无绿藻感染一例

患者男,38岁.患者7个月前无意中扪及左侧颈部淋巴结肿大,无疼痛感,无发热、皮疹、牙龈肿痛、关节痛、体质量减轻等伴随症状.在外院予头孢呋辛治疗后无明显好转,因自觉病灶进行性增大入院.既往体健,幼年时曾有水库游泳史.体格检查:左侧耳后可触及直径为3 cm团块,与皮肤固定,表面皮肤无破损及皮疹.左侧颈部可及数枚肿大淋巴结,质软,可活动.血常规、T细胞分型、免疫球蛋白等检查未见异常.B型超声示左侧颈后部及左锁骨上多个大小不等、成串分布的淋巴结,边界清,髓质结构薄,血流少,较大者约26 mm×12 mm,左颈部包块为融合淋巴结.淋巴结穿刺活检见大量淋巴细胞,较多多核组织细胞,散在嗜酸粒细胞,符合肉芽肿病变.穿刺液涂片示大量孢子类真菌,见图1.淋巴结组织病理活检示淋巴结巨细胞性肉芽肿,结合PAS染色阳性,考虑为真菌性,见图2.光学显微镜下见真菌,培养有无绿藻生长,见图3.药物敏感试验:氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑耐药,两性霉素B敏感.予伊曲康唑400 mg,2 d;200 mg,12 d后颈部淋巴结明显缩小.出院随访2个月淋巴结无明显增大.     

不同毒力结核杆菌的纯化蛋白质衍生物对人巨噬细胞凋亡的诱导及其与Toll样受体-2的相关性

目的 了解两种不同毒力结核杆菌的纯化蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞(THP-1)凋亡的差异及其与Toll样受体-2(TLR-2)的相关性.方法 分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白(H37Rv-PPD)和低毒力结核杆菌衍生蛋白(BCG-PPD)在3、8、15和24 h刺激分化成熟的THP-1细胞;Hochest染色后观察细胞凋亡及坏死情况.流式细胞仪检测细胞Annexin V蛋白以判定凋亡及TLR-2表达情况;加入TLR-2阻断剂后,再用流式细胞仪测定细胞表面TLR-2的阻断效果及凋亡情况.结果 BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状.凋亡率随时间升高,第24小时凋亡比例高达30.2%,而同时间点TLR-2的比例为8.8%;应用TLR-2阻断剂后,每个时间点TLR-2表达比例均在3%以下,对应时间点凋亡比例下降,第24小时凋亡比例仅为10.5%.H37Rv-PPD可引起TLR-2高表达,第24小时TLR-2表达率为17.2%,该时间点凋亡率仅为7.7%;TLR-2阻断后,其表达率在对照波动范围内,但凋亡率与TLR-2未阻断前相比变化不大.结论 BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡,且与TLR-2有一定的相关性;而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死.

Abstract：

Objective To study the cell death in macrophages (THP-1) stimulated with different agonists (H37Rv-PPD or BCG-PPD) and to investigate the relationship between Toll like receptor (TLR)-2 and THP-1 apoptosis. Methods H37Rv-PPD and BCG-PPD were used to stimulate THP-1 cells for 3 h, 8 h, 15 h and 24 h, respectively with or without TLR-2 blockade. Cells were analyzed by flow cytometry to detect the TLR-2 expression. Annexin V staining and Hochest staining were performed to evaluate apoptosis. Results The apoptosis cells were increased when stimulated with BCG-PPD and the percentage was 30.2% at 24 h, which were confirmed by Hochest staining.However, the expression of TLR-2 did not increase simultaneously with percentage of 8.8% at 24 h.Nevertheless, most cells presented with necrosis form when stimulated with H37Rv-PPD and the expression of TLR-2 remained at high level with the percentage of 17.2% at 24 h, while the percent of apoptosis rate was only 7.7%. Under treatment of TLR-2 antibodies, the percentage of apoptosis decreased to 10.5% at 24 h of BCG-PPD stimulation and TLR-2 expressions were down-regulated to less than 3% at all time points; but after H37Rv-PPD stimulation, the percentage of apoptosis and TLR-2 expression did not changed obviously. Conclusions The attenuated BCG-PPD induces THP-1 apoptosis predominately, which is partially correlated with TLR-2 expression. While virulent H37Rv-PPD induces THP-1 necrosis predominately.     

BCG-PPD、H37Rv-PPD诱导入巨噬细胞死亡及TNF-α、IL-1β和IL-10的表达差异

目的 本实验对不同毒力结核杆菌的衍生蛋白(PPD)对人巨噬细胞(THP-1)的影响及其与TNF-αt、IL-1 β及IL-10的差异性进行研究.方法 用H37Rv-PPD和BCG-PPD分别在3 h、8 h、15 h及24 h四个时间点刺激分化成熟的THP-1细胞,再应用Hochest染色法,荧光镜下观察细胞的转归差异(凋亡及坏死情况),同时取上清用ELISA法测TNF-α、IL-1β及IL-10的浓度.结果 BCG-PPD刺激下细胞核以椭圆凋亡小体多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状,以坏死多见;BCG-PPD刺激下上清中TNF-α及IL-10的表达量低于H37Rv-PPD刺激组,但BCG-PPD刺激下IL-1β的表达量却高于后者.结论 提示高毒力菌株衍生蛋白(H37Rv-PPD)引起THP-1坏死的原因可能与TNF-α的过度表达有关,而凋亡少见可能与IL-10抑制凋亡作用有关,而低毒力菌株衍生蛋白诱导凋亡与IL-1β有关.可能菌株毒力差异就存在于菌株的蛋白成分之中,且与上述几种细胞因子密切相关.     

