抗体基因芯片应用于检测鼻咽癌组织切片蛋白质表达谱的研究

目的研究应用抗体基因芯片检测鼻咽癌组织特异性蛋白质表达谱的新技术方案。方法利用噬菌体抗体库筛选出抗鼻咽癌的特异性抗体库,以扩增抗体基因V-D-J片段作为标识分子用于制备抗体基因芯片;通过特异性抗体库与鼻咽癌肿瘤组织结合后,使标记引物扩增的V-D-J序列与抗体基因芯片进行杂交后显示癌组织的蛋白质表达谱,从而选择性通过免疫组织化学显示其中关键性蛋白质原位表达状况。结果肿瘤组织结合的抗体滴度可达到106～108数量级,标记的DNA分子效价约为10-6～10-8,以该文一次检测20个抗体为例,基因芯片检出有10～14个阳性蛋白质表达谱;免疫组织化学可显示阳性抗体在细胞中的结合部位。结论以抗体基因芯片为核心的技术方案,能在组织切片上同时检测含多个蛋白质表达谱,可以广泛应用于基础研究和临床诊疗过程。     

miR-374过表达增强人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的:观察miR-374过表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞docetaxel(多西他赛)耐药性的影响。方法:qPCR检测miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374和对照细胞MDA-MB-231-Cherry中miR-374的相对含量;采用不同浓度的多西他赛处理细胞72小时后,MTT检测细胞的活性。在终浓度为3.2nmol/L的多西他赛处理下,用平板克隆实验检测MDA-MB-231-Cherry和MDA-MB-231-miR-374细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:与MDA-MB-231-Cherry细胞相比,miR-374过表达细胞MDA-MB-231-miR-374中miR-374的相对表达量明显增高;MDA-MB-231-miR-374细胞的耐药性和克隆形成能力明显增强(P<0.05)。细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,G2/M期细胞增加。结论:miR-374过表达可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231对多西他赛的耐药性。     

流式细胞仪检测HLA-B27在脊柱关节病诊断中的应用价值

目的评价流式细胞仪检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27)在脊柱关节病诊断中的应用价值。方法入选的脊柱关节病(SpAs)患者248例[其中强直性脊柱炎(AS)148例,未分化脊柱关节病(USpA)48例,反应性关节炎(ReA)31例,幼年脊柱关节病(JSpA)12例,银屑病关节病(PsA)6例,炎性肠病性关节病(EA)3例];同时抽取非脊柱关节病患者204例作为对照。452例患者均进行流式细胞仪检测HLA-B27。结果 HLA-B27对SpAs的敏感性为85.1%,特异性为94.1%,阳性预测值为94.6%,阴性预测值为83.8%;对AS的敏感性为93.2%,特异性为94.1%,阳性预测值为94.5%,阴性预测值为92.7%;对USpA的敏感性为77.1%,特异性为94.1%,阳性预测值为92.5%,阴性预测值为81.3%;对ReA的敏感性为71.0%,特异性为94.1%,阳性预测值为91.7%,阴性预测值为78.0%。结论流式细胞仪检测HLA-B27对SpAs、AS、USpA、ReA有很高的敏感性、特异性和阳性预测值和阴性预测值,对早期SpAs、AS、USpA、ReA的诊断有重要的应用价值。     

降钙素基因相关肽抑制血管平滑肌细胞能量代谢的AMP激活蛋白激酶信号通路

目的观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖过程中能量代谢的影响及机制,探索细胞外信号调节激酶和AMP激活蛋白激酶相关信号蛋白在该作用中的地位。方法组织贴块法体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,取第3～10代用于实验。分别用降钙素基因相关肽或/和血管紧张素Ⅱ处理细胞。MTT法及细胞计数法观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;詹纳斯绿B染色观察细胞线粒体形态及体积;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;Western Blotting检测细胞磷酸化AMP激活蛋白激酶的表达。结果降钙素基因相关肽预处理能降低血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05),同时拮抗血管紧张素Ⅱ引起细胞内线粒体肿胀、ATP水平升高,在此过程中伴随细胞内磷酸化AMP激活蛋白激酶表达下调(P<0.05);降钙素基因相关肽受体拮抗剂CGRP8-37能拮抗降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ促增殖和促代谢的抑制作用(P<0.05);细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059能部分拮抗降钙素基因相关肽对磷酸化AMP激活蛋白激酶的抑制作用(P<0.05)。结论降钙素基因相关肽能显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的能量代谢,其细胞内信号通路可能涉及到降钙素基因相关肽/降钙素基因相关肽1型受体-丝裂原细胞外激酶/细胞外信号调节激酶-磷酸化AMP激活蛋白激酶信息传递链。     

流式细胞术检测CD55和CD59在PNH诊断中的应用

目的探讨流式细胞术检测CD55和CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）诊断中的应用价值。方法采用流式细胞术检测11例PNH患者、15例再生障碍性贫血（AA）患者、14例骨髓增生异常综合征（MDS）患者、20例健康对照者的红细胞和粒细胞膜CD55和CD59的表达。评判标准为红细胞、粒细胞膜CD55^-、CD59^-的百分率大于10%认定有PNH克隆。结果 11例PNH患者的粒细胞CD55^-、红细胞和粒细胞CD59^-表达均大于10%,2例PNH患者的红细胞CD55^-表达小于10%、其他9例大于10%;15例AA患者的红细胞、粒细胞CD55^-表达均小于10%,1例AA患者的红细胞、粒细胞CD59^-表达大于10%、其余14例均小于10%;14例MDS患者的红细胞、粒细胞CD55^-表达均小于10%,1例MDS患者的红细胞、粒细胞CD59^-表达大于10%、其余13例均小于10%。对照组20例红细胞、粒细胞CD55^-和CD59^-表达均小于10%。结论流式细胞术检测CD55和CD59在PNH诊断中有良好的应用价值,建议把流式细胞术检测红细胞和粒细胞膜CD55和CD59的表达作为诊断PNH的常规项目。     

