利用双粒病毒组复制子系统在植物细胞中表达疫苗蛋白[英]

植物源性疫苗可通过简单的方法纯化或者直接食用,因此经济而安全。这类疫苗可用转基因植物或植物病毒载体表达,但是通常较难制备能表达足够疫苗蛋白以激发免疫应答的转基因植物,此外高表达外源蛋白对植物宿主细胞有毒性。而植物病毒载体表达期短,且表达的多肽分子的大小有限。双粒病毒组表达系统具有表达水平高和表达蛋白分子不受限制的优点,已被用作基因放大系统。美国Cornell大学Hefferon等设计了一个豆黄矮双粒病毒组(BeYDV)复制子载体,包含BeYDV复制所须的顺式作用元件,在植物烟草细胞株NT-1中研究了Rep基因的放大作用。首先在报…     

人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法的建立及应用

目的建立具有较好试验重复性的人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法。方法建立快速微量中和试验方法,用于健康人血浆及IVIG中的CMV中和抗体效价检测。结果用该方法检测336份健康人血浆,其中CMV中和抗体效价≥1∶128的比例为28.1%;检测27批"蓉生静丙"和9批国内其它厂家IVIG的CMV中和抗体效价,其CMV中和抗体效价的GMTs分别为1∶498和1∶485。结论建立了快速、简便、检测通量高、重复性较好的快速微量中和试验方法,为CMV-IVIG的研制提供了可供选择的血浆筛选方法。     

高滴度呼肠孤病毒3型的制备及滴度检测

 目的   制备高滴度呼肠孤病毒3型（reovirus 3,Reo-3）病毒液,并检测Reo-3滴度。 方法   以幼仓鼠肾细胞（BHK-21）为病毒培养基质和滴度测定细胞。将Reo-3按10⁰至10^-5感染复数（MOI）接种BHK-21,再分别用细胞病变法和蚀斑形成法检测病毒,用Karber法计算病毒滴度。 结果   BHK-21感染Reo-3后能产生明显病变。以10^-4 MOI的Reo-3接种后48 h,收获液中病毒滴度最高,细胞病变法检测为9.625 lgTCID50/ml,蚀斑形成法检测为8.671 lgPFU/ml。 结论   制备了高滴度Reo-3,为开展该病毒去除灭活研究奠定了基础。     

EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立

目的 建立以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测猪细小病毒(PPV)的方法,为血液制品中病毒去除效果的工艺验证提供高效准确的技术平台.方法 根据PPV的VP2基因保守序列,设计并合成引物.对目的片段进行PCR扩增,将扩增的PPV病毒VP2基因片段克隆入PMD19-T载体,重组质粒PMD19-T-VP2经测序鉴定正确后,作为标准品模板,用于标准曲线的绘制和该实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性检测的材料.结果 应用重组质粒PMD19-T-VP2制作的荧光定量PCR扩增曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;该方法检测灵敏度的下限能达到102copies/μl;与其他DNA病毒和同种属的细小病毒无明显的交叉反应;连续重复检测高、中、低浓度样品,批内批间变异系数小,重复性好.结论 以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测PPV的方法提高了检测灵敏度,缩短了工艺验证的时间.     

S/D法和低pH孵放法在富含IgM免疫球蛋白中脂包膜病毒的灭活研究

目的以水泡性口炎病毒(VSV)、辛德毕斯病毒(Sindbis)和伪狂犬病毒(PRV)为指示病毒,验证S/D和低pH孵放2种处理方法对富含IgM制剂的脂包膜病毒灭活效果。方法将指示病毒加入富含IgM制剂中,在无保护剂状态下,分别经S/D和低pH孵放处理后,测定残余病毒滴度,以病毒滴度下降数代表灭活效果。结果 S/D法使PRV和Sindbis的病毒滴度下降分别为2.94和5.25 Logs;低pH孵放使PRV和VSV的病毒滴度下降分别为6.03和4.94 Logs。结论 S/D法和低pH孵放2种处理方法对脂包膜病毒的模拟病毒VSV、Sindbis和PRV病毒,均能有效灭活。     

转基因植物疫苗

生产疫苗抗原的植物表达系统以其经济易操作而极具吸引力。本文就转基因植物疫苗的优点、临床研究和应用前景进行简要综述。     

转基因植物疫苗

生产疫苗抗原的植物表达系统以其经济易操作而极具吸引力.本文就转基因植物疫苗的优点、临床研究和应用前景进行简要综述.