造血系统恶性肿瘤自体外周血干细胞动员采集和冻存研究

目的:探讨造血系统恶性肿瘤自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)后造血系统重建与采集和冻存自体的外周血干细胞(APBSC)数量及质量的关系。方法:用大剂量化疗加粒细胞集落刺激因子(G-CSF)方法对拟行APBSCT的18例造血系统恶性肿瘤进行动员,CS-3000PLUS血细胞分离机采集APBSC,经程序降温仪处理保存于-196℃液氮中,37~40℃水浴解冻后迅速回输,检测冻存前及解冻后APBSC的锥虫蓝染色拒染率、单个核细胞(MNC)计数、粒-单集落形成单位(CFU-GM)集落数及CD34 细胞百分率。结果:APBSC的采集时间为化疗后12.6(9~19)d,采集次数2.4(1~3)次,MNC采集率为(138.6±52.32)%。解冻后MNC、CD34 及CFU-GM的回收率分别为(91.96±1.37)%,(85.94±0.64)%,(87.69±4.53)%。冻存前及解冻后APBSC的锥虫蓝染色拒染率分别为(96.26±1.33)%,(92.75±2.04)%,二者差别无统计学意义(P>0.05)。骨髓瘤患者CFU-GM集落数、MNC采集率及CD34 细胞百分率较低;化疗疗程>10次的5例患者MNC采集率较低及CFU-GM生长不良,其中3例出现APBSCT后造血重建延迟。结论:rhG-CSF与大剂量化疗联合的动员方案可缩短采集时间,提高MNC采集率;APBSC的质量和数量有显著的个体差异,与疾病的类型和化疗方案有密切关系,移植前化疗次数增多可影响APBSC的数量和质量,导致APBSCT后造血重建延迟。     

急性白血病患者T细胞亚群的变化及其与临床特征和预后的关系

目的:探讨急性白血病患者T细胞亚群的变化及其与临床特征的关系。方法:收集103例急性白血病患者起病、完全缓解、复发等不同阶段的外周血标本,使用流式细胞仪检测T细胞亚群及Treg细胞比例,分析T细胞亚群与疾病状态、预后及治疗效果的关系。结果:骨髓原始细胞大于50%的患者,CD3~+T细胞水平明显低于原始细胞小于50%的患者。白血病细胞CD34~+患者,其Treg比例明显高于CD34~-患者;对比低、中和高危3组患者预后与免疫细胞的关系发现,高危组Treg细胞较低危组明显升高; 18例患者通过连续监测细胞免疫动态发现,Treg细胞前3个疗程化疗过程逐渐升高,到第4疗程逐渐下降,至第6疗程逐渐接近正常值,且与患者临床疗效相关;急性白血病患者总体Treg水平明显高于健康对照者,而且在起病、复发时明显高于完全缓解期;急性髓细胞白血病Treg细胞上调比急性淋巴细胞白血病更加明显;首疗程化疗完全缓解(CR)组Treg细胞比例明显低于非CR组。Treg细胞大于10%的患者,首疗程完全缓解率为68. 9%。Treg细胞小于10%为85. 7%。随访发现高Treg细胞组复发率20%,低Treg细胞组复发率为7. 69%,对比6例复发患者与32例持续CR患者的Treg比例、Treg/CD4比值发现,复发组Treg比例、Treg/CD4比值明显高于完全缓解组及对照组。结论:外周血调节性T细胞水平的动态变化与急性白血病患者的临床特征、复发及预后等密切相关。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。     

体外人骨髓基质细胞克隆培养及分化特性的研究

目的：探讨人骨髓基质细胞(Bone marrow stromL cells，MSCs)克隆方法的有效性及其向神经干细胞(Neural stem cells，NSCs)的定向分化的潜性。方法：贴壁生长的。MSCs以套环法消化分离，扩增培养，流式细胞仪检测细胞的表面标记，应用维甲酸诱导向神经干细胞分化。结果：克隆培养的：MSCs能够传代扩增，它们表达CD13、CD59、CD29，而不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR，并能诱导分化为NSCs。结论：该培养条件能有效扩增MSCs，并保持分化潜能。     

以三系减少表现为主的淋巴瘤1例

患者，男，45岁，汉族，已婚，餐饮业工作者，因反复腹胀、心悸、双下肢水肿2年于2004年9月入院。患者于2002年10月起无诱因出现乏力、心悸伴双下肢水肿，晨起较重，且颜面轻度浮肿，下午缓解。无咳嗽、咳痰及胸痛，自感有低热，以晚上较高，无盗汗。当时化验血常规检查示三系减少，肝肾功能检查示低蛋白血症，胆红素升高。B超：肝脾肿大；胸片：双下肺感染，抗核抗体谱检查示ANA可疑阳性。诊断为系统性红斑狼疮。予强的松治疗后症状明显好转，此后患者因腹胀、双下肢水肿反复入院。按系统性红斑狼疮口服强的松、晓悉治疗，病情均获控制，2004年9月因相同症状再次入院。     

