中老年心血管病患者口腔麻醉前后的血压和心率变化

目的:分析中老年心血管病患者在接受拔牙术时口腔麻醉前后的血压和心率变化情况。方法:收集在北京大学人民医院口腔科进行心电监护拔牙的中老年心血管病患者共1969例。使用心电监护仪测量患者在口腔麻醉前后的血压、心率,记录并统计分析血压、心率的变化情况。结果:所有患者在口腔麻醉后未出现危及生命的严重并发症。术前患者血压、心率的第95百分位数分别为165/95 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、95次/min。在麻醉前血压≥165/95 mmHg的患者和<165/95 mmHg的患者中,分别9.9%(21/212)和0.4%(7/1757)的患者麻醉后血压≥180/110 mmHg,两者差异有统计学意义(P<0.01)。共28例(1.42%)患者麻醉后血压≥180/110 mmHg,其中17例患者休息后复测血压仍未下降,终止拔牙治疗。与麻醉前比较,麻醉后患者的平均心率显著升高[73(四分位数间距=16)次/min vs 74(四分位数间距=17)次/min,P<0.01]。结论:对于心血管病得到有效治疗且病情稳定的中老年患者,口腔麻醉安全、有效。建议中老年心血管病患者在血压<165/95 mmHg、心率<95次/min的情况下,接受全身情况综合评估后进行口腔麻醉。     

铸造陶瓷高嵌体修复根管治疗后前磨牙的3年临床效果观察

目的 评价使用铸造陶瓷高嵌体修复根管治疗后前磨牙的临床效果。方法 选择94例患者的126颗根管治疗后的前磨牙进行观察,按照牙体缺损严重程度分为轻度缺损和重度缺损,使用铸造陶瓷高嵌体或石英纤维桩加烤瓷冠修复。观察36个月,比较不同组别之间成功率和存活率的差别。结果 在36个月观察期结束时,桩核冠修复组轻度缺损前磨牙的成功率为96.3%,存活率为98.1%,重度缺损前磨牙成功率为88.5%,存活率为96.2%;高嵌体修复组轻度缺损前磨牙的成功率和存活率均为96.6%,重度缺损前磨牙成功率为94.1%,存活率为100%。不同组别之间的成功率和存活率的差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 就本次观察而言,采用铸造陶瓷高嵌体修复根管治疗后的前磨牙是非常可靠的方法。     

人、兔、大鼠脂肪基质细胞的生物学性状对比

目的：探讨在同一质量控制条件下,人、兔、大鼠来源脂肪基质细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)的体外生物学性状的异同。方法：分离培养人吸脂来源ADSCs、兔及大鼠腹股沟皮下脂肪垫来源ADSCs,体外观察3种细胞原代和传代细胞的形态及生长情况,MTT法检测细胞增殖情况。以相同密度将第2代细胞接种于24孔板,并诱导其成骨及成脂向分化。成骨诱导培养基包含100 nmol/L地塞米松、50 μmol/L抗坏血酸二磷酸酯和10 mmol/L β-甘油磷酸钠,在成骨向诱导后的第3、7、14、21天行碱性磷酸酶染色,第14、28天行茜素红染色,定量分析3种细胞体外钙沉积能力。成脂向诱导培养基包含1 μmol/L地塞米松、10 μmol/L胰岛素、200 μmol/L 吲哚美辛和0.5 mmol/L异丁基黄嘌呤,在成脂向诱导后的第7、14天行油红O染色检测细胞的成脂分化状况。结果：3种来源的脂肪均可分离培养出“成纤维细胞样”细胞,均能成脂向分化和成骨向分化,但兔ADSCs在成骨向分化时碱性磷酸酶染色呈弱阳性,无明显钙结节形成,与其他两种细胞比较,兔ADSCs的成骨向分化能力较差。结论：与人来源和大鼠来源ADSCs比较,兔皮下脂肪来源ADSCs的体外成骨能力较差,将其用于体内成骨研究时需慎重。     

rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响

目的：研究在重组人肿瘤坏死因子（recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α）刺激下人脂肪基质细胞（human adipose tissue-derived stromal cells, hADSCs）增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2,FGF-2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）分泌的变化。方法：采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为0、1、5、10、50、100 μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集上清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞上清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10 μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果：rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组,48 h时,10 μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用（P<0.01）,而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用（P<0.01）,96 h时则表现为明显的促进作用（P<0.01）。相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1（P<0.01）;hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10 μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌（P<0.01）,但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF-1（P<0.05）的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF（P<0.05）的分泌。结论：一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同。     

