氟诱导成骨细胞程序性坏死的实验研究

目的:探讨程序性坏死通路受体相互作用蛋白1-受体相互作用蛋白3-混合系列蛋白激酶样结构域（RIP1-RIP3-MLKL）是否参与氟诱导的成骨细胞死亡。方法:体外培养人成骨肉瘤细胞株（Saos-2细胞）,按如下分组分别处理24、48 h：对照组,氟化钠（NaF）组（5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L NaF）...     

程序性坏死在氟致人成骨细胞氧化性损伤中的作用

目的 探究程序性坏死与氟诱导的人成骨细胞氧化损伤的关系.方法 选择人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)体外培养,并用不同浓度的氟化钠(0、5、10、20、40 mg/L)干预以建立氟致成骨细胞损伤模型;利用分光光度法测定细胞中T-SOD、GSH、MDA的含量.结果 实验组中T-SOD的活力及GSH的含量均低于相同染氟条件下...     

氟对成骨细胞骨钙素和Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞骨钙素基因(OCN)和Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1)表达的影响。方法采用人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)建立体外染氟模型,即经体外细胞培养后分别以不同浓度梯度氟化钠(0.0 mg/L,5.0 mg/L,10.0 mg/L,20.0 mg/L和40.0 mg/L NaF)处理;在实验组中加入坏死凋亡抑制剂(Necrostatin-1,Nec-1)抑制细胞的程序性坏死,提取细胞的总mRNA,通过实时荧光定量RT-PCR方法,分析染氟对Saos-2细胞骨钙素基因和Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响。结果与对照组相比,经5.0 mg/L,10.0 mg/L,20.0 mg/L和40.0 mg/L NaF处理后,OCN和COL1的表达域上调,其中以(5.0~10.0 mg/L)增强的最明显。低浓度氟化钠(5.0~10.0 mg/L)可以促进OCN和COL1的基因表达,高浓度(>20.0 mg/L)氟化钠对OCN和COL1基因的相对表达量上调程度较低;加入Nec-1的组OCN和COL1基因表达域较对照组上调明显。结论在基因水平上,低浓度氟化钠(5.0~10.0 mg/L)上调人成骨细胞中OCN和COL1基因的表达;高浓度氟化钠(>20.0 mg/L)对OCN、COL1基因的相对表达量的上调程度较低。Nec-1对两基因的表达均为上调。氟诱导的程序性坏死能够影响成骨相关基因OCN和COL1的表达。     

PARP-1和氟诱导成骨细胞凋亡的相关性研究

目的 探究染氟成骨细胞凋亡与多聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶-1(PARP-1)蛋白的相关性;预先探索PARP-1在成骨凋亡过程中的作用,以期在氟骨症治疗中寻找新的靶点.方法 采用人成骨肉瘤细胞系(Saos-2)建立体外染氟模型,即经体外细胞培养后分别加入如下浓度梯度氟化钠(NaF,0.0,2.5,5.0,10.0,20.0和40.0 mg/L)处理;在实验组中加入适量Nec-1抑制细胞程序性坏死,再以细胞毒性试验(CCK-8法)观察染氟成骨细胞在各时间点和实验组的细胞存活率;同时利用免疫印记法(Western blot)检测各组 PARP-l[poly(ADP-ribose)polymerase-1],Bax(Bcl2-associated X protein)和Bcl-2(B-cell lymphoma-2)的蛋白含量.结果 PARP-89 kD与氟浓度呈明显正相关趋势(r24h=0.924,r48h=0.927,P＜0.01),PARP-113kD与氟浓度呈明显负相关趋势(r24h=-0.677,r48h=-0.785,P＜0.01),PARP-89 kD的转化率和氟浓度呈正相关(r=0.772,P＜0.01).氟浓度高于10 mg/L时,随氟浓度的增加Bax/Bcl-2也持续增长(r24h=0.808,r48h=0.948,PP＜0.01);氟浓度在5mg/L以下时,加入NaF组的细胞存活率始终高于空白对照组,细胞存活率与氟浓度呈明显正相关(P＜0.01);当氟浓度超过5 mg/L时,细胞存活率与氟浓度呈明显负相关(P＜0.01).结论 提示PARP-1与染氟成骨细胞的凋亡密切相关.