可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A*0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。     

2010年济南市1-2岁婴幼儿肺炎链球菌携带情况及耐药性研究

目的了解济南市健康婴幼儿肺炎链球菌的携带率及其对常用抗生素的耐药特点,为预防婴幼儿感染和合理利用抗生素提供参考。方法分别于2010年3和5月,对济南市四家医院1～2岁611名健康婴幼儿鼻咽部分泌物进行肺炎链球菌菌株分离、鉴定;采用肺炎链球菌药敏卡片对分离鉴定的肺炎链球菌进行抗生素耐药性检测。结果61i份健康婴幼儿的鼻咽部分泌物中,检出肺炎链球菌阳性菌株57株,检出率为9．33％;药敏检测结果,肺炎链球菌对羟氨苄青霉素、氨噻肟头孢菌素、甲氧苄氨嘧啶／磺胺甲恶唑、青霉素和四环素的耐药率分别为40．35％、43．86％、64．91％、70．18％和80．70％;对厄他培南、利奈唑胺、万古霉素等敏感。结论1～2岁的健康婴幼儿肺炎链球菌的携带率随着气温的转暖和年龄的增加而有所提高,肺炎链球菌的携带率性别间差异无统计学意义（P〉0．05）;其携带菌株对常用抗生素耐药性比较严重,并存在多重耐药的现象。     

2010年济南市公共场所集中空调部分水体嗜肺军团菌污染状况调查

[目的]了解2010年济南市部分公共场所集中空调各种水体嗜肺军团菌污染状况,为相关执法部门提供参考数据与信息。[方法]2010年7～9月,采集济南市2家宾馆、5家酒店、5家大型超市、3家温泉、2家医院、1家物业公司办公楼的冷却水水样99份、冷凝水39份、生活用水53份、温泉水24份进行嗜肺军团菌检测。[结果]检测水样215份,71份检出嗜肺军团菌,阳性检出率为33.02%。阳性检出率,冷却水为52.52%、冷凝水为17.95%、生活用水为16.98%、温泉水为12.50%(P<0.05);宾馆、酒店水样为42.73%、超市水样为36.21%、温泉水样为12.50%(P<0.05)。阳性样本中嗜肺军团菌菌型以Lp1为主,占检出菌株的53.33%;菌落数≥100cfu/ml以上的样本为15.49%。[结论]济南市公共场所嗜肺军团菌污染状况比较严重,菌型以Lp1为优势菌型。     

2006-2011年济南市志贺菌菌型分布及变迁分析

目的 了解济南市2006-2011年志贺菌菌型分布及变迁规律,为细菌性痢疾的预防控制提供依据。 方法 按照《全国细菌性痢疾监测方案》的要求进行采样及系统检测。 结果 福氏志贺菌占72.4%,为优势菌群;各年份中福氏菌所占比重逐步下降,B:D值呈下降趋势;F2a血清型所占比重最大(占27.2%),X、Y变种近年有所增加。 结论 2006-2011年济南市志贺菌以B群和F2a型为主,宋内菌逐渐增加,提示近年来济南地区环境卫生和个人卫生有所改善,同时菌型日渐复杂,应当继续加强细菌性痢疾的监测。     

人工抗原提呈细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展

人工抗原提呈细胞的制备原理是模拟T细胞活化的双重信号机制,在一定的载体表面展现抗原肽-MHC分子复合物及共刺激分子、黏附分子的配体或抗体构建而成。它能有效活化和扩增抗原特异性T细胞,而且效率高、可行性好。人工抗原提呈细胞不仅对肿瘤的免疫治疗具有重要价值,而且还可用于抗原表位的筛选、效应细胞的检测及T细胞活化信号的研究。本文就人工抗原提呈细胞的研究进展作一综述。     

双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究

目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。     

2016~2020年济南市两城区大气PM2.5中金属元素浓度特征及慢性健康风险评估

目的 分析济南市两城区大气细颗粒物(PM_2.5)中金属元素浓度特征,并进行健康风险评估。 方法 选择2016~2020年期间济南市市中区和历城区作为监测点,每月定期开展PM_2.5及锑、铝、砷、铍、镉、铬、铅、汞、锰、铊、镍、硒等12种金属元素的成分监测,参照《化学物质环境健康风险评估技术指南》进行PM_2.5中金属元素的慢性健康风险评估。 结果 2016~2020年期间共采集884份石英纤维滤膜,除汞元素外,其他11种金属元素的浓度历城区高于市中区,差异有统计学意义(P<0.01),两区金属元素浓度占比前三位的分别是铝、铅、锰,占比超过90%;锰、砷、镉的非致癌风险指数(HQ)大于1,存在较高的非致癌风险,其他元素的HQ值均小于1;两区铬的致癌风险(CR)均为最高,其风险值在1×10^-6~1×10^-4之间,具有一定的致癌风险;其次是砷元素,两个监测点中其CR最大值均超过1×10^-4水平;镉元素CR值在两区的中位数均超过1×10^-6;铅、镍、铍元素的CR最大值均未超过1×10^-6,引起癌症的风险性较低。 结论 济南市空气中铝、铅、锰的浓度较高,锰、砷、镉的非致癌风险最高,铬、砷、镉致癌风险最高,应予以重视。     

双表达外源性4—1BBL／RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究

目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL／RANTES后，对T细胞、NK细胞有无活化作用，为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术，分别将4-IBBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2，命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后，利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选，获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞（K562／4—1BBL/RANTES）。经流式细胞仪（FACS）分选后，K562／4—1BBL／RANTES细胞用丝裂霉素C处理，与外周血淋巴细胞孵育24，FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达；对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562／4-1BBL／RANTES细胞刺激后，CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比，均有明显上调；但与单纯K562细胞刺激组相比，无显著差异。另外，CD8^＋T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞，不具备活化淋巴细胞的效应。     

可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定

目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A^＊0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A^＊0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A^＊0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒（Bacmid）中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni^＋-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体（W6/32）结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。