84消毒液对PCR实验的影响

ＰＣＲ技术具有特异性好、灵敏度高、简便、快速等优点 ,可直接检测机体或病原体基因的存在或变异 ,对某些遗传性疾病或感染性疾病作出诊断 ,而被广泛应用于临床和实验研究。但因采用一次性用品 ,造成成本昂贵 ,许多实验室为降低成本仍将某些用品消毒清洗后回收使用。我们对 84消毒液在实验过程的影响作了一定的研究 ,现报道如下 :1　材料与方法 1.1　仪器ＰＥ960 0ＰＣＲ扩增仪 (美国ＰＥ公司 ) :ＺＦ - 5多功能紫外线透射仪 (上海 ) ,电泳仪 (北京六一电器厂 )。1.2　试剂华美、复星公司ＰＣＲ试剂盒 (淋球菌ＮＧ -ＤＮＡ、解尿支原体ＵＵ…     

肝癌组织中DNA甲基转移酶基因表达的分析

目的分析肝癌患者癌组织、癌旁组织、肝硬化组织中甲基转移酶（DNMT）基因的表达情况。方法应用荧光定量PCR（FQ-PCR）检测44例分期及分化程度不同的肝癌患者癌组织、癌旁组织和35例肝硬化组织中DNMT基因mRNA的表达水平。不同组间DNMT表达水平的差异采用ANOVA分析。结果与癌旁组织相比,癌组织及肝硬化组织中4种DNMTs mRNA表达水平均高于相应癌旁组织;肝硬化组织及癌组织中DNMT1的平均表达水平明显高于癌旁组织（癌组织P〈0.01、肝硬化组织P=0.02）;DNMT2水平虽比相应组织高,但没有统计学意义（癌组织P=0.12、肝硬化组织P=0.35）;DNMT3A与DNMT3B的表达水平也明显高于相应癌旁组织（DNMT3A：癌组织P〈0.01、肝硬化组织P=0.01;DNMT3B：癌组织P=0.03、肝硬化组织P〈0.05）。不同年龄、性别、分化程度和分级肝癌中DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B表达水平差异无统计学意义（P=0.23、0.45、0.32、0.36）。结论肝癌患者癌组织及硬化组织中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA明显高于癌旁组织;DNMT表达与肝癌发生或发展可能有关。     

肺癌患者PTEN基因启动子高甲基化的检测

目的 探讨肺癌患者组织、外周血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子异常基因化状况及其在肺癌诊断中的价值.方法 用甲基化特异性PCR方法检测组织、血浆及BALF中的PTEN基因启动子区CpG岛甲基化.结果 45例肺癌患者中,PTEN基因启动子异常甲基化率组织为26.67%(12/45)、血浆为15.56%(7/45),BALF为22.22%(10/45);而非肺癌组织、正常对照血浆、非肺癌患者BALF中未检出甲基化;血浆、BALF中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.01).结论 血浆、BALF中PTEN基因异常甲基化改变的检测在肺癌的早期特异诊断等方面有一定的价值.     

宫颈癌中多药耐药相关蛋白基因表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白（multi-drug resistance-associated protein,MRP）基因在宫颈癌组织中的表达情况及临床意义。方法采用RT-PCR技术检测47份宫颈癌组织和12份正常宫颈组织中MRP基因mRNA的表达情况。结果正常宫颈组织中MRP mRNA的表达为0.20±0.11,宫颈癌组织中为0.51±0.28,宫颈癌组织MRP基因表达高于正常宫颈组织（t=6.04,P〈0.01）。MRP表达在肿瘤直径、有无淋巴转移、不同肿瘤分化程度、组织学分型及不同临床分期上差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 MRP基因可能参与宫颈癌原发性耐药的产生,检测其表达对制订治疗方案有一定价值。     

多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱β-内酰胺酶基因检测及分布研究

目的:了解本院鲍曼不动杆菌多重耐药现状,指导临床用药;分析多重耐药菌株的超广谱β-内酰胺酶基因存在状况和菌株的亲缘性,揭示鲍曼不动杆菌的耐药机制.方法:自临床分离的鲍曼不动杆菌205株,采用纸片扩散(K-B)法进行药物敏感试验,用PCR方法检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌的超广谱β-内酰胺酶基因.用多分子标志分型法,以13种基因为分子标志行检测结果的样本聚类分析,检测菌株的亲源性.结果:205株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率18%.对其他抗生素耐药率均在80%左右.PCR检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌,bla TEM基因阳性率为50%,bla PER基因阳性率70%,bla VEB基因阳性率10%,bla CARB基因阳性率10%,bla GIM基因阳性率5%,bla DHA基因阳性率15%;未检出bla SHV,bla OXA,bla GES,bla SPM,bla VIM,bla IMP,oprD2基因.聚类分析结果提示本院鲍曼不动杆菌存在院内感染传播且存在暴发性流行.结论;分离菌株对多黏菌素全部敏感,对头孢哌酮/舒巴坦敏感性相对较高,对碳青酶烯类抗生素敏感性较低.多重耐药鲍曼不动杆菌携带bla TEM,bla PER,bla VEB,bla CARB,bla GIM,bla DHA等多种超广谱β-内酰胺酶基因.临床应根据药物敏感试验结果合理应用抗生素.     

