云南省大理市洱海周边地区淡水螺广州管圆线虫感染调查

广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)是动物寄生虫,终宿主为哺乳动物,主要是鼠类,中间宿主是陆生螺类或淡水螺类,如福寿螺、玛瑙螺等[1,2].人常因生食或半生食含有广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的螺肉而感染,幼虫在人体内多停留在中枢神经系统,可导致嗜酸性粒细胞增多性脑炎或脑膜脑炎,严重者可导致死亡.近年来,随着人们生活水平的不断提高、饮食结构的变化和与外界接触的增多,广州管圆线虫病病例数迅速增加.大理市洱海周边居民素有食用螺类的习惯.因此,为了解该地区广州管圆线虫疫源地的分布和近期当地居民感染状况,本课题组于2009年10月至2010年10月,对该地区广州管圆线虫的中间宿主福寿螺以及当地居民喜食的洱海螺等感染源进行初步调查.     

大理地区志贺菌的血清型分布及多重PCR检测技术的应用

目的 探讨大理地区志贺菌的血清型分布以及多重PCR技术在志贺菌检测中的应用.方法 用常规分离培养、生化鉴定和血清学分型法对腹泻患者粪标本进行检测,分离到的标本再用多重PCR法对志贺菌的毒力基因shetA、shetB、ial和ipaH进行扩增检测.结果 通过常规培养和生化反应鉴定,得到68株志贺菌.血清学鉴定显示福氏志贺菌41株,宋内志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株.通过多重PCR扩增后68株志贺菌均在423 bp(ipaH)处出现了条带,检出率为100%,其余在147 bp(shetB)、309 bp(shetA)处以及320 bp(ial)处均出现了至少一个条带,与常规鉴定法的符合率达100%.5份直接用阳性粪便标本提取DNA为模板进行多重PCR扩增后,也得到了同样的结果.结论 大理地区细菌性痢疾患者感染以福氏志贺菌为主,多重PCR技术可用于志贺菌的快速检测和流行病学调查.     

幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的克隆及在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达

目的 构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(E.coli)和双歧杆菌(B.bifidium)中的表达情况.方法 通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔转化入大肠杆菌BL21和双歧杆菌.转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达的重组蛋白.结果 构建了重组质粒pGEX-vacA-hpaA,vacA-hpaA融合基因的分子量约为1548bp;经SDS-PAGE分析,在大肠杆菌中表达出85kD的融合蛋白,表达的蛋白约占细菌总蛋白的20.5％;在双岐杆菌中也能得到正确表达,但表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约8.5％.Western blotting结果确认了该条带为hpaA-vacA融合基因的产物.结论 构建的重组质粒pGEX-hpaA-vacA能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达.     

肠球菌esp基因与万古霉素耐药的相关性研究

目的了解医院重症监护病房来源的肠球菌的esp基因的分布及其与万古霉素耐药的相关性。方法菌落杂交法检测肠球菌esp基因的分布,微量稀释法测定细菌对万古霉素和替考拉林的MIC。结果 94株肠球菌（其中粪肠球菌63株,屎肠球菌31株）中esp基因阳性72株（72/94）占76.60%,esp基因阳性者万古霉素和替考拉林的耐药率明显高于esp基因阴性者。结论重症监护病房来源的肠球菌esp基因阳性率较高,与肠球菌耐万古霉素密切相关,值得重视。     

ICU肠球菌属esp基因分布及对万古霉素耐药的相关性研究

目的 了解医院重症监护病房(ICU)来源的肠球菌属的种类、esp基因的分布及其对万古霉素耐药的相关性.方法 用法国生物梅里埃公司全自动细菌分析仪VITEK-32进行肠球菌属鉴定,菌落杂交法检测esp基因的分布,微量稀释法测定细菌对万古霉素和替考拉宁的MIC.结果 113株肠球菌属中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.2％,其中粪肠球菌63株占55.8％,屎肠球菌31株占27.4％,esp基因阳性72株占76.6％,esp基因阳性者对万古霉素和替考拉宁的耐药率明显高于esp基因阴性者.结论 ICU感染肠球菌属以粪肠球菌和屎肠球菌为主,而且esp基因阳性较高,与肠球菌属耐万古霉素密切相关,值得重视.     

福氏志贺菌ipaB基因的克隆表达及免疫原性研究

构建福氏志贺菌ipaB基因的原核表达载体,诱导表达并纯化.探讨重组蛋白IpaB经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答.方法:用PCR扩增ipaB目的基因,克隆至pQE-30表达载体中,转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达蛋白IpaB;Western blot分析其抗原性.纯化后灌胃免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA.结果:ipaB基因全长1 743 bp.经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为64 000.Western blot分析能与福氏志贺菌全菌抗血清反应.免疫小鼠后,血清IgA、IgG,粪sIgA,肠黏液sIgA明显高于对照组(P＜0.01).结论:成功构建了ipaB基因的原核表达载体并能高效表达,纯化后口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部黏膜免疫作用,为进一步研究细菌性痢疾的疫苗和发病机制奠定基础.     