广西侗族人群稀有血型筛选

目的了解广西侗族人群稀有血型的的种类与频率。方法采用96孔微量板法筛选成人i、Ge-、Lub、GPA和抗-Wrb血型;试管法筛选Mur+、孟买/类孟买血型;间接抗球蛋白试验筛选Rh稀有血型;120孔微量板法(Olympus微孔板)直接离心试验和间接抗球蛋白试验筛选单克隆抗体检测的稀有血型抗原;96孔微板2 mol/L尿素攻膜试验筛选Jk(a-b-)表型。结果在1 927名侗族人群中分别筛选出Lub-7例、Jk(a-b-)1例;在844例侗族人中筛选出Mur+130例。结论广西侗族人群Mur+频率为15.4%、Jk(a-b-)表型频率为0.052%,和Lub-频率为0.36%,均高于白种人及广东番禺地区;其中Mur+和Jk(a-b-)稀有表型频率高于我国上海地区,Mur+明显低于我国云南怒族人群;Jk(a-b-)高于日本及中国台湾,低于太平洋群岛波利尼亚人。     

抗体基因芯片应用于检测鼻咽癌组织切片蛋白质表达谱的研究

目的研究应用抗体基因芯片检测鼻咽癌组织特异性蛋白质表达谱的新技术方案。方法利用噬菌体抗体库筛选出抗鼻咽癌的特异性抗体库,以扩增抗体基因V—D-J片段作为标识分子用于制备抗体基因芯片;通过特异性抗体库与鼻咽癌肿瘤组织结合后,使标记引物扩增的V—D—J序列与抗体基因芯片进行杂交后显示癌组织的蛋白质表达谱,从而选择性通过免疫组织化学显示其中关键性蛋白质原位表达状况。结果肿瘤组织结合的抗体滴度可达到10^6～10^8数量级,标记的DNA分子效价约为10^-6～10^-8,以该文一次检测20个抗体为例,基因芯片检出有10～14个阳性蛋白质表达谱;免疫组织化学可显示阳性抗体在细胞中的结合部位。结论以抗体基因芯片为核心的技术方案,能在组织切片上同时检测含多个蛋白质表达谱,可以广泛应用于基础研究和临床诊疗过程。     

广西壮族人群稀有血型筛选

了解广西壮族人群中Ena-、Lub-、Ge-、Jk(a-b-)红细胞血型的频率与分布情况,为建立符合本地区血型抗原分布格局合理的谱细胞进行临床输血前检查提供依据。采用立即离心试管法筛选Mur+、H-;用试管法间接抗球蛋白试验或96孔微量板法直接离心试验筛选DCE/DCE、DCE/dCE、dCE/dCE表型;96孔微量板法直接离心试验和间接抗球蛋白试验筛选Lub-、Ena-、Ge-、Wrb-和i;2 mol/L尿素溶血试验筛选JK(a-b-)表型。在4 527名壮族人群中筛选出Lub-57例、Jk(a-b-)2例;对其中2 825例壮族筛选出Mur+319例,没有发现Ena-、Ge-、Wrb-、类孟买血型、成人i及DCE/DCE、DCE/dCE、dCE/dCE表型。结果显示,广西壮族人群Jk(a-b-)稀有表型频率(0.044%)高于欧洲白人、我国上海和广东番禺地区人群;Lub-表型频率1.26%;Mur+频率(11.29%)高于上海及广东番禺地区,但明显低于云南怒族人群。     

DNA修复基因XRCC1 Arg194Trp Arg280His和Arg399Gln多态性与前列腺癌相关性的Meta分析

目的探讨DNA修复基因X线修复交叉互补因子1（XRCC1）主要单核苷酸多态性与前列腺癌易感性的关系。方法在MEDLINE、EMBASE和OVID数据库上检索文献,收集及提取符合纳入标准的以XRCC1密码子194、280、399多态性与前列腺癌易感性为内容的病例对照研究文献,应用Stata统计软件进行Meta分析,比值比（ORs）及其95%可信区间（95%CI）评价关联强度;应用SPSS软件分析吸烟与前列腺癌关系,OR？评价其相对危险度。结果 XRCC1 399 Gln/Gln和XRCC1 280 Arg/His与前列腺癌的发病风险有关（Gln/Gln vs Arg/Arg：OR？=1.27,95%CI=1.02～1.59;Arg/His vs Arg/Arg：OR？=1.66,95%CI=1.09～2.52）,尤其在亚组分析中亚洲人的Gln/Gln明显增加了前列腺癌的发病风险（OR？=1.52,95%CI=1.18～1.96）;Arg194Trp与前列腺癌的发病风险无明显关联。吸烟是前列腺癌的危险因素（χ2=13.974,P=0.000,OR？=1.22）。结论 XRCC1 399 Gln/Gln和280 Arg/His可能与前列腺癌的易感性相关。     

β肾上腺素受体信号与心力衰竭

儿茶酚胺激动β肾上腺素受体在调节心血管功能活动过程中起十分重要的作用.近年来许多研究资料显示,心肌β1和β2肾上腺素受体激活后,通过不同的信号转导途径对心脏产生不同甚至相反的生理及病理生理作用.众所周知,循环血液中儿茶酚胺的增高及其对β肾上腺素受体的长期慢性激动对心脏产生毒性作用并可进而导致心衰.无疑,深入了解心肌β肾上腺素受体信号转导的分子机制将为我们提供治疗心衰的新思路和方法.