结核感染与Toll样受体

结核分枝杆菌感染仍是全球性的健康难题.迄今,全世界约有20亿人感染结核,占总人口数的1/3,并导致每年220万例患者死亡.与大多数感染不同,结核杆菌可在人体内长期潜伏而不被清除.感染人群中只有1/10会发展为活动性结核.     

成人EB病毒感染相关性疾病的临床特征及预后分析

目的探讨成人EB病毒感染相关性疾病的临床特征及预后。方法回顾性分析2017年1月至2019年8月于上海复旦大学附属华山医院住院的59例EB病毒感染相关性疾病患者的临床资料。比较传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)、慢性活动性EB病毒感染(chronic active Epstein-Barr virus infection,CAEBV)和淋巴瘤患者的临床表现。将患者分为急性病程组(IM)和慢性病程组(CAEBV⁺淋巴瘤),比较2组患者的实验室指标(血常规、肝功能、炎症指标、EB病毒DNA、EB病毒抗体和T淋巴细胞)检查结果。统计学处理采用曼-惠特尼U检验、χ²检验或Fisher确切概率法。结果59例EB病毒感染相关性疾病患者中,IM 23例(39.0%),淋巴瘤23例(39.0%),CAEBV 13例(22.0%);发热57例(96.6%),淋巴结肿大37例(62.7%)、脾大36例(61.0%)。慢性病程组有17例患者合并噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)。慢性病程组患者的白细胞计数、血红蛋白、血小板计数分别为4.07(1.94,8.35)×10⁹/L、89.5(74.5,108.0)g/L、100(37,161)×10⁹/L,分别低于急性病程组的9.91(6.75,17.38)×10⁹/L、132.5(118.2,152.0)g/L、197(129,233)×10⁹/L,差异均有统计学意义(U=3.69、5.22、3.61,均P<0.01)。慢性病程组患者的降钙素原、C反应蛋白、血清铁蛋白分别为0.45(0.15,1.13)μg/L、47.75(17.57,84.67)mg/L、2000(682,2002)μg/L,分别高于急性病程组的0.12(0.07,0.28)μg/L、6.39(3.13,11.38)mg/L、482(159,1271)μg/L,差异均有统计学意义(U=-2.95、-3.77、-4.16,均P<0.01)。慢性病程组患者的CD4⁺T淋巴细胞计数、CD8⁺T淋巴细胞计数、CD19⁺B淋巴细胞计数、自然杀伤细胞计数分别为259.15(101.98,509.26)、214.69(119.31,529.47)、46.14(4.44,135.87)和81.09(41.53,118.46)/μL,分别低于急性病程组的738.88(592.20,893.94)、1609.17(920.88,3952.34)、144.52(83.65,215.14)和309.82(123.78,590.68)/μL,差异均有统计学意义(U=3.66、3.80、2.90、3.40,均P<0.01);而CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值为0.90(0.60,1.70),高于急性病程组的0.45(0.10,1.28),差异有统计学意义(U=-2.29,P=0.02)。IM组23例患者均治愈;淋巴瘤组死亡10例,进行化学治疗13例;CAEBV组死亡7例,好转6例。结论成人EB病毒感染相关性疾病的临床特征以发热、淋巴结肿大、脾大为主,慢性感染可合并HLH。成人急性EB病毒感染预后较好,但长期慢性感染预后较差。     

人类免疫缺陷病毒合并结核感染患者外周血Vγ2Vδ2+T淋巴细胞的数量与功能变化

目的 探讨外周血Vγ2Vδ2+T淋巴细胞数与功能变化对HIV合并结核感染状态的影响.方法 将76例HIV/AIDS合并结核感染患者分为活动性结核感染组(HIV+TB组)和潜伏结核感染组(HIV+LTB组).流式细胞仪测定外周血淋巴细胞分类情况.酶联斑点免疫法(ELISPOT)和胞内细胞因子染色(ICS)方法 检测在PPD和磷酸化抗原(HMBPP)的刺激下T淋巴细胞亚群分泌IFN-γ功能的情况.统计学处理采用t检验.结果 HIV+TB组CD3+T淋巴细胞绝对计数(t=-3.67,P<0.01)和Vγ2Vδ2+T淋巴细胞所占CD3+T淋巴细胞比例(t=-2.06,P<0.05)均显著低于HIV+LTB组.PPD刺激时,HIV+LTB组分泌特异性IFN-γ的T淋巴细胞和参与分泌IFN-γ的CD4+T淋巴细胞所占CD3+T淋巴细胞比例,与HIV+TB组比较差异均无统计学意义.HMBPP刺激时,HIV+LTB组与HIV+TB组比较,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞计数(t=2.71,P<0.01)和产生IFN-7的特异性Vy2'T淋巴细胞比例(t=3.003,P<0.01)均显著增加.结论 Vγ2Vδ2+T淋巴细胞在HIV/AIDS合并活动性结核患者中的数量和功能都有受损,提示该类细胞在CD4+T淋巴细胞受到抑制的情况下可能是人体内抵御结核感染的重要免疫细胞.     