肝癌组织中HBV感染与甲基化转移酶表达的关系

目的检测肝癌患者癌组织、肝癌旁组织、肝硬化相关组织中甲基化转移酶（DNMT）的表达情况,分析HBV感染与DN-MT表达之间的关系。方法根据是否存在HBV感染,将44例标本分成两组。HBV感染相关组：血液或组织中至少可检测出一种HBV感染相关的标志物;非HBV感染相关组：血液或组织中未检测出HBV感染相关标志物。应用荧光定量PCR（FQ-PCR）检测分期及分化程度不同的肝癌患者癌组织、肝癌旁组织、肝硬化组织中DNMT基因mRNA的表达水平。不同组间DNMTs表达水平的差异采用ANOVA分析;非参数检验方法为Spearman等级相关分析。结果 HBV感染相关组中癌组织的DNMT1、3A和3B mRNA表达水平明显高于非HBV感染相关组（P=0.001、0.006、0.02）;HBV感染相关组中肝硬化组织的DNMT1、3A和3B mRNA表达水平也明显高于非HBV感染相关组（P=0.007、0.008、0.045）;即使在癌旁组织,HBV感染相关组织中DNMT1、3A mRNA表达水平明显高于非HBV感染相关组织（P=0.01、0.04）。HBV感染与DNMTs表达相关分析结果显示：HBV感染与DNMT表达相关（P=0.009、0.006、0.03）;HBV感染有关指标中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA与DNMT1表达密切相关（P=0.008、0.032、0.006）。结论（1）HBV感染相关组中癌组织及肝硬化组织的DNMT1、3A和3B mRNA表达水平明显高于非HBV感染相关组。（2）HBV感染可能刺激DNMT的表达,尤其是DNMT1、3A和3B,进而促进部分抑癌基因甲基化。     

多基因甲基化的检测在肝癌早期诊断中的价值

目的检测肝癌患者癌组织中p14、p15、p16、RB基因启动子异常甲基化状况,探讨其在肝癌诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测44例肝癌组织及其相对应41例肝硬化组织、44例癌旁组织中p14、p15、p16、RB的甲基化状况。对所得结果进行卡方检验,Fisher精准概率分析。结果肝硬化组织中p14、p15、p16、RB 4种基因的甲基化检出率分别为17.1%（7/41）、28.9%（11/41）、36.6%（15/41）和7.3%（3/41）;肝癌组织中4种基因的甲基化检出率分别为34.1%（15/44）,56.8%（25/44）,70.5%（31/44）和27.3%（12/44）。癌旁组织中检测出p16甲基化阳性产物4例,p15阳性产物1例。癌组织和肝硬化组织中4种基因的甲基化率明显高于癌旁组织（P〈0.05）;不同年龄、性别、肿瘤分化程度和临床分期的肝癌患者各个基因甲基化率没有明显差异。结论 p14、p15、p16、RB基因甲基化在肝癌中频发;多基因甲基化的联合检测在肝癌的早期诊断中有一定的价值。     

宫颈癌中MRP、GST-π的表达及意义

目的:检测多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance-associated protein,MRP)、胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)在宫颈癌(cervical cancer,CC)中的表达,探讨其在宫颈癌多药耐药(multi-drug resistance,MDR)形成中的作用和相互关系。方法:运用荧光定量PCR(flurescence quantitative-PCR,FQ-PCR)检测47例宫颈癌组织及12例正常宫颈组织中耐药基因MRP、GST-πmRNA的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果:MRP、GST-π在宫颈癌中的表达分别为0.51±0.28、0.44±0.24,正常宫颈组织中的表达分别为0.20±0.11、0.18±0.10,耐药基因在宫颈癌中的表达高于正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。MRP、GST-π表达与病人的淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。MRP与GST-π之间的表达具有统计学意义。结论:MRP、GST-π基因高表达可能在宫颈癌原发性耐药中起重要作用,检测MRP、GST-π基因的表达情况对预测宫颈癌的化疗效果、协助临床选择化疗方案可能有一定意义。     

肺癌患者PTEN基因启动子甲基化和转录表达的研究

目的 探讨张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子CpG岛甲基化状态和基因表达水平与肺癌发生的关系.方法 用甲基化特异性PCR检测PTEN启动子CpG岛甲基化状态,实时定量PCR 检测PTEN mRNA的表达水平.结果 在肺癌组织中PTEN基因启动子甲基化的频率为26.67%(12/45),在肺正常组织中未发生甲基化(χ2=7.448,P＜0.01).正常组织中PTEN mRNA全部表达,肺癌组织中表达缺失率为22.22%(10/45),且表达量低于正常肺组织(t=-14.156,P＜0.001),不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类中其表达量无显著性差异(P＞0.05);PTEN甲基化与其mRNA表达下降密切相关.结论 肺癌中PTEN基因启动子甲基化频率明显升高,其表达普遍下调或缺失,提示PTEN启动子甲基可在肺癌发生、发展中起一定作用.     

肺癌组织细胞FHIT 基因启动子甲基化和转录表达

 目的 探讨FHIT（fragile histidine triad，脆性组氨酸三联体）基因表达水平及其启动子CpG岛甲基化状态与肺癌发生发展的关系。方法 用实时定量PCR检测FHIT mRNA在肺癌组织、肺癌旁组织与去甲基化剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine、5-Aza—CdR）处理前后A549细胞株中的表达，用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测FHIT启动子CpG岛甲基化状态。结果 FHIT mRNA在肺癌旁组织中全部表达，在肺癌组织中表达缺失率为48．89％（22／45），且表达量低于正常肺组织（t=-15．851，P〈0．001），但在不同年龄和性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类的差异无显著性；FHIT基因启动子在肺癌组织中发生甲基化的频率为40％（18／45）、在癌旁组织中频率8．7％（2／23）（X^2=7．184，P〈0．01），18份启动子区甲基化的肺癌标本中，10份同时伴有mRNA表达缺失。结论 在肺癌组织中，FHIT基因启动子甲基化频率明显升高，其表达缺失或下调，提示FHIT启动子甲基化可在肺癌发生和发展中起一定作用。