线粒体功能障碍在晚期糖基化终产物致肾小球内皮细胞通透性增加中的作用机制

目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(r GEn C)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法 采用原代培养的r GEn C,予AGEs 80 mg/L作用24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化,Mito SOX试剂盒检测细胞内活性氧,JC-1荧光标记法检测线粒体膜电位(△Ψm),荧光素酶检测系统测定三磷酸腺苷(ATP)的生成,蛋白免疫印迹法检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果 AGEs可引起r GEn C通透性升高,活性氧产生增加,采用叔丁基对苯二酚(t BHQ)(20μmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10 mmol/L)和抗AGE受体抗体(100 mg/L)预处理后,上述AGEs作用被抑制。AGEs可引起r GEn C△Ψm下降,ATP和Nrf2减少,而anti-RAGE抗体可抑制△Ψm下降和ATP减少,t BHQ则能抑制△Ψm下降和Nrf2减少。结论 AGEs可导致r GEn C线粒体功能障碍,引起活性氧产生增加,从而导致r GEn C间通透性增加。     

肾素血管紧张素系统在晚期糖基化终产物改变肾小球内皮细胞通透性中的作用

【摘要】 目的 探讨晚期糖基化终产物（AGE）对大鼠肾小球内皮细胞（rGEnC）紧密连接的影响及激活细胞内肾素血管紧张素系统（RAS）在其中的作用。 方法 采用原代培养的rGEnC,予不同浓度AGE（20、40、80 mg/L）分别作用6 h、12 h和24 h,采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化;Western印迹检测晚期糖基化终产物受体(RAGE)、紧密连接蛋白[occludin、claudin-5、连接黏附分子A（JAM-A）和闭合小环蛋白1（ZO-1）]和细胞RAS组分[血管紧张素原、肾素和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1）]蛋白表达量的变化;免疫荧光技术显示紧密连接的完整性;紫外光法和酶免疫分析技术测定细胞内外血管紧张素转化酶（ACE）活性及AngⅡ水平。 结果 AGE可引起内皮细胞通透性、RAGE表达量、ACE活性、AngⅡ浓度和AT1表达量的升高,occludin、claudin-5和JAM-A表达量的下降。加入抗RAGE抗体（100 mg/L）预处理后,上述AGE作用被阻断。AGE可引起上述紧密连接蛋白在细胞连接处的中断。予卡托普利（1 mmol/L）或缬沙坦（10 μmol/L）预处理可部分阻断AGE上述效应。 结论 AGE可通过上调RAGE表达,激活细胞内肾素血管紧张素系统,破坏肾小球内皮细胞紧密连接,导致其通透性的升高。