JC病毒t抗原的融合蛋白表达及抗体制备

目的 构建JC病毒t抗原的原核融合蛋白表达载体,表达并纯化该融合蛋白.方法 采用PCR方法 从患者脑脊液中扩增JC病毒t抗原,测序正确后再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-t表达重组体,并诱导表达t抗原融合蛋白.大量制备该融合蛋白并以镍柱亲和层析纯化.然后以纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果pET32a(+)-t表达出相对分子质量为41 000左右的重组蛋白.十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,异丙基-βD-硫代半乳糖苷诱导后3.5～20.0 h融合蛋白均高水平表达.Western印迹证实具有良好的抗原性,免疫BALB/c小鼠后,成功制备了鼠多克隆抗体.结论 成功构建原核表达载体pET32a(+)-t,表达纯化t抗原融合蛋白,成功制备了JC病毒小包膜蛋白t的抗体,为进一步流行病学调查及该基因的功能研究奠定了基础.     

核定位信号结构特点及工作原理

核内的功能蛋白包括转录因子、剪接因子和其他的核蛋白，它们在胞浆中合成，通过本身的核定位信号与入核转运受体结合形成复合物，然后通过细胞核膜上的核孔复合体进入核内发挥它们的生物学功能。而要研究这些核蛋白的入核机制，可能会有许多问题萦绕脑中，例如：什么是核定位信号？它的结构特点是什么？它的工作原理是什么？通过什么样的方式才能预测核定位信号？     

某医院门急诊药房605张退药处方分析及处理对策

目的分析门急诊退药的原因,为制定整改措施,减少不合理的退药处方数量,保证患者的用药安全,减轻药房工作负担提供依据。方法选取某医院门急诊药房2016年1—12月全部605张退药处方作为研究对象,对退药的原因、科室、种类等进行描述性分析。结果退药原因以药品不良反应最多,退药种类以抗感染类药物最多,退药科室以急诊科最多。结论通过门急诊退药处方的分析发现,退药处方的发生既有可控因素也有不可控因素,可通过制定相应措施减少退药处方发生情况。     

JC病毒小包膜蛋白VP2抗原及鼠多克隆抗体的制备

目的 构建JC病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体,表达纯化VP2蛋白,并制备其抗体.方法 用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒小包膜蛋白VP2基因,测序正确后克隆入pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21大肠埃希菌,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达该蛋白并纯化.纯化的VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠多克隆抗体.结果 将pET-32a(+)-VP2重组表达载体分别转化BL21大肠埃希菌,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为58.5×10~3左右的重组融合VP2蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,IPTG诱导6～10 h重组蛋白表达水平较高.Western印迹证实其具有良好的抗原性,且免疫BALB/c小鼠后成功制备了鼠多克隆抗体.结论 成功构建原核表达载体pET-32a(+)-VP2并获得纯化VP2融合蛋白,并制备JC病毒小包膜蛋白VP2抗体,为进一步对VP2蛋白的功能及JC病毒流行病学调查等研究奠定了坚实的基础.