KCL22/NOD-SCID小鼠慢性粒细胞白血病移植瘤模型的建立及其鉴定

目的：研究人慢性粒细胞白血病细胞株KCL22在NOD-SCID小鼠体内致白血病的能力,为慢性粒细胞白血病血液移植瘤模型鼠的建立奠定基础。方法：取对数生长期的KCL22细胞2×107个,经尾静脉注射入NOD-SCID小鼠,对照组小鼠注射无菌PBS。观察小鼠一般情况,瑞氏染色监测血象和骨髓象变化,PCR检测骨髓细胞BCR-ABL基因转录水平,HE染色观察肝、脾组织肿瘤细胞浸润情况。结果：实验组小鼠于注射细胞后约4周开始出现反应力下降、精神萎靡、股骨肌肿大、后肢骨节出血点等体征,外周血白细胞从第5周逐渐增多,计数较对照组显著升高（P＜0.05）,血涂片可见幼稚粒细胞,肝、脾、骨髓组织切片可见白血病细胞浸润,骨髓细胞高表达BCR-ABL融合基因,未经治疗存活约70天,较对照组显著缩短（P＜0.05）。结论：KCL22细胞可成功构建NOD-SCID小鼠慢性粒细胞白血病移植瘤模型。     

BCR-ABL SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体的构建及促进白血病K562/G01细胞凋亡

目的探讨构建BCR-ABL SH3-T79Y突变体(简称SH3-T79Y突变体)的重组腺病毒载体及其对白血病耐药细胞株K562/G01细胞凋亡的影响。方法以p Mig210质粒为模板,用重叠延伸PCR扩增SH3-T79Y突变体片段,将其克隆入重组腺病毒载体,通过鉴定、包装、扩增后得到含SH3-T79Y突变体的重组腺病毒。将重组腺病毒感染白血病K562/G01细胞株,测定其感染效率,瑞氏染色检查细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测BCR-ABL、Crk L磷酸化及总蛋白水平。结果重组腺病毒载体构建成功。SH3-T79Y突变体转染K562/G01细胞株72 h效率大于80%,可见明显的凋亡小体、核聚集等凋亡现象,凋亡率为32.46%,较对照组显著增加(P0.05);明显抑制BCR-ABL和Crk L的磷酸化水平,降低BCR-ABL总蛋白表达(P0.05)。结论成功构建SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体,并证实其通过抑制BCR-ABL及底物Crk L磷酸化水平促进K562/G01细胞凋亡。     

血站核酸检测实验室HBV DNA项目室内质量控制方法探讨

目的探讨血站核酸检测实验室乙型肝炎病毒(HBV)DNA项目室内质量控制(IQC)方法。方法以HBV DNA阳性质控品、试剂盒阳性对照为反应性,试剂盒阴性对照为阴性,且内标阳性为实验在控。根据3个月的检测数据,分别计算阳性质控品循环域值(Ct)、阳性对照Ct值、内标Ct均值、内标Ct值标准差的均值和标准差,绘制Levey-Jenning质控图,使用Westgard多规则质控方法进行判断。统计检测标本总数及混样反应性、拆分反应性次数,计算总体监控指标(混检阳性率、拆分阳性率、拆出率)。结果所有批次实验均在控。阳性质控品Ct值在第32天、内标Ct均值在第30天和第58天发生1_3s失控,内标Ct值标准差在第27天发生22s失控、在第58天发生R4s失控。共检测标本14172份,其中HBV DNA混样反应性13次,拆分反应性8次,混检阳性率、拆分阳性率和拆出率分别为0.092%、0.056%、61.540%。结论血站血液筛查日常检测时,在使用HBV DNA阳性质控品判定当批实验在控的基础上,结合阳性质控品Ct值、试剂盒阳性对照Ct值、内标Ct均值、内标Ct值标准差的Levey-Jenning质控图及总体监控指标进行回顾性分析,可以有效进行血站HBV DNA检测的IQC。     

ELISA检测HIV抗原抗体的回顾性分析

目的 对本站ELISA检测HIV Ag-Ab作回顾性分析,达到持续改进的目的 .方法 对本站所用2种试剂的检测不合格率、双试剂不合格率、复检率、单试剂不合格率、复检符合率、试剂使用率进行统计,同时利用室间质评得分和z比分数分析质评成绩.结果 HIV检测不合格率为0.15％(188/123458),双试剂不合格率为0.0...