人肝脏微粒体在体外对丝裂霉素C的代谢

丝裂霉素C（mitomycin C，MMC）是一种醌类DNA烷化剂，是生物还原活性物的代表之一，也是临床常用的化疗药物，被广泛用于治疗膀胱癌、乳腺癌、头颈部癌、非小细胞肺癌等。作为MMC与肝脏药物代谢酶相互作用的两个方面，作者曾发表了MMC对肝脏3种细胞色素P450同工酶活性影响的报道。已往关于MMC代谢酶学的研究材料主要使用动物肝脏微粒体及纯化酶、体外肿瘤细胞系和／或肿瘤组织，而人肝脏药物代谢酶对MMC代谢的研究尚未见报道。本实验用体外方法初步研究了人肝脏微粒体对MMC的代谢作用。     

五味子及木脂素成分对肝CYP3A酶活性的影响

目的研究五味子和五味子科8种木脂素成分对大鼠肝CYP3A1／2活性和人肝CYP3A4活性的影响。方法在体外大鼠及健康人肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同浓度的五味子或木脂素成分，甲醇终止反应，用高效液相色谱仪检测睾酮的羟化代谢产物68羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶活性。人原代肝细胞和五味子水提物共同培养3d后同法测定CYP3A酶活性的变化。结果大鼠肝微粒体孵育体系中，五味子水提物和醇提物对CYP3A1／2酶活性有浓度依赖性抑制作用，IC50分别为487．8和175．7mg·L^-1，五味子酯甲、南五味子素、异南五味子素、内南五味子素和angeloyl binankadsurina A的IC50分别为3．77、6．18、20．67、16．43和23．07μmol·L^-1；人肝微粒体孵育体系中，五味子水提物抑制CYP3A4酶活性的IC50为317．3mg·L^-1，8种木脂素成分对酶活性的抑制作用与大鼠微粒体结果相似；人原代肝细胞培养中，五味子水提物（1500mg·L^-1）浓度可以抑制50％以上的CYP3A4酶活性。结论体外给药五味子和五种木脂素成分对大鼠肝CYV3A1／2活性和人肝CYP3A4活性有浓度依赖性抑制作用。     

体外替代安全评价方法的验证-代谢性相互作用对细胞毒性的影响

目的随着近20年实验动物伦理原则的逐步普及,学术界、工业界和政府管理部门开始研究和推广动物试验的替代方法,用于药品、食品和化妆品的安全评价。美国15个政府管理机构和研究机构成立了“替代评价方法协调委员会（ICCVAM）”并指定和验证了评价方法。作者按照ICCVAM推荐的方法,应用体外细胞毒性评价方法和代谢性相互作用评价方法,研究出入境天然产物制品的毒性作用及其代谢性活化或代谢性解毒机制。方法用人肝微粒体,研究了天然产物制品对肝细胞色素P450亚酶的作用。用超低温冻存的人肝原代细胞,评价了5个进口天然产物制品的细胞毒性（MTT方法）。应用化学抑制法,研究了细胞色素P4502A6,2C9,2C19和3A4对天然产物制品细胞毒性的影响。结果天然产物制品TA-07—004和TA-07—005对CYPIA2有明显的抑制作用,它们的Ic50分别为初始浓度的0．22％和0．03％,且它们对CYP3A4也有明显的抑制作用,它们的IC50分别为初始浓度的0．49％和0．20％。天然产物制品TIA-07．003没有肝细胞毒性,其余4个天然产物制品观察到有肝细胞毒性,它们的IC50分别为初始浓度的0．37％,0．26％,0．62％和0．19％。在研究与天然产物制品TA-07—005细胞毒性有关的细胞色素P450亚型酶中,发现CYP2C9、CYP2A6、CYP2C19和CYP3A4活性被抑制后能减轻TA-07—005对肝细胞的毒性,说明TA-07-005被CYP450生物活化后毒性增加。结论用人原代肝细胞模型为基础的替代方法研究细胞毒性及代谢性相互作用对细胞毒性的影响是可行的。     

