女性A型血友病FⅧ基因突变分析

报道罕见的女性A型血友病1例，并对其凝血因子Ⅶ进行基因突变分析。患者，女，65岁，因为跌倒后右胸痛2d入院，院内查体提示胸壁皮下血肿，双下肢等长，髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61．3s，正常血浆纠正后为41．3s，而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。FⅧ活性为2％，FⅨ活性为200％，vWF：Ag为120％，vWF：RCof100％，vWF：CBAl28％，FⅧ结合分析正常；髋关节X片提示;双侧髋臼发育不良，髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA，根据NM_000132之凝血因子FⅦ基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物，行聚合酶链反应扩增，并对扩增产物进行测序分析，测序结果与标准序列进行比较，发现该患者出现4111A→C杂合突变，使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸，产生一错意突变，该突变未见其它文献报道．     

腹膜前无张力修补术与传统疝修补术治疗复发性腹股沟疝的比较

[目的]比较腹膜前无张力疝修补术与传统疝修补术（哈斯特氏法）治疗成人复发性腹殷沟疝的效果。[方法]回顾分析我院2000年3月-2007年10月行腹膜前无张力疝修补术33例及行哈氏术30例的临床资料，比较其复发情况及手术后并发症。[结果]腹膜前无张力修补法组术中发生术后感染的感染率低于哈斯特氏法[0％（0／30）vs13．3％（4／30），x^2=4．698，P=0．03]。两组随访11～33月，无张力修补术组1例（3％）复发，平均生存（未复发）时间为（26．577±1．361）月；哈斯特氏法组10例（3313％），平均生存（未复发）时间为（31．5±1．06）月；两组生存时间有统计学差异（log-rank法，x^2=10．64，P=0．001）；COX比例风险模型结果显示，哈斯特氏法较腹膜前无张力修补法增加了患者复发的危险度是RR=13．598。[结论]腹膜前无张力疝修补术具有复发率低，并发症少的优点，明显优于传统疝修补术，应推广开展此类修补术。     

OTC市场消费者行为分析

非处方药(Over-the-Counter,O T C)是指由国家药品监督管理部门公布的,不需要凭医师处方,消费者可以自行判断、购买和使用的药品。随着新的医疗保险办法的实施,药品分类管理办法的出台,O T C目录的公布,病人自主治疗意愿的增加,大量零售药店出现了,消费者从药店购买非O T C的机     

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

目的：构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达，探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法：实验于2004-8／12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板，反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因，经测序验证后，亚克隆至穿梭质粒pAdTrack CMV中，与骨架质粒pAdEasy 1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增，利用AdEasy 1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达，并用病毒上清转化大鼠神经干细胞，检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果：①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸，同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆，转染293细胞包装后的病毒滴度为lxl09PFU／mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论：成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。     

人内皮抑素重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用Adeasy1系统,构建并鉴定人内皮抑素(hES)重组腺病毒。方法:从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES中将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrackCMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达。结果:重组腺病毒载体经PCR鉴定正确,病毒滴度为1×108PFU/ml。结论:成功构建了人内皮抑素重组腺病毒Ad-ASP-hES,为内皮抑素基因治疗新生血管的进一步研究奠定了基础。     

