飞行时间质谱多基因检测系统检测心血管用药11个基因的性能验证研究

目的对飞行时间质谱多基因检测平台的检测性能进行验证,建立基于飞行时间质谱多基因检测平台的性能验证研究方案。方法选择2017年9月至2018年10月来自中国医学科学院阜外医院已测部分心血管用药相关基因位点的DNA标本998例和全血标本20例,其中男性512例,女性506例。18~30岁280例,31~64岁442例,≥65岁296例。用飞行时间质谱法对998份DNA标本心血管用药相关11个基因进行检测,检测结果与已知结果进行比对,评价998例已测标本符合率;选择20例全血标本,对心血管用药相关11个基因分别进行飞行时间质谱检测和Sanger测序,对比两次结果,以Sanger测序为金标准进行准确度评价。从998例DNA标本中选择部分样本进行以下研究,选择10份包含所有位点为野生型的基因组DNA,用飞行时间质谱检测,进行特异性评价;选择4份包含所有位点杂合基因型标本,梯度稀释后检测,评价位点的测定下限;选择14份包含中国人群所有常见位点基因型标本,进行批间和批内精密度评价;选择2份包含代表性峰形的野生和纯合突变标本各1份,进行抗干扰研究。结果该方法单次检测的符合率高于99.5%,飞行时间质谱平台与Sanger测序法检测完全一致,测定下限为0.4 ngDNA,批间和批内精密度均为100%,UNG酶的降解能力为10^5拷贝/μl的气溶胶,反应体系对基因组和PCR各中间产物气溶胶有很强的抗干扰能力,点样及检测过程中芯片不同基质间无交叉污染。结论飞行时间质谱多基因检测系统检测性能良好,可应用于临床检测,并且本文建立了基于飞行时间质谱平台多基因检测系统的性能验证研究方案,为广大科研和检验工作者研究该平台打下基础。     

宏基因组测序技术检测血流感染样本去宿主干扰效应四种预处理方法的比较

目的 探讨不同去宿主方法对血流感染样本中病原微生物检测的影响。方法 以浓度分别为105,103,102和10CFU/ml的模拟金黄色葡萄球菌血流感染样本为研究对象,将检测分为全血组和血浆组,使用宏基因组测序（metagenomic next generation sequencing,mNGS）比较Saponin法、Wash法、CD45法和MolYsis法四种预处理方法的病原微生物reads检出数和占比,以评估不同方法的去宿主效率。结果 血流感染病原微生物初始浓度在103CFU/ml以下的微生物检出占比小于0.15%。四种去宿主方法中,Saponin法reads检出数最多,病原微生物检出占比最高,血浆组检测结果占比可提升至18%以上;Wash法及CD45法相比直接提取法病原微生物reads检出数均未显著增加,MolYsis法的reads检出数水平有明显增高。血浆组病原微生物reads检出数多于全血组,去宿主方法可明显提高病原微生物的丰度。结论 对比四种去宿主方法的mNGS检测结果,Saponin法可明显去除宿主核酸,提高病原微生物的reads检出数,尤其血浆组去宿主效果最好。     

三种糖化白蛋白酶法试剂的性能验证

目的评价3种糖化白蛋白酶法试剂的性能。方法选取2016年5月我院收治的糖尿病患者及同期健康体检人群剩余血清制备混合血清。使用LABOSPECT 008全自动生化分析仪,依据上海市临检中心对GA的管理要求、美国临床和实验室标准协会(CLSI’88)关于ALB的要求,对日本旭化成、宁波瑞源及复星长征(A、B、C)的糖化白蛋白酶法试剂进行评价。结果 3厂家试剂测定高低值混合样本批内精密度均1/4上海临检中心允许偏差(3.75%)。3种试剂测定上海临检中心GA室间质评样本,A、B试剂测定值与认证值的平均偏倚1/2允许总误差(±7.5%),C试剂超出可接受范围,正确度不佳。A试剂抗干扰能力最佳; Vc对B、C最终GA%结果有较大影响。0.2 mmol/L的糖化氨基酸对A试剂影响在可接受范围; 0.1 mmol/L糖化氨基酸对B和C试剂均有显著影响。结论 3种糖化白蛋白酶法试剂中A试剂性能最优,尤其是在抗干扰、糖化氨基酸的消除反应方面最为突出。