P糖蛋白表达对HIV-1蛋白酶抑制剂在体内吸收与分布的影响

目的 通过介绍体内各屏障高度表达的P糖蛋白外排作用对HIV-1蛋白酶抑制剂的影响,探讨如何通过有效调节P糖蛋白,优化对艾滋病患者的治疗。方法 查阅国外文献进行总结和归纳。结果 综述了P糖蛋白表达对HIV-1蛋白酶抑制剂在体内吸收、分布的影响。 结论 P糖蛋白一定程度地阻碍了HIV-1蛋白酶抑制剂在体内的吸收和分布,通过抑制P糖蛋白的活性,可以增加HIV-1蛋白酶抑制剂的化学疗效,未来艾滋病的治疗,P糖蛋白抑制剂的选择和使用将是一项艰巨的任务。     

艾滋病中药和化学药通过CYP3A4的代谢性相互作用的体外研究

目的:评价应用于艾滋病治疗的24个中药的提取物对人肝微粒体细胞色素P450氧化代谢酶3A4(CYP3A4)活性的抑制作用,为阐明中药和化学药在治疗艾滋病时的代谢性相互作用的增效机制提供数据。方法:用标准化方法提取24个中药的65个部位,并在生理条件下与混合人肝微粒体进行预孵15 min后,加入探针底物睾酮和辅酶β-NADPH进行孵育30 min,用LC-MS/MS对CYP3A4的活性进行定量检测,计算抑制率(IC50)。结果:在24个中药中虎杖和黄芩对CYP3A4具有较强的抑制,其不同部位的IC50分别为3.25～8.19和10.0～29.0μg.mL-1。其他测试的中药提取物,如甘草、苦参、牡丹皮、土茯苓和乌药,它们的不同提取部位对CYP3A4的抑制作用有较大差异。而败酱草,板蓝根,当归,黄芪和龙胆对CYP3A4几乎不具抑制效果。结论:中药的不同提取物对CYP3A4的抑制效果有较大差异。     

健脾化浊方对阿托伐他汀体外代谢的影响

目的：在体外基于细胞色素（CYP450）酶系研究健脾化浊方对阿托伐他汀代谢的影响. 方法：首先将健脾化浊方与人肝微粒体预孵育15 min后,加入CYP 3A4的底物睾酮及还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,于37℃共同孵育30 min,之后加入0.5 ml预冷的甲醇终止反应,取等量上清于高效液相质谱分析仪上检测6β-羟基睾酮的生成,确立体外肝微粒体中健脾泄浊方对CYP3A4酶的作用.再将稀释好的健脾化浊方及人肝微粒体加入96深孔板中,然后加入阿托伐他汀,对照组中则加入阴性对照物,取上清用于液相色谱/质谱/质谱分析. 结果：健脾化浊方对肝药酶CYP3A4有较强的抑制作用（IC50=10.5）,并且能延缓阿托伐他汀在肝细胞微粒体内的代谢,使其药物浓度显著提高（P＜0.01）. 结论：体外健脾化浊方通过对CYP3A4酶的抑制作用而影响了阿托伐他汀的代谢,中药和西药联用存在着药物相互作用.     

