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目的分析液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)检测载脂蛋白(apo) C-Ⅰ、C-Ⅱ和C-Ⅲ的酶解效率,为其准确定量检测提供依据。方法对不同apo C含量的混合人血清样品进行变性、还原、烷基化等前处理,经胰蛋白酶酶解,用LC-MS/MS定量检测目标肽段;分析多肽释放图谱和样品间多肽释放的相关性。结果肽段TP(apo C-Ⅰ)、TY(apo C-Ⅱ)和GW(apo C-Ⅲ)的响应值较高。酶解1 h时,肽段ES和DA即达释放峰值; 3 h时,TY释放最充分;而TP、GW和EF的释放速率相对较慢,在8 h达最高值。TP、TY和GW达峰值后,峰面积随酶解时间延长而逐步下降。apo C-Ⅰ释放出的2条肽段EF和TP在5份样品之间一致,相关系数(r)=0.993 9(3 h)和0.992 9(20 h); apo C-Ⅱ(ES和TY肽段)和apo C-Ⅲ(DA和GW肽段)的r值介于0.976 1～0.997 3。结论 apo C-Ⅰ、apo C-Ⅱ和apo C-Ⅲ肽段的酶解效率受肽段自身特性和酶解环境影响,合适地选择代表性肽段和酶解条件将有助于其准确定量检测。 相似文献
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目的探讨载脂蛋白(apo)A1和apo B的候选参考方法在室间质量评价(EQA)中的应用价值。方法以5个水平的冰冻人血清制品作为EQA质评物,采用免疫透射比浊法(ITA)检测。采用同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)定量技术对EQA样本进行定值,包括变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,使用C18色谱柱分离,质谱采用正离子模式和多反应监测定量。结果有340家实验室使用ITA进行检测。apo A1项目,EQA2~EQA4 ID-LC-MS/MS结果均低于ITA的中位数;EQA1和EQA5 ID-LC-MS/MS结果高于ITA的中位数;Apo B项目,除EQA4外,其他ID-LC-MS/MS结果均低于ITA的中位数。结论采用ID-LC-MS/MS技术的候选参考方法在基于靶值的评价中具有一定的应用价值。 相似文献
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目的优化检测载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)和载脂蛋白B(apoB)的同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)候选参考方法。方法选5个正常三酰甘油(TG)含量(TG≤2.3 mmol/L)的样品为校准品,2个高三酰甘油血症患者和1个正常三酰甘油患者的血清为待测样品。载脂蛋白经过变性、烷基化、胰蛋白酶酶解后,经LC-MS/MS进行分离和定量。对apoA-Ⅰ的特征肽AKPALEDLR、apoB的特征肽TGISPLALIK和TEVIPPLIENR进行母子离子对的优化。结果优化后与优化前的峰面积比范围在1.5至67.2之间。优化后,定性/定量离子对的比值的不精密度降低,最高降低3.1%(AKPALEDLR 338.2/403.2),最低降低0.6%(AKPALEDLR 338. 2/532. 4)。AKPALEDLR肽段和VQPYLDDFQK肽段定量apoA-Ⅰ结果一致;TEVIPPLIENR肽段和TGISPLALIK肽段定量apoB结果除HTG2外一致。结论选择合适的离子对可以显著提高载脂蛋白相应特征肽的峰面积,降低定性/定量离子对的比值的不精密度,使定量结果更准确。 相似文献
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目的:研究1种基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术的血清17α-羟孕酮（17α-OHP）候选参考测量程序并对其进行评价。方法:2019年12月,取上海市临床检验中心员工体检留存的血清标本,采用正己烷乙酸乙酯混合液（体积比3∶2）提取加入同位素内标的血清样本,C18反向色谱柱分离,正离子电喷雾质谱仪检测,参照美国... 相似文献
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目的探讨液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)在载脂蛋白E(apo E)室间质量评价中的应用。方法分别将5份混合人血清样品冷链运送到76家实验室,用免疫比浊法(ITA)进行单次检测。以同位素标记精氨酸的肽段为内标,对标本进行变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,液相色谱部分采用SB-C18色谱柱分离,质谱部分采用正离子模式和多反应监测定量。JMP13.0软件分析不同方法分组所对应的相对偏倚。结果对于所有样品,ITA检测apo E的方法组内不精密度在1.7%至20.4%之间。总不精密度在8%左右(s B~s E样品)。5个样品相对偏倚的均值分别是(按照样品浓度由低到高排列):-34.2%、-9.4%、-9.8%、-2.7%和-2.1%。高浓度样品比低浓度样品更接近LC-MS/MS检测结果。结论 LC-MS/MS检测apo E可评价免疫法的准确性,为临床应用提供帮助。 相似文献
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