双色竞争性荧光定量PCR检测唐氏综合征

目的 建立一种快速检测唐氏综合征(Down syndrome,DS)的双色竞争性荧光定量聚合酶链反应(dual-color competitive quantitative fluorescent polymerase chain reaction,DCC-QF-PCR)方法,并探讨其应用于DS产前诊断的可能性.方法 提取30例DS患者和60名正常人的外周血DNA,设计DSCR和USC2两基因的特异共用引物和双色特异性TaqMan探针,同一反应管中进行两基因的DCC-QF-PCR,并与DSCR和GAPDH两基因的QF-PCR实验结果进行比较.提取46份羊水胎儿细胞的DNA进行DSCR和USC2两基因的DCC-QF-PCR,并与染色体核型分析结果对比;克隆出DSCR和USC2的单克隆基因片段,定量后进行定量配比的DCC-QF-PCR,并计算DSCR∶USC2拷贝数的比值.结果 DCC-QF-PCR检测中,DS患者DSCR∶USC2拷贝数比值范围为1.41～1.74,显著高于正常人的0.93～1.15;而QF-PCR检测中,DSCR∶GAPDH拷贝数比值范围较DSCR∶USC2增大.46份羊水检测中,3份DSCR∶USC2拷贝数比值分别为1.61、1.64和1.54,为DS患儿,其余43份正常,与染色体核型分析结果一致;DSCR与USC2基因定量配比的DCC-QF-PCR所得DSCR∶USC2拷贝数比值范围与配比值差异无统计学意义(P＞0.05),检测结果较为稳定.结论 DCC-QF-PCR具有准确、快速、需模板量少和费用低廉等特点,该方法在DS的基因诊断和产前基因诊断中有较为广泛的应用前景.     

绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达

目的:构建大鼠胶质细胞源性神经营养因子基因的重组腺病毒并观察其在神经干细胞上的表达,探索胶质细胞源性神经营养因子作为基因治疗神经病变的价值。方法:实验于2004-8/12在四川大学华西医院眼疾病分子遗传实验室进行。以新生SD大鼠大脑皮层细胞RNA为模板,反转录聚合酶链反应扩增出全长的胶质细胞源性神经营养因子基因,经测序验证后,亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,与骨架质粒pAdEasy1同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达,并用病毒上清转化大鼠神经干细胞,检测胶质细胞源性神经营养因子基因的表达。结果:①胶质细胞源性神经营养因子基因扩增后进行测序显示扩增片段为653bp个核苷酸,同源性比较该序列正确。②重组腺病毒载体经酶切验证为阳性克隆,转染293细胞包装后的病毒滴度为1x109PFU/mL。③转入胶质细胞源性神经营养因子的重组腺病毒的神经干细胞扩增出653bp的带。结论:成功构建了胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒并见其在大鼠神经干细胞中进行了表达。     

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.     

促甲状腺素受体在BALB/c小鼠主要组织和器官的分布及其意义

目的:研究正常BALB/c小鼠体内各主要组织、器官的促甲状腺素受体(thyrotrophin receptor,TSHR) mRNA的分布,为Graves病(GD)或／和甲状腺相关眼病(TAO)动物模型的制作提供病理学依据。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测BALB/c小鼠甲状腺及腺外部分组织、器官中TSHR mRNA表达水平。结果:以甲状腺组织TSHR mRNA表达水平为标准1,呈相对高表达组织依次为肾上腺、胸腺、睾丸、卵巢及眼外肌,呈相对低表达的组织依次为肾脏、脑组织、腹壁脂肪、下颌下腺、肺脏、腹壁皮肤、眼眶脂肪、肝脏直至脾脏,胰腺、心脏及腹直肌中未见TSHR mRNA表达。结论:BALB/c小鼠体内,TSHR除了在甲状腺中表达外,还广泛存在于甲状腺外组织,且全身各处的TSHR作用机制可能不同。     

HSF4基因突变导致常染色体显性遗传核性白内障

目的 鉴定一个延续5代常染色体显性遗传核性白内障家系的致病基因。方法 根据已知先天性白内障致病基因在染色体上的定位，选择了D16S539分子标记，对该家系进行连锁分析，通过基因测序鉴定致病基因。结果 该69名家系成员中有16例患有先天性核性白内障，致病基因定位于16q21-q22，并在候选基因HSF4外显子3检测到一新的突变杂合子134456G-A，该突变导致112E的同义突变，而在家系正常成员中则未检测到该突变。结论 该家系核性白内障表型很可能系由HSF4基因134456G-A突变所致，且此突变尚未见报道。