猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的 以猪CD58为分子佐剂，将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达，寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。 方法 分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板，PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因，将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接，转化大肠埃希菌JM109，重组质粒经鉴定正确后，在其下游酶切插入CD58基因，PCR扩增和测序证明阅读框正确后，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE））和蛋白质印迹法（Western blotting）分析表达产物的免疫活性。 结果 pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr 41 000和Mr 69 000的融合蛋白，pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在，而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在，但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。 结论 TSO45W-4BX与CD58基因联合表达，TSO45W-4BX仍具有免疫活性。     

猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Westernblotting)分析表达产物的免疫活性。结果pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr41000和Mr69000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。结论TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性。     

猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因的筛选及结构初探

目的　从构建的剪切引导序列(SL)cDNA文库中筛选猪囊尾蚴相关基因。　方法　提取猪囊尾蚴总RNA,利用SL特异序列和带有噬菌体M13M4的olig(dT)为引物,反转录成cDNA,构建猪囊尾蚴SLcDNA文库。随机筛选并通过酶切、PCR鉴定阳性克隆,分析其同源性。　结果　鉴定出一 332bp的插入片段,含有204bp的开放阅读框(ORF)和 3′端20bp的polyA尾巴,经核苷酸和氨基酸序列分析,所克隆的基因的氨基酸序列与其他真核生物如人、秀丽隐杆线虫、果蝇及拟南芥等的RNA聚合酶亚基基因同源性均高达71.6%以上。　结论　筛选鉴定的基因推测为猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因,而且在不同物种间很保守。