提高抗恶性疟独特型单抗克隆出现频率的方法学探讨

用Protein A-Sepharose亲和层析法提纯McAb-IgG,皮下多点和腹腔免疫雄性Wistar大鼠,间隔两周共3次,融合前3天采用腹腔、尾静脉和脾内注射等三种加强免疫方法,以间接ELISA法和抗体竞争ELISA法筛选Anti-Id阳性克隆。结果显示:融合前大鼠血清抗小鼠IgG或抗免疫原McAb-IgG滴度,静脉组和脾内组比腹腔组高一个滴度;Anti-Id阳性克隆出现频率,腹腔组为0.9％和0.3％,静脉组为11.0％和13.3％,脾内组为16.4％和12.9％,静脉组和脾内组明显高于腹腔组(P<0.01);上述三种加强免疫方法对抗小鼠IgG阳性克隆出现频率无明显影响(P>0.05);与腹腔加强免疫组相比,静脉和脾内加强免疫组也可提高细胞融合效果(P<0.01).本实验结果提示,腹腔和皮下多点多次长程基础免疫结合静脉或脾内加强免疫是制备Anti-Id McAb比较好的免疫方案。     

用斑点酶联免疫吸附试验筛选抗恶性疟原虫单克隆抗体及检测恶性疟抗原

用培养的恶性疟原虫免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞融合,以海南恶性疟病人感染血中疟原虫为抗原,用斑点酶联免疫吸附试验检测,共得到10个针对恶性疟原虫红内期抗原的单克隆抗体株。其中1     

长期无血清传代培养瘤细胞的某些生物学特性观察

本文对长期在无血清培养基内传代培养的亲本瘤和杂交瘤细胞的某些生物学特性进行了监测。结果显示,长期(三个月以上)在DMI传代的瘤细胞,贴壁能力明显减弱,个别瘤系完全呈悬浮型生长,但重新置回含血清常规培养基培养,贴壁能力大部分可恢复到原来状态:诱发BALB/c小鼠腹水和皮下实体瘤的能力保持不变;在HAT选择培养基中培养,瘤细胞的死亡时间在DMI和RPS15对照两种培养基内基本一致;4个亲本瘤系8-氮鸟嘌呤筛选结果与含血清培养的瘤细胞相似;经DMI长期传代的杂交瘤系分泌抗体的能力基本保持不变。     

恶性疟原虫免疫学特性与免疫诊断研究

本项研究是采用免疫学方法把流行区不同年龄不同感染者人群的免疫血清与体外长期传代培养的恶性疟原虫抗原进行免疫反应,以评价和探讨用体外长期培养的疟原虫免疫的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,克隆后所产生的单克隆抗体检测自然虫株感染的病人血中疟疾抗原的可能性,并通过改进免疫学诊断方法达到现场应用的效果。其主要研究结果如下:     

恶性疟原虫保护性单克隆抗体的分离和纯化

为制备亲和吸附剂,提取恶性疟原虫保护性抗原,我们用ProteinA亲和吸附柱,自小鼠腹水中提取抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。腹水上柱后,用0.1M PBS洗涤杂蛋白,用0.1M醋酸洗脱吸附的McAb。洗脱液经透折。浓缩后,用SDS—PAGE鉴定纯度,免疫荧光及双扩散试验检测其活性。 四个杂交瘤株(9_4D_1,9_4C_3,9_2D_4,9_3A_3)的腹水共60.3ml,过柱后收获McAb153.9mg,平均每毫升腹水可得2.25mg McAb,SDS—PAGE电泳图谱上显示二条区带,     

抗恶性疟单抗独特型决定簇的第二单克隆抗体的制备和鉴定

本文以分泌抗恶性疟红内期抗体的小鼠杂交瘤细胞系94D_1诱生的腹水,通过Protein ASepharose CL-4B亲和层析法,纯化IgG,并以此作为免疫原皮下多点免疫Wistar大鼠。加强免疫后3天取脾与小鼠Sp2/0瘤细胞进行异种间的细胞融合,经间接ELISA法检测筛选和5次克隆化,最终得到一株生长稳定,连续分泌特异抗体的异种杂交瘤细胞系41RF_5。经过多次冷     

抗恶性疟原虫单克隆抗体的分析

在两次细胞融合中,经2—4次克隆化后已建成28株抗恶性疟原虫(FCC—1/HN)的杂交瘤。其中针对裂殖子和分裂体抗原的McAb有9株,仅对裂殖体特异的有4株,对裂殖体和滋养体期原虫产生荧光反应的有15株。 应用间接荧光抗体技术,检查这28株McAb对恶性疟原虫(安徽株),间日疟原虫、食蟹猴疟原虫,诺氏疟原虫、伯氏疟原虫、约氏疟原虫和鸡疟原虫的交叉反应。结果,仅有93D4和94B5属株特异性McAb,其余各株均对恶性疟原虫(安徽株)有明显荧光反应。有5     

用单克隆抗体免疫全银染色法诊断恶性疟的初步研究

用杂交瘤技术已产生出11株针对恶性疟原虫红内期抗原的单克隆抗体,其中3株单克隆抗体-11G5、13A2和14D9可用于双抗夹心免疫金银染色法检测恶性疟病人血中抗原。当用11G5和13A2作为捕获抗体,以胶体金标记的14D9作为探针检测恶性疟疾病人感染血时均显示出较好的效果,实验中共检测30份恶性疟病人感染血和30份健康血,结果11G5和14D9夹心时阳性检出率为96.7％(29/30),并与健康人血样品无明显的假阳性反应;13A2与14D9夹心时血阳性检出率为93.3％(28/30),假阳性率为3.3％(1/30)。此外,1株针对猴间日疟抗原的     

Cholesterol requirement for growth of rodent parental myeloma cells in serum-free medium

Cholesterol,a major lipid component of plasma membrane,is thoughtto have profound effects on the structure and function of cells.Mostanimal tis-sues are capable of synthesizing cholesterol de novo from acetate;however,thereare relatively few mammalian cells in vitro expressing an absolute requirement foran exogenous source of cholesterol.In this paper,it was shown that IR983F(983)rat myeloma cells and P3X63-AgS-U1(P3U1)and P3X63-Ag8.653(653)mousemy eloma cells which had been cultivated in serum-free medium for more than 6months required cholesterol in vitro for growth in serum-free medium.Optimalgrowth of P3U1,653 and 983 occurred in cholesterol concentration of 5,10 and15μg/ml,respectively.Moreover,it was demonstrated that the cholesterol couldbe replaced by human low density lipoprotein in a concentration of 10μg/ml butnot by mevalonic acid lactone.In contrast to the parental myeloma cells,hybridoma cells derived from the mouse myeloma cells which had been cultivatedin serum-free medium for more than 6 months did not require cholesterol.     

抗恶性疟单抗独特型决定簇第二单克隆抗体的制备和鉴定

近十多年来的研究结果表明,抗独特型抗体在抗体独特型决定簇的分子结构研究及定位、抗体可变区的遗传控制、自身免疫、免疫耐受、肿瘤免疫等方面均有广泛的应用,尤其是利用抗独特型抗体作为免疫