20-羟基蜕皮甾酮对急性肺损伤小鼠炎症因子表达的影响研究

摘要:目的 探讨20-羟基蜕皮甾酮(20E)对急性肺损伤小鼠环氧合酶-2 (COX-2)和炎症因子表达的影响。方法 昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、地塞米松组(Dex组)、20E低剂量治疗组、20E中剂量治疗组和20E高剂量治疗组。后5组小鼠麻醉后,气管内注入4mg/kg脂多糖(脂多糖)诱导形成急性肺损伤小鼠模型;注入脂多糖前1h、12h、24h和36h和注入后12h、24h和36h,这部分小鼠分别给予生理盐水、10mg/kg Dex溶液、0.1mg/kg 20E溶液、1mg/kg 20E溶液和10mg/kg的20E溶液,正常组小鼠给予等体积的生理盐水。脂多糖注入后36h解剖肺脏,观察肺组织的形态学改变,分别用real-time PCR和免疫组化测定COX-2的表达,real-time PCR和ELISA测定TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8、IL-4和IL-10的mRNA和蛋白含量。结果 20E能够对急性肺损伤小鼠肺泡细胞具有保护作用,抑制COX-2表达和炎症因子TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8的表达,诱导抗炎因子IL-4和IL-10表达,其中以20E高剂量组的治疗效果最为明显。结论 20E能够抑制急性肺损伤小鼠肺组织COX-2的表达,其机制可能与上调抗炎因子的IL-4和IL-10表达有关。     

贝伐珠单抗联合紫杉醇+卡铂治疗晚期卵巢癌患者的疗效分析

目的 探讨贝伐珠单抗联合紫杉醇+卡铂治疗晚期卵巢癌患者的疗效。方法 根据治疗方案的不同将126例晚期卵巢癌患者分为化疗组和贝伐珠单抗组,每组63例。治疗前后,检测两组患者血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、CD4⁺、CD8⁺、CD3⁺水平,记录两组患者的不良反应及无进展生存期,比较两组患者的疗效。结果 治疗后,贝伐珠单抗组患者VEGF、MMP2、CEA、CA125、CD8⁺水平均明显低于化疗组,CD4⁺、CD3⁺水平均明显高于化疗组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。贝伐珠单抗组患者总有效率高于化疗组,无进展生存期长于化疗组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 贝伐珠单抗联合紫杉醇+卡铂化疗可抑制晚期卵巢癌转移及扩散,明显改善患者的免疫功能,延长无进展生存期,疗效确切。     

志贺菌的疫苗研究进展

志贺菌属是人类细菌性痢疾的病原菌,俗称痢疾杆菌,属于革兰氏阴性兼性细胞内致病菌,临床上可引起细菌性痢疾。由于经济发展水平的不平衡、卫生条件不能得到充分的改善、抗药菌株的不断出现,决定了当前迫切需要研制痢疾疫苗。现对第一代（全细胞死疫苗）、第二代（减毒活疫苗）和第三代（亚单位疫苗）痢疾杆菌疫苗的研究进展作一概述。     

乌头半夏混剂促进大鼠创面愈合的研究

目的:通过观察乌头半夏混剂对大鼠创面愈合速率的影响,探讨该混剂促进创面修复的机制。方法:清洁级雄性Wistar大鼠60只,分为模型组、对照组云南白药组、治疗组乌头半夏混剂,每组20只。大鼠背部左右侧各切取直径2 cm大小的皮肤,造成创面模型。模型组、对照组和治疗组大鼠创面分别给予生理盐水、云南白药和乌头半夏混剂。伤后3 d、7 d、11 d计算伤口愈合速率,real-time PCR分析转化生长因子—β1(TGFF—β1)、表皮细胞因子(EGF)和碱性成纤维细胞因子(b FGF)的表达。结果:与模型组相比,治疗组创面愈合速率明显加快,TGF-β1mRNA水平在第3 d和7 d分别升高114.3%(P0.01),72.3%(P0.01);EGF mRNA第7d和11d分别升高了57.9%(P0.01)和37.4%(P0.05)。b FGF mRNA第3d治疗组升高了74.7%(P0.01)。结论:乌头半夏混剂具有明显促进创面愈合的作用,其机制可能与诱导TGFF—β1、EGF和b FGF的表达有关。