慢性乙型肝炎病毒感染对人肝细胞色素酶P450 2C9的影响

目的 探讨慢性HBV感染对人肝细胞色素酶P450 2C9(CYP2C9)的影响.方法 收集慢性HBV感染者和健康对照者的肝组织和血液标本各10份,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测CYP2C9基因型,高效液相色谱(HPLC)检测肝组织样本中CYP2C9酶活性.RT-PCR和Western印迹法测定肝组织样本中CYP2C9 mRNA和蛋白表达的差异,数据行t检验.结果 20份样本均为野生型CYP2C9(*1*1),未检测到突变型基因.反映酶活力的指标最大反应速度(Vmax)在慢性HBV感染组为(40.4±10.4) pmol·mg-1·min-1,健康对照组为(52.6±13.4) pmol·mg-1·min-1(t=2.269,P=0.036 7);而酶特征性常数米氏常数(Km)分别为(263.5±66.4) μmol/L和(284.6±85.9) μmol/L(t=0.614,P=0.5471).慢性HBV感染组和健康对照组CYP2C9 mRNA相对表达量分别为0.39±0.28和0.65±0.13(t=2.628,P=0.0171);蛋白相对表达量分别为0.26±0.13和0.60±0.19(t=4.688,P=0.000 2).结论慢性HBV感染在mRNA和蛋白水平降低肝脏CYP2C9酶的表达,导致酶活性下降.     

启东县农村居民黄曲霉素B_1和营养素摄入量调查

江苏省启东县是我国肝癌高发区之一,1972～1982年肝癌年平均发病率和平均死亡率分别为50.33/10万和48.37/10万。在启东肝癌病因学研究中,苏德隆的工作表明启东肝癌死亡率随下列居民饮水类型而递增:井水、河水、泯沟、宅沟,他提出启东肝癌高发与居民饮用水质有关。黄曲霉毒素B_1(下称AFB_1)是人类肝癌另一个可能病因,AFB_1对实验动物的致癌作用又受某些营养素(如蛋白质、维生素A等)的影响。为今后进一步确证饮水和肝癌的关系,我们调查了启东不同饮水类型农村居民AFB_1和营养素摄入量的现状。     

预测人体危害的毒性时对动物种属差异的合理评论

考察毒理学结果时,要能区分真阳性、真阴性、假阳性和假阴性。假阳性和假阴性结果、特别是后者是一个难以处理的问题。本文综述了用短期、长期、生殖毒理、致突变和致癌试验结果外推到人时能引起假阳性和假阴性结果的因素。如果某些毒物在体内既不经代谢活化又不     

999感冒灵对不同种属CYP2E1酶活性的影响

目的:研究999感冒灵(感冒灵)对大鼠肝脏的影响,比较感冒灵对大鼠、小鼠和人不同种属CYP2E1酶活性的影响,为临床安全性再评价及合理使用提供实验依据。方法:大鼠随机分为空白组、感冒灵组(4.53 g·kg~(-1)),单次灌胃给药,14 d后动物称重,处理;全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN),肌酐(SCr),肌酸激酶(CK),取肝脏、肾脏及心脏,计算脏器指数;对肝脏进行苏木素-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察其组织形态学变化。将人、大鼠和小鼠肝微粒体分别与不同浓度的感冒灵或对乙酰氨基酚(APAP)在37℃预孵育15 min后,加入CYP2E1的探针底物氯唑沙宗和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)继续孵育30 min,用LC-MS/MS方法测定6-羟基氯唑沙宗的生成量,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:与空白组比较,感冒灵组大鼠肝脏、肾脏及心脏指数、血清生化指标、肝脏病理组织学无明显变化。感冒灵在人、大鼠和小鼠的肝微粒体中对CYP2E1的IC_(50)分别为6.516,344.2,932.8 mg·L~(-1),APAP在人、大鼠和小鼠的肝微粒体中对CYP2E1的IC_(50)分别为52.4,453.8,806.5 mg·L~(-1)。各种属中感冒灵和APAP对CYP2E1抑制程度趋势一致。结论:不同种属对感冒灵抑制CYP2E1活性敏感程度依次为人、大鼠及小鼠,该差异可能与大剂量感冒灵对大鼠肝脏无明显毒性影响有关;提示药物在进行临床前安全性评价时宜采用不同种属动物尤其是考察对肝脏代谢的影响,在临床需关注含有APAP的复方感冒药与其他药物联合用药时对体内药酶代谢的互相作用的影响,为临床合理用药提供依据。