甲型H1N1流行性感冒患者疾病严重程度预测指标的初探

目的分析轻症和重症甲型H1N1流行性感冒(以下简称流感)患者外周血转录组的差异,评估影响患者疾病严重程度的指标。方法纳入2018年1月至5月上海复旦大学附属华山医院确诊的10例甲型H1N1流感患者(轻症组与重症组各5例),以健康人群(5名)作为对照。采集研究对象的外周血进行RNA转录组测序并分析其结果。计量资料比较采用t检验和Mann-Whitney U检验,计数资料比较采用Fisher确切概率法。转录组测序结果的数据分析采用生物信息学方法。结果重症组患者血小板计数为(163.4±21.5)×109/L,低于轻症组患者的(255.6±52.5)×109/L,差异有统计学意义(t=3.636,P=0.007)。两组患者的性别、年龄、白细胞计数、中性粒细胞比例、淋巴细胞比例和血红蛋白值的差异均无统计学意义(均P>0.05)。外周血转录组研究结果显示,重症组患者的外周血基质金属蛋白酶8(matrix metalloproteinase 8,MMP8)测序结果的平均值为18.41,高于轻症组的2.33及健康对照组的1.43,差异均有统计学意义(均P<0.01)。基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的平均值在重症组为174.00,高于轻症组的22.91和健康对照组的34.65,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论MMP8及MMP9有望作为判断甲型H1N1流感患者疾病严重程度的分子生物学标志物。     

酶联免疫斑点法检测肺结核患者特异性结核抗原多肽T细胞的应答

目的 评价我国酶联免疫斑点法(ELISPOT)用于诊断肺结核患者的应用价值.方法 结核特异性ELISPOT法检测76例诊断明确的肺结核患者外周血单核细胞.同时选择30例无结核接触史、胸部X线片无异常且PPI)皮试阴性的成年人作为对照.数据采用卡方检验和非参数Mann-Whitney检验.结果 76例患者总体阳性率为71.0%,健康对照组阳性率为6.7%.按照患者抗结核疗程分为治疗1个月内、治疗6个月内、治疗6个月以卜3组,阳性率分别为87.5%、74.1%和52.0%(X2=35.63,P=0.000).该技术在初治结核患者中的灵敏度为87.5%,特异度为93.3%,阳性预测值为91.3%,阴性预测值为90.3%.结论 结核特异性ELISPOT技术在我国初治(抗结核化疗疗程1个月内)的结核病患者中具有较高诊断价值.     

广泛播散型马尔尼菲青霉病一例

患者男,44岁,福建省福清市人.因"反复咳嗽20个月,皮下结节9个月,发热6个月",于2007年4月16日收入我院.患者自2005年8月起无明显诱因下出现频繁干咳.当地医院查CT示右肺炎症,双侧胸腔积液.纤维支气管镜下见右中叶、下叶间嵴息肉样肿物,黏膜充血、水肿致管腔狭窄.     

感染性心内膜炎97例临床分析

目的 了解近年来感染性心内膜炎(IE)的临床特点变化.方法 回顾性分析华山医院近10年收治的97例IE患者的临床资料,包括发病年龄、易感因素、临床表现、血培养及超声心动图检查.计量数值如患者发病年龄等以算术平均数±标准差表示,病例阳性数以百分比表示,对比分析采用Fisher确切概率法.结果 97例IE患者平均年龄(49±17)岁,有基础心脏病73例,占75.3％;前三位是风湿性心脏病27例(27.8％)、先天性心脏病23例(23.7％)、特发性二尖瓣脱垂18例(18.6％).临床表现为发热96例(99.0％)、心脏杂音93例(95.9％)、贫血82例(84.5％).血液细菌培养阳性66例(68.0％),其中草绿色链球菌28株(42.4％),仍为主要致病菌,且全部发生于自然瓣膜心内膜炎患者中;葡萄球菌18株(27.3％),金黄色葡萄球菌10株(15.2％),有3株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),凝固酶阴性葡萄球菌8株(12.1％),有2株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS);鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等耐药性强的病原菌各1株.超声心动图赘生物检出79例,占81.4％,其中右心赘生物9例,病原主要为葡萄球菌.结论 IE患者临床表现、易感因素、致病菌发生了变化,多次血培养及超声心动图检查有助于诊断.