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的：探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法：贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离，扩增培养，待细胞融合，传代培养，检测细胞的生长曲线，表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果：克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上，表达CD13，CD29，CD59，不表达CD11，CD14，CD31、CD34，CD45，CD80，CD86，CD117，HLA－DR；传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论：该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞，并保持分化潜能，克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。     

影响恶性肿瘤患者造血系统自体外周血造血干细胞数量和质量的因素分析

背景:造血系统恶性肿瘤的造血重建除与疾病本身、预处理方案、移植后支持治疗手段等相关外,自体外周血造血干细胞的动员、采集和冻存是影响其移植后造血系统顺利重建的关键因素。目的:观察造血系统恶性肿瘤患者自体外周血造血干细胞经动员、采集和冻存后,重新回输至造血系统的重建情况,并分析影响外周血造血干细胞数量和质量的因素。设计:以造血系统恶性肿瘤为对象的病例分析。单位:解放军广州军区广州总医院血液科,南方医科大学珠江医院血液科。对象:选取2000-02/2004-12解放军广州军区广州总医院血液科收治的18例造血系统恶性肿瘤住院患者,年龄16～56岁,其中急性髓性白血病2例,急性淋巴细胞白血病1例,淋巴瘤白血病2例,慢性粒细胞白血病2例,多发性骨髓瘤4例,非霍奇金淋巴瘤7例。粒细胞集落刺激因子(Granocyte,中外制药产品,批号N3G31)。方法:①全部病例均采用对肿瘤有效的联合化疗方案 粒细胞集落刺激因子进行动员。联合化疗方案:白血病患者第1～3天每隔12h给予阿糖胞苷2g/m2,第1～5天给予足叶乙甙200mg/m2或氟达拉宾50mg/m2。多发性骨髓瘤患者给予阿糖胞苷方案同上,第1～2天给予环磷酰胺1g/m2。淋巴瘤患者第1～2天给予环磷酰胺2g/m2。各类型患者化疗后白细胞降至1.0×109L-1以下时开始进行粒细胞集落刺激因子动员,5μg/(kg.d)皮下注射至采集结束。②当白细胞恢复至(4.0～10.0)×109L-1时开始采集外周血造血干细胞,单个核细胞计数≥4.0×108/kg或CD34 细胞≥2.0×106/kg时结束采集,经程序降温仪处理置入-196℃液氮中保存,37～40℃水浴解冻。③患者病灶部位行局部照射预处理,200cGy/次,5次/周,连续4周,总剂量40Gy。结束后48h回输外周血造血干细胞(55.3±28.7)mL,回输日距采集日平均为(56.5±22.3)d。全部患者于干细胞移植后第1天起皮下注射粒细胞集落刺激因子300μg/d,至中性粒细胞≥0.5×109L-1时停止。检测冻存前及解冻后自体外周血造血干细胞的锥虫蓝拒染率、单个核细胞计数、粒-单系祖细胞集落数及CD34 细胞百分率。主要观察指标:①自体外周血造血干细胞的采集情况。②冻存后自体外周血造血干细胞存活率及相关指标检测。③自体外周血造血干细胞移植后造血系统重建情况。结果:18例造血系统恶性肿瘤患者全部进入结果分析。①18例患者自体外周血造血干细胞平均采集时间为化疗后12.6d,采集次数为1.9次,采集第1天白细胞总数为(8.93±1.27)×109L-1,单个核细胞采集率为(138.33±28.61)%。②冻存后18例自体外周血造血干细胞标本锥虫蓝拒染率与冻存前基本相似[(96.26±1.33)%,(92.75±2.04)%,P>0.05]。解冻后单个核细胞、CD34 、粒-单系祖细胞回收率分别为(91.96±1.37)%,(85.94±0.64)%,(87.69±4.53)%。骨髓瘤患者的单个核细胞采集率、CD34 细胞百分率及粒-单系祖细胞集落数均明显低于白血病和淋巴瘤患者(t=2.524～3.268,P<0.05)。③移植后15d,15例患者中性粒细胞恢复至≥0.5×109L-1;移植后20d,血小板恢复至≥20×109L-1。化疗疗程>10次的5例患者粒-单系祖细胞生长不良,为(18.67～26.82)×105/kg,其中3例出现自体外周血造血干细胞移植后造血重建延迟。结论:①重组粒细胞集落刺激因子与大剂量化疗联合的动员方案可缩短外周血造血干细胞采集时间,提高单个核细胞采集率。②移植前化疗次数增多可影响自体外周血造血干细胞的数量和质量,导致造血重建延迟。     

体外人骨髓基质细胞克隆培养及分化特性的研究

目的:探讨人骨髓基质细胞(BonemarrowstromLcells,MSCs)克隆方法的有效性及其向神经干细胞(Neuralstemcells,NSCs)的定向分化的潜性。方法:贴壁生长的MSCs以套环法消化分离,扩增培养,流式细胞仪检测细胞的表面标记,应用维甲酸诱导向神经干细胞分化。结果:克隆培养的MSCs能够传代扩增,它们表达CD13、CD59、CD29,而不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR,并能诱导分化为NSCs。结论:该培养条件能有效扩增MSCs,并保持分化潜能。