低龄低体质量小儿外周血干细胞采集2例:安全性及不良反应(英文)

背景:随着外周血干细胞移植的迅速发展,目前已替代骨髓移植,成为造血干细胞移植的首选方法.由于小儿尤其是低龄低体质量幼儿自身的特殊性,外周血干细胞采集相对困难.目的:观察采用血细胞分离机采集低龄低体质量小儿外周血造血干细胞的安全性及不良反应.方法:采用自体造血干细胞移植治疗2例年龄低于2岁体质量低于15 kg的1型糖尿病患儿.主要方法:进行适当的心理安慰以减轻其对采集的恐惧感.采集前1周常规口服钙剂,减少采集中低钙的发生.采集前24 h禁食油腻食物,采集当天禁食牛奶,以免出现乳糜血液,影响细胞采集.1周前常规口服钙剂,减少采集中低钙的发生.常规锁骨下静脉置管.采集前给予200 mL经照射(25 Gy)的红细胞悬液充盈分离管路,以避免低血容量综合征及减少对红细胞压积的影响.设置个体化的采集参数.采集时循环血量为三、四倍体循环量,以保证足够的循环总量.分离过程中ACD/全血的比例保持在1:11～1:13之间,防止发生枸橼酸钠中毒等.结果与结论:2例患儿外周血干细胞均1次采集成功,采集过程中患儿各项生命体征平稳,无不良反应.采集后单个核细胞分别达14.71×108/kg,18.82×108/kg;CD34+分别达34.13×108/kg,32.38×106/kg.只要做好充分准备,低龄低体质量幼儿外周血干细胞采集是安全可行的.     

1型糖尿病的干细胞治疗：可能成为临床之有效方案？

背景：如何让1型糖尿病达到完全治愈,受到了世界医学界的广泛关注。近年来随着干细胞的认识和不断发展,将干细胞用于1型糖尿病的治疗成为研究热点。 目的：综述近年来国内外1型糖尿病干细胞治疗的相关研究进展。 方法：应用计算机检索1997-01/2009-06 PubMed数据库(网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)相关文章,检索词为“Type 1 diabetes,embryonic stem cells,pancreatic stem cells,mesenchymal stem cells,hematopoietic stem cells”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索1997-01/2009-06中国期刊全文数据库(网址http://www.wanfangdata.com.cn)相关文章,检索词为“1型糖尿病,胚胎干细胞,胰腺干细胞,间充质干细胞,造血干细胞”,并限定文章语言种类为中文。共检索到文献134篇。 结果与结论：1型糖尿病是T细胞介导的胰岛β细胞破坏的自身免疫性疾病,需应用外源性胰岛素来控制血糖,目前没有根治办法。干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,能诱导分化成胰岛素分泌细胞,已经成为人们寻找诱导β细胞替代物的新资源。目前干细胞的研究可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞的研究大都是动物实验,在体内环境下的扩增和分化不易控制,且来源于胚胎,伦理学上未得到普遍认同,限制了临床研究。成体干细胞中研究较多的是胰腺干细胞、间充质干细胞和造血干细胞。胰腺干细胞没有明确的表面标志,取材困难,不易采集纯化,用于临床的难度较大;间充质干细胞的来源比较丰富,但对于它的跨胚层分化仍有争议,而且分化后的细胞在体内的功能维持时间还不确定;造血干细胞是目前研究最广泛、应用最成熟的成体干细胞,不仅来源丰富,易采集,而且能抑制自身排斥反应,拥有广泛的应用前景,必将成为1型糖尿病的研究热点。     

汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究

本研究从MDR1基因转录调控和细胞凋亡两方面探讨汉防己甲素(TTD)预防K562细胞阿霉素(ADM)诱导性多药耐药(MDR)产生的作用机制。本实验分3组,第1组为K562细胞空白对照组;第2组用ADM作用K562细胞24小时诱导细胞耐药;第3组采用TTD预处理K562细胞24小时后,再用ADM诱导耐药。采用RT-PCR检测各组细胞转录因子c-Jun、YB-1及Survivin的mRNA表达水平;Western blot法检测c-Jun、YB-1的核内蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡程度。结果表明,0.6μg/ml阿霉素作用后K562细胞MDR1基因转录上调;与空白对照组(第1组)相比,ADM诱导的耐药细胞组(第2组)c-Jun mRNA和蛋白表达减低(p均<0.05),YB-1 mRNA和蛋白表达明显上调(p均<0.05);Survivin mRNA表达无明显差异(p>0.05);细胞凋亡率(8.31%)比空白对照组(0.75%)稍有增加;TTD预处理后再用ADM诱导组(第3组)与ADM作用组相比,c-Jun mRNA和蛋白表达增加(p均<0.05);YB-1 mRNA和蛋白表达下调(p均<0.05);Survivin mRNA表达明显减少(p<0.05),细胞凋亡率(97.2%)明显增加。结论:TTD预防白血病细胞耐药形成的机制可能与其下调YB-1基因和蛋白的表达、上调c-Jun基因和蛋白的表达,从而下调MDR1基因表达有关,另外,TTD与ADM联合作用还能抑制Survivin的表达,增加白血病细胞的凋亡。     

自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退2例*

背景：已有研究证实造血干细胞移植技术治疗1型糖尿病效果确切。 目的：观察自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退的安全性和有效性。 方法：免疫清除联合自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退患儿2例。经造血干细胞动员、采集、免疫抑制及造血干细胞回输治疗。治疗前后观察比较胰岛素、左旋甲状腺素钠用量、血清C肽质量浓度、糖化血红蛋白水平及甲状腺功能的差异。 结果与结论：1例患儿治疗后C肽质量浓度恢复正常,停用胰岛素,甲状腺素片减量,甲状腺功能正常;另1例患儿治疗后胰岛素减量64%,停用甲状腺素片,甲状腺功能正常。说明自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退的患儿是安全的,近期疗效明显。     

汉防己甲素干预K562细胞mdr1基因表达的研究

目的 观察汉防己甲素(TTD)对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响,并初步探讨其机制.方法 采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用,以0.6μg/ml阿霉素单独作用或0.6μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD(0.5、1.0、2.0μg/ml)作用于K562细胞,用RT-PCR法检测mdr1 mRNA、NF-kB mRNA水平,用流式细胞术检测P-gP的表达情况,用胞内罗丹明123(Rho123)积聚试验检测P-gP的功能.结果 空白对照K562细胞未见明显mdr1 mRNA及P-gP表达(水平分别为0.171±0.012、7.85±0.15),细胞内Rho123平均荧光强度(反映P-gP功能)为711.9±63.6,NF-kBmRNA水平为0.783±0.090;0.6μg/ml阿霉素作用24 h后mdr1 mRNA、P-gP、NF-kB mRNA表达上调为0.428±0.012、73.68±1.84、1.075±0.047,细胞内Rho123平均荧光强度下降为347.8±60.6(P值均＜0.05);2.0μg/ml TTD预作用24 h再与0.6 μg/ml阿霉素联合作用24 h能显著抑制阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达及功能、NF-kB mRNA的上调(分别为0.148±0.006、7.18 ±0.38、799.7±45.8、0.627±0.098)(P＜0.05),而0.5、1.0μg/TTD无明显影响.结论 TTD以浓度依赖性的方式干预阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达和P-gp功能的上调,其机制可能与TTD抑制了阿霉素诱导的NF-kB的表达有关.     

1型糖尿病的干细胞治疗:可能成为临床之有效方案?

