HLA抗血清的筛选

<正> 我们从6000份产妇的产道血中筛选出336份HLA特异性抗血清,阳性率为5.6％。这些血清经过三个实验室的标准细胞的鉴定。经计算机处理,其中104份血清的r值在0.6和0.6以上,包括37个特异性,特别是国际上较难筛选到的BW46抗血清。现将具体结果报告于下。     

我国部分省份（地区）汉族人群HLA-I类基因多态性地区差异分析

目的探讨我国部分省份（地区）汉族人群HLA-I类经典基因座位HLA-A、HLA-B、HLA-Cw位点的群体遗传学特点及其基因频率分布的地区差异。方法选取1014例无关汉族拟行造血干细胞移植治疗患者及其健康家系供者的血液样本,提取基因组DNA后,采用序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）分型技术进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw位点基因分型,分析不同地区汉族人群及不同种族间的基因频率分布特征。基于文献报道的我国不同地区汉族人群及不同种族的HLA-I类基因频率资料,计算种群间遗传距离（D）,比较不同地区汉族人群及不同种族间遗传距离差异。结果Hard-Weinberg吻合度检验表明,本研究抽样群体适于进行遗传学统计分析。HLA-A位点共检测出14种基因型,最常见的是A^＊02（0.330）、A^＊11（0.240）、A^＊24（0.155）、A^＊33（0.075）;HLA-B位点共检测出27种基因型,最常见的是B^＊13（0.134）、B^＊15（0.143）、B^＊40（0.133）、B^＊46（0.102）;HLA-Cw位点共检测出13种基因型,最常见的是Cw^＊01（0.157）、Cw^＊03（0.247）、Cw^＊07（0.181）、Cw^＊08（0.106）。群体汉族与其他人种间HLA-A、HLA-B基因频率差异均有统计学意义（P〈0.05）;除兰州汉族人群仅同南方汉族、湖南、山东、江苏、台湾汉族人群间HLA-A、HLA-B基因频率差异有统计学意义（P〈0.05）外,其余各地区汉族人群间HLA-A、HLA-B基因频率差异均有统计学意义（P〈0.05）。各地区汉族人群间平均遗传距离D=0.164,辽宁和北方汉族人群间遗传距离（D=0.064）最小,江苏与湖南汉族人群间遗传距离（D=0.299）最大;不同地区汉族人群间遗传距离普遍小于种族间遗传距离。结论我国不同地区汉族人群HLA-I类基因频率分布存在显著差异,但其差异要明显小于世界不同人种间的分布差异。我国汉族人群所特有的HLA-I类基因频率分布格局资料对区域性疾?     

幼稚细胞对HLA细胞学组织配型的影响

幼稚细胞对ＨＬＡ细胞学组织配型的影响孙成文张蕊芳陈兴国李强＊金荔孔繁华军事医学科学院附属医院北京１０００３９ＨＬＡ细胞学组织配型通常是指器官移植供、受体间的混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ），是将两个不同个体的淋巴细胞共同培养，以其增殖程度高低判断两个体组织...     

IL-6受体α亚单位mRNA和蛋白在人白血病细胞中的表达

为了探讨IL－6R的α亚单位基因与蛋白在人白血病细胞中的表达，为临床利用IL－6／IL－6R系统介导重组IL－6－PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞提供可靠依据，采用RT－PCR半定量技术、直接免疫荧光标记及流式细胞术检测了IL－6R的α亚单位基因及蛋白在多种人白血病细胞细胞系中的表达。结果表明，粒系、单核系、红白血病细胞系HL－60，KG－1，U937和TF－1均高表达IL－6R的α亚单位基因和蛋白；淋巴系白血病细胞系Raji亦有一定量的基因表达；而淋巴系细胞等CEM和HuT28以及慢性粒细胞白血病细胞系K562无论是IL－6Rα亚单位的基因还是蛋白均为阴性。相对表达丰度依次为KG－1＞TF－1＞U266＞U937＞HL－60＞Raji。鉴于粒系、单核系、红白血病细胞高表达IL－6Rα亚单位的基因和蛋白，而IL－6Rα亚单位蛋白在正常人外周血细胞均为阴性表达这一事实，提示可以利用IL－6／IL－6R系统介导重组IL－6－PE40外毒素融合蛋白进行靶向杀伤和治疗这些白血病，而且不会对正常血细胞产生毒副作用。     

