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目的:原核表达并纯化人高迁移率族B1蛋白(HMGB1)免疫日本大耳白兔制备其抗体.方法:构建原核表达质粒pRsetA2-HMGB1, 转化大肠杆菌BL21(DE3), HMGB1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过Ni2 -NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清.以间接ELISA法检测抗体效价, Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性.结果:成功构建原核表达质粒, 表达并纯化HMGB1蛋白.ELISA检测抗体效价为1∶ 16 000以上, Western blot和免疫荧光染色确定抗体具有高度特异性.结论:HMGB1蛋白和抗体的成功制备, 为下一步研究将HMGB1作为肿瘤等疾病治疗的新靶点奠定基础. 相似文献
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目的 建立用液相芯片技术测定促甲状腺激素(TSH)的方法,对其方法学和临床应用价值作评价.方法 通过抗TSH的单抗交联单色荧光微球,采用标记有生物素的另一配对抗TSH的单抗以及由藻红蛋白(PE)标记的亲合素组成相应的荧光报告系统,用液相芯片仪Luminex100检测待检标本荧光强度,通过TSH标准浓度绘制出标准TSH浓度荧光强度剂量曲线.用液相芯片技术测定100份临床血清标本的TSH浓度并与拜尔的化学发光法的测定结果做方法学比较.结果 液相芯片技术测定TSH的线性范围为0.3~162 μIU/mL,高、中、低3个浓度的批内精密度为10.00%、6.91%、17.80%.高、中、低3个浓度的回收率为94.3%、96.7%、95.2%.与拜尔的化学发光法的相关系数为0.965(P=8.77×10-57).结论 本研究建立的液相芯片技术在TSH测定中的主要技术指标与拜尔的化学发光法相近,有临床应用价值. 相似文献
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目的建立用液相芯片技术测定促甲状腺激素(TSH)的方法,对其方法学和临床应用价值作评价。方法通过抗TSH的单抗交联单色荧光微球,采用标记有生物素的另一配对抗TSH的单抗以及由藻红蛋白(PE)标记的亲合素组成相应的荧光报告系统,用液相芯片仪Luminex100检测待检标本荧光强度,通过TSH标准浓度绘制出标准TSH浓度荧光强度剂量曲线。用液相芯片技术测定100份临床血清标本的TSH浓度并与拜尔的化学发光法的测定结果做方法学比较。结果液相芯片技术测定TSH的线性范围为0.3~162μIU/mL,高、中、低3个浓度的批内精密度为10.00%、6.91%、17.80%。高、中、低3个浓度的回收率为94.3%、96.7%、95.2%。与拜尔的化学发光法的相关系数为0.965(P=8.77×10-57)。结论本研究建立的液相芯片技术在TSH测定中的主要技术指标与拜尔的化学发光法相近,有临床应用价值。 相似文献
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目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位.方法 构建原核表达质粒pGEX-5X-1-PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清.以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测PIWILA在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位.结果 成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白.免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20 000,Western blot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位.结论 PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWILA的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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目的制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法构建原核表达质粒pGEX-5X-1.PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Westernblot鉴定抗体特异性及检测PIWIL4在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位。结果成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白。免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20000,Westernblot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位。结论PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWIL4的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位.方法 构建原核表达质粒pGEX-5X-1-PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清.以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测PIWILA在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位.结果 成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白.免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20 000,Western blot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位.结论 PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWILA的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。 相似文献
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