.     

人体寄生虫学教学改革的实践探讨

针对传统教学中存在的薄弱环节，对人体寄生虫学课程的教学进行改革，并介绍了教学改革的探索与体会。