不完全相合造血干细胞移植中GVHD的预测研究:模拟HLA抗原结构的比较与应用

采用通用的微量淋巴细胞毒实验和序列测定方法对拟进行造血干细胞移植的患者及供体进行HLA分型；用计算机分子模拟手段，从HLA分子三维结构方面探讨预测移植物抗宿主病（GVHD）发生程度，以预测移植后GVHD的发生情况。结果发现，8例供受体中，3例为半匹配移植，其中2例发生了Ⅳ度GVHD，1例发生了Ⅱ度GVHD；3例为两个抗原不相合移植，其中1例发生了Ⅱ度GVHD，2例发生了Ⅱ度GVHD；2例口才为一个抗原不相合移植，分别发生了Ⅰ度、Ⅱ度GVHD；GVHD的发生程度与HLA不相合抗原RMSD差异的大小呈正相关。提示异基因造血干细胞移植时，GVHD发生程度与HLA分子三维结构的差异有密切关系，三维结构分子模拟进行GVHD预测可以为临床医生提供较好的预后指标。     

参照链介导的构象分析策略在HLA-B位点分型中的临床应用研究

目的建立并稳定HLAB位点的参照链介导的构象分析(RSCA)系统,并鉴定RSCA分型策略的优势。方法提取27例造血干细胞移植患者及63名供者的外周血DNA,采用RSCA进行HLAB位点分型,并与序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCRSSP)分型结果进行比较,对于疑难标本采用测序鉴定。结果在90份标本中,87份(96.7%)可明确判定结果,其中有1份标本与PCRSSP结果不一致,经测序鉴定RSCA结果正确;67份(74.4%)可直接指定等位基因型别。此外,1份标本(1.1%)因PCR扩增结果太弱而未能获得RSCA分型结果,2份标本只能确定1条等位基因,经测序发现另1条等位基因为已知等位基因,但RSCA数据库中没有其数据。随机选择20份标本进行RSCA重复性实验,重复率为100%。在PCRSSP方法分型中,约有10%的标本需要重复1～3次方能判定结果。结论RSCA具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、大规模和低成本等优点,适用于大规模的无关移植供、受者的选择。     

PCR直接扩增与套式扩增用于HLA－DR基因分型的研究

人类ＨＬＡ抗原分型在人类学、法医学、疾病易感性及器官组织移植等研究中有重要的意义。在骨髓移植中，进行供者、受者ＨＬＡ配型，选择相合的供体，减少ＧＶＨＤ发生，是移植成功的关键。目前国内主要采用血清学方法进行ＨＬＡ配型。由于方法上的缺点，常有约２０％左右的误差率，因此，基因分型技术的研究与应用势在必行。该研究通过设计合成ＨＬＡ基因序列特异性引物，建立了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的套式扩增和直接扩增ＰＣＲ－ＳＳＰ技术，并在骨髓移植配型中进行了应用。对两种分型技术进行了对比，两种方法各有特点，套式扩增在高度同源的ＤＮＡ序列扩增中有高度的特异性，并具有高度的灵敏性，很少量的ＤＮＡ即可满足ＰＣＲ扩增，但需两次扩增，非同源因素影响增大；直接扩增操作简便，一次扩增完成分型，但结构同源因素对特异性影响大。两种方法经周密设计均有高度的准确性，可常规用于临床骨髓移植配型     

套式序列特异引物聚合酶链反应技术的建立及其在HLA配型中的应用

磁式序列特异引物聚合酶链反应方法，用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型。利用一对外引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ１第２外显子部分片段，作为第２次扩增的模板，ＰＣＲ循环参数；     

HLA-A抗原的三维结构模型预测GVHD的发生

如何准确预测GVHD的发生始终是造血干细胞移植领域中十分棘手的难题。采用HLA抗原三维结构的模型来预测GVHD的发生是移植免疫研究的最新进展之一。我们在对17个移植家系进行筛选时,发现了一个供、受体HLA-A位点不合的家系,临床移植后该患者发生了Ⅳ级GVHD。本实验采用高分辨巢式PCR-SSP和DNA序列测定证实患者的HLA-A位点发生了重组(A~*6901→A~*0201)。进行蛋白质三维结构模型分析显示,供、受体差异抗原的空间构象存在明显差异。可能会成为移植后发生GVHD的分子基础,从而验证了我们的实验结果和理论推断。由此可见,该HLA抗原三维结构模型在预测GVHD的发生中具有重要意义。     

造血干细胞移植中HLA-II类基因分型影响因素的探讨

目的: 为了准确地进行造血干细胞移植供-受体的HLA - II 类配型,对HLA - II 类基因分型实验的影响因素进行了探讨.方法:采用美国莱姆达公司提供的微量SSPTM HLA-II类PCR-SSP分型试剂盒对400例造血干细胞移植供-受体进行基因分型.结果:采用0.5 %EDTA抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比,前者的扩增效果好.DNA终浓度为25～200 ng/μl,最佳浓度为100 ng/μl,A260/A280比例在1.65～1.80之间.PCR反应参数是影响反应的重要因素之一.DNA Taq酶的使用量和活性将直接影响反应结果.D-MIX管应保存在-65℃,避免反复冻融,否则将使反应带变弱.结论:HLA-II类基因分型标本的处理和反应条件的优化是影响基因分型效果的因素.