JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢的影响

目的 探讨JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢相关基因的影响.方法 构建JAZF1小发夹RNA (shRNA)表达载体并转染3T3-L1细胞,实时荧光定量PCR(RT-QPCR)和蛋白印迹法检测JAZF1 mRNA和蛋白水平的表达;氢三放射示踪法检测3T3-L1细胞糖摄取率;蛋白印记法检测糖、脂代谢相关基因蛋白水平;油红O染色检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量变化.结果 成功构建JAZF1-shRNA;转染脂肪细胞48 h后,JAZF1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组(P＜0.05);氢3放射性示踪法显示转染组葡萄糖摄取率明显降低(P＜0.05);PPAR-γ蛋白表达升高(P＜0.05),激素敏感脂肪酶(HSL)、内脏脂肪素(Visfatin)、胰岛素诱导基囚-2 (Insig-2)蛋白表达降低(均P＜0.05);油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显,比对照组升高约25％(P＜0.05).结论 JAZF1基因抑制可减少基础糖转运,增加脂质与胆固醇合成,减少脂质分解并减少相关脂肪细胞因子的表达.     

JAZF1过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响

目的：在课题组前期细胞研究结果的基础上构建锌指并列基因1（juxtaposed with another zinc finger gene 1,JAZF1）转基因动物模型并探讨JAZF1基因过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响。方法：将构建和制备的JAZF1基因片段,经显微注射到受精卵中,将受精卵移植入受体小鼠,产出后经鉴定和繁育得到较纯的JAZF1转基因小鼠。将8周龄转基因小鼠（Tg-JAZF1）和野生（wild type,WT）小鼠随机分为4组喂养：即普食（standard diet,SD）-WT组（n=6）、SD-Tg组（n=6）、高脂（high fat diet,HFD）-WT组（n=6）、HFD-Tg组（n=6）。各组小鼠喂养12周之后测定肝脏组织糖异生的关键基因葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase,G-6pase）和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK）的mRNA和蛋白表达的变化。Western blot测定肝脏、肌肉、脂肪组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平变化。结果：SD-Tg小鼠的mRNA和蛋白在肝脏、肌肉、脂肪组织中表达较SD -WT小鼠均明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与WT小鼠比较,Tg-JAZF1小鼠肝脏PEPCK、G-6-Pase在SD喂养和HFD喂养条件下mRNA水平和蛋白表达水平均明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;肝脏组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平均增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：JAZF1转基因动物模型构建成功,JAZF1过表达能抑制肝脏糖异生关键基因表达,增加肝脏组织的胰岛素敏感性。