背景:如何让1型糖尿病达到完全治愈,受到了世界医学界的广泛关注.近年来随着干细胞的认识和不断发展,将干细胞用于1型糖尿病的治疗成为研究热点.目的:综述近年来国内外1型糖尿病干细胞治疗的相关研究进展.方法:应用计算机检索1997-01/2009-06 PubMed数据库(网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)相关文章,检索词为"Type 1 diabetes,embryonic stem cells,pancreatic stem cells,mesenchymal stem cells,hematopoietic stem cells",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索1997-01/2009-06中国期刊全文数据库(网址http://www.wanfangdata.com.cn)相关文章,检索词为"1型糖尿病,胚胎干细胞,胰腺干细胞,间充质干细胞,造血干细胞",并限定文章语言种类为中文.共检索到文献134篇.结果与结论:1型糖尿病是T细胞介导的胰岛β细胞破坏的自身免疫性疾病,需应用外源性胰岛素来控制血糖,目前没有根治办法.干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,能诱导分化成胰岛素分泌细胞,已经成为人们寻找诱导β细胞替代物的新资源.目前干细胞的研究可分为胚胎干细胞和成体干细胞.胚胎干细胞的研究大都是动物实验,在体内环境下的扩增和分化不易控制,且来源于胚胎,伦理学上未得到普遍认同,限制了临床研究.成体干细胞中研究较多的是胰腺干细胞、间充质干细胞和造血干细胞.胰腺干细胞没有明确的表面标志,取材困难,不易采集纯化,用于临床的难度较大;间充质干细胞的来源比较丰富,但对于它的跨胚层分化仍有争议,而且分化后的细胞在体内的功能维持时间还不确定;造血干细胞是目前研究最广泛、应用最成熟的成体干细胞,不仅来源丰富,易采集,而且能抑制自身排斥反应,拥有广泛的应用前景,必将成为1型糖尿病的研究热点.     

MAPK/ERK信号通路调节K562细胞中mdr1基因的诱导性表达

目的 观察多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导K562细胞mdr1基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用,探讨mdr1基因的转录调控机制.方法 多柔比星初始浓度为0.01 μg/ml,诱导K562细胞24 h后撤药继续培养至细胞状态恢复,加入多柔比星继续诱导24 h,浓度增加为0.02μg/ml.依上述方法 多柔比星浓度逐渐增加,直至0.05μg/ml.收集DOX浓度为0.01、0.03和0.05μg/ml时的细胞.RT-PCR检测mdr1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gP)的表达,Western blot 检测ERK活化情况.MAPK的抑制剂PD98059预处理K562细胞1 h后与多柔比星共同作用,逆转录(RT)-PCR和流式细胞仪分别检测mdr1基因和P-gP的表达情况.结果 经多柔比星作用后K562细胞中ERK磷酸化增强,同时mdr1基因转录上调,及其蛋白产物P-gP的表达也增加,当多柔比星浓度为0.05μg/ml时两者的表达均增加了5倍之多.而用PD98059预处理细胞后能明显抑制多柔比星诱导mdr1基因转录和蛋白表达,多柔比星浓度为0.03μg/ml时PD98059对mdr1基因表达的抑制率为(74.1±0.11)%,多柔比星浓度为0.05 μg/ml时抑制率为(70.2±0.14)%.结论 多柔比星能够诱导K562细胞mdr1基因表达,同时激活MAPK/ERK信号通路,阻断ERK的活化能抑制mdr1基因的诱导性表达.     

自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退2例

背景:已有研究证实造血干细胞移植技术治疗1型糖尿病效果确切.目的:观察自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退的安全性和有效性.方法:免疫清除联合自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退患儿2例.经造血干细胞动员、采集、免疫抑制及造血干细胞回输治疗.治疗前后观察比较胰岛素、左旋甲状腺素钠用量、血清C肽质量浓度、糖化血红蛋白水平及甲状腺功能的差异.结果与结论:1例患儿治疗后C肽质量浓度恢复正常,停用胰岛素,甲状腺素片减量,甲状腺功能正常;另1例患儿治疗后胰岛素减量64%,停用甲状腺素片,甲状腺功能正常.说明自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病合并甲状腺功能减退的患儿是安全的,近期疗效明显.     

Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。