二甲双胍通过AMPK/SIRT3通路促进脂肪酸培养的肌细胞自噬

目的探讨二甲双胍对高脂培养肌细胞自噬的作用及可能机制。方法用不同浓度棕榈酸(0.1、0.2、0.4、0.6 mmol/L)及二甲双胍(0.5、1、2、5、10 mmol/L)分别干预L6肌细胞24 h,CCK 8法检测肌细胞的存活率。棕榈酸和二甲双胍干预肌细胞24 h后,Western印迹检测微管相关轻链蛋白3(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin 1、泛素结合蛋白p62、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)蛋白表达及腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平,RT-PCR技术检测上述基因的mRNA表达水平。结果棕榈酸剂量依赖性地降低肌细胞活力,2 mmol/L二甲双胍显示最佳的对抗作用。0.4 mmol/L棕榈酸和2 mmol/L二甲双胍干预肌细胞24 h后,棕榈酸显著减少LC3Ⅱ/LC3I、Beclin 1、SIRT3的蛋白及mRNA表达水平,降低AMPK磷酸化水平,显著增加p62的蛋白及mRNA表达水平(均P<0.05),棕榈酸的这些作用可被二甲双胍所对抗(均P<0.05)。结论二甲双胍可能通过刺激AMPK的磷酸化增加SIRT3的表达而增强脂肪酸培养的肌细胞自噬。     

木丹颗粒联合西医常规治疗早期糖尿病肾病临床疗效及对患者Toll样受体4/核因子κB、转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的观察木丹颗粒联合西医常规治疗早期糖尿病肾病(DN)的临床疗效及对患者Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)、转化生长因子β1(TGF-β_1)/Smad信号通路的影响。方法将90例早期DN患者按照随机数字表法分为2组。对照组45例予西医常规治疗,观察组45例在对照组治疗基础上加用木丹颗粒治疗。2组均治疗3个月后统计临床疗效,并比较2组治疗前后空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾功能[血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾小球滤过率(eGFR)]及外周血单核细胞(PBMCs) TLR4/NF-κB、TGF-β_1/Smad信号通路关键因子mRNA的表达。结果观察组总有效率93.33%(42/45),对照组总有效率75.56%(34/45),观察组临床疗效优于对照组(P0.05)。治疗后2组FPG、HbA1c及Cr、BUN、UAER均较本组治疗前降低(P0.05),且观察组均低于对照组(P0.05)。治疗后2组e GFR均较本组治疗前升高(P0.05),且观察组高于对照组(P0.05)。治疗后2组PBMCs TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及TGF-β_1、Smad2、Smad3 mRNA表达均较本组治疗前降低(P0.05),Smad7 mRNA表达均升高(P0.05),且观察组改善均优于对照组(P0.05)。结论木丹颗粒治疗早期DN疗效确切,并能改善患者血糖水平和肾功能,机制与调控TLR4/NF-κB、TGF-β_1/Smad信号通路有关。     

糖原性肝病肝穿刺病理诊断一例

本文报道1例T1DM伴肝脏肿大患者转氨酶升高,经肝脏穿刺诊断为糖原性肝病,经严格控制血糖5个月后复查转氨酶降至正常.     

胰淀素Fab抗体的筛选及初步鉴定

目的:从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选胰淀素(amylin又称为胰岛淀粉样多肽)Fab抗体,测定其特异性及抗原结合活性.方法:以胰淀素为抗原,对抗体库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集筛选;将从人源噬菌体抗体库中筛选出的阳性克隆,提取其质粒、切除gⅢ、自身环化并转入大肠杆菌中,以IPTG诱导表达可溶性抗体,最后用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定抗原结合活性和特异性.结果:成功筛选并表达了抗胰淀素的可溶性Fab抗体,经SDS-PAGE蛋白电泳,在相对分子质量约为47 kD处可见一蛋白条带.ELISA和Western blot证实了该Fab片段与胰淀素抗原的结合活性和特异性.结论:利用噬菌体抗体库技术获得了人源性的特异抗胰淀素Fab抗体,为临床进行下一步研究奠定了基础.