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目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。 相似文献
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目的 探讨心力衰竭合并2型糖尿病患者肺部感染病原学特点及其影响因素。方法 回顾性选取124例2020年1月-2022年12月四川省人民医院收治的心力衰竭合并2型糖尿病患者作为研究对象,根据患者是否并发肺部感染分为并发肺部感染组(n=42例)和未并发肺部感染组(n=82例)。收集心力衰竭合并2型糖尿病患者的临床资料,统计并发肺部感染现况及病原学特点,采用多因素Logistic回归分析法分析心力衰竭合并2型糖尿病患者肺部感染的危险因素。结果 124例心力衰竭合并2型糖尿病患者中并发肺部感染为42例,发生率为33.87%;共培养病原菌42株,其中革兰阴性菌23株,占54.76%,主要为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌;革兰阳性菌16株,占38.10%,主要为肺炎链球菌;真菌3株,占7.14%,全部为白假丝酵母;有侵入性操作、有慢性阻塞性肺疾病、未预防性使用抗菌药物及C-反应蛋白(CRP)水平高是心力衰竭合并2型糖尿病患者肺部感染的独立危险因素(P<0.05)。结论 心力衰竭合并2型糖尿病患者肺部感染率较高,病原菌主要包括革兰阴性菌中的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌,临床可根据心力衰竭合并2型糖尿... 相似文献
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目的 构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法 以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌生长及细胞毒性的影响。结果 成功构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,与野生型菌株相比,敲除菌株的生长方式显著改变,对GES-1胃粘膜上皮细胞的毒性显著降低。结论 6S RNA具有调控幽门螺杆菌生长及毒力相关因子的功能,为幽门螺杆菌生物学功能及转录调控机制研究奠定了基础。 相似文献
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目的 探究2型糖尿病患者肺部感染Toll样受体(TLR)2/TLR4炎症信号通路及其危险因素。方法 回顾性分析2021年1月-2023年1月四川省人民医院收治的168例2型糖尿病患者的临床资料,根据2型糖尿病患者肺部感染情况分为感染组(n=33)和非感染组(n=135);统计2型糖尿病患者肺部感染病原菌,归纳2型糖尿病患者肺部感染的危险因素,比较两组外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4表达情况。结果 33例2型糖尿病肺部感染患者共培养分离病原菌48株,其中革兰阴性菌29株占60.42%,革兰阳性菌14株占29.17%,真菌5株占10.42%,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主;2型糖尿病病程、肺部并发症、住院时间是2型糖尿病患者肺部感染的危险因素(P<0.05);非感染组PBMC中TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平均低于感染组(P<0.001)。结论 2型糖尿病患者肺部感染病原菌以革兰阴性菌为主;2型糖尿病病程、肺部并发症、住院时间是2型糖尿病患者肺部感染的危险因素;2型糖尿病患者肺部感染PBMC中TLR2、TLR4呈高表达,临床可据此予以早期针对性防治而降... 相似文献
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药理学是研究药物与机体相互作用的规律及其原理的学科,其内容广泛而又复杂,学生不但要学习各种药物的药理作用,还要记忆种类繁杂的药物名词、用法及不良反应等。当学生面对一大堆新老药名时,记忆起来实在犯难。本文是运用记忆教学法教学以激发学生学习兴趣,增强记忆,提高教学质量的尝试。1理解记忆做学问贵在寻根究底,而“不求甚解”和死记硬背是不可取的。例如,在讲解抑制胃酸分泌药时,笔者先简述胃酸分泌机制:内源性组织胺、胃泌素和乙酰胆碱与胃粘膜壁细胞组织胺受体、胃泌素受体和乙酰胆碱能受体结合后能刺激胃酸分泌;而壁细胞分泌时,… 相似文献
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我校地处云南边疆少数民族地区 ,在校 2 0 0 0多名学生均来自全省市、县及边远、贫困山区 ,其年龄在 15~ 2 1岁。虽然学校明文规定 :在校期间禁止谈恋爱。但这是个性生理与性心理尚不成熟的危险年龄阶段 ,青春萌动是不可阻止的 ,所以在性知识、性行为及性态度方面要给予正确的引导。特别是中专卫校学生只有两性解剖的一般知识和粗浅的性生理认识 ,大多数学生不具备系统而科学的性知识 ,甚至是错误或相反的理解。因此他们在中专卫校中很可能因无知而演出不必要的烦恼和遗憾 ,甚至是悲剧性人生。1 资料来源2 0 0 0年 5月在我校三年级、四年… 相似文献
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