原代人脂肪基质细胞体内成骨能力的检测

目的：检测原代人脂肪基质细胞（human adipose-derived stromal sells,hASCs）的体内成骨能力,为应用其构建组织工程化骨奠定基础。方法：酶消化法分离原代hASCs,细胞经成骨向和成脂肪向诱导后,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和茜素红矿化染色检测其成骨向分化的能力,油红O染色检测其成脂肪向分化的能力。体内实验使用12只裸鼠,于其背部一侧皮下植入原代hASCs + 支架材料作为实验组,同一裸鼠的另一侧植入单纯支架材料作为对照组。植入4周和8周后取材,制成组织切片,进行HE染色和免疫组织化学染色观察。结果：300 mL脂肪组织中可以获得约6×10⁷个原代hASCs。体外实验证实原代hASCs具有成骨向和成脂肪向分化的潜能。HE染色可见,植入4周和8周后植入物中有类骨组织形成,免疫组织化学染色显示骨钙素、ALP和抗人核抗体呈阳性表达。结论：原代人脂肪基质细胞与支架材料构建的复合物可以在裸鼠体内成骨。     

熊去氧胆酸联合五酯胶囊、醋酸泼尼松治疗对代偿期原发性胆汁性肝硬化患者肝功能、肝纤维化与免疫功能的影响

目的 分析熊去氧胆酸(UDCA)联合五酯胶囊、醋酸泼尼松治疗对代偿期原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者肝功能、肝纤维化和免疫功能的影响。方法 纳入106例代偿期PBC患者作为研究对象,将其随机分为观察组、对照组,每组53例。对照组行UDCA单药治疗,观察组在对照组治疗基础上行五酯胶囊+醋酸泼尼松治疗,两组均持续治疗6个月。比较两组治疗后临床疗效,治疗前后肝功能、肝纤维化指标水平和免疫功能,以及治疗期间不良反应发生情况。结果 治疗6个月后,观察组治疗总有效率高于对照组(94.34%比73.58%,P<0.05);观察组血清天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、碱性磷酸酶、透明质酸酶、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG水平均低于对照组(均P<0.05)。治疗期间,观察组与对照组不良反应的发生率差异无统计学意义(9.43%比5.66%,P>0.05)。结论 UDCA联合五酯胶囊、醋酸泼尼松治疗代偿期PBC效果显著,能减轻患者肝纤维化,改善肝功能,调节免疫反应,且不良反应较少。     

体外贮存对人富血小板血浆生物学活性的影响

目的:探索各种贮存条件对人富血小板血浆(human platelet-rich plasma,hPRP)生物学活性的影响,研究hPRP释放生长因子的浓度作为评价hPRP生物学活性指标的可行性,为最终确定一整套应用hPRP的标准化方法奠定基础.方法:制备健康志愿者的hPRP,记录血小板计数.将每份hPRP释放生长因子分为3组,分别贮存在4 ℃,-20 ℃和-70 ℃,在制备后0,2,4,6,8,10 d测定3组标本中转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子AB(platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB)的浓度.同时,应用不同温度(4 ℃,-20 ℃,-70 ℃)贮存10 d的hPRP释放生长因子培养人脂肪基质细胞,以MTT法比较各组标本促进细胞增殖的生物学活性.结果:在体外贮存过程中,hPRP释放生长因子TGF-β1和PDGF-AB的浓度下降很快.低温是保存hPRP释放生长因子相对适宜的环境.当贮存10 d后,在-20 ℃和-70 ℃贮存的标本其TGF-β1的浓度分别为(238.55±36.00)μg/L和(261.12±55.10)μg/L,PDGF-AB的浓度分别为(46.03±17.67)μg/L和(50.78±18.70)μg/L,显著高于贮存在4 ℃时两种生长因子的浓度[(113.03±16.29)μg/L和(23.27±8.22)μg/L(P＜0.01)].MTT实验结果显示,不同温度贮存hPRP,其生物学活性也有显著差异,且与生长因子浓度差异基本一致.结论:hPRP释放生长因子只能在低温环境中短时间贮存,生长因子定量分析是评价hPRP生物学活性较为可靠的指标.     

缓释人富血小板血浆生长因子壳聚糖微球的制备

目的：制备载人富血小板血浆（hPRP）生长因子壳聚糖微球,观察其体外缓释效果。方法：选用离子凝胶法制备壳聚糖微球,利用微球吸附hPRP生长因子;以微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1的吸附率作为评价指标,优化微球制备配方,并观察优化配方微球体外缓释TGF-β1效果;以hPRP中PDGF-AB为对象考察优化配方微球对其吸附率、载生长因子率,验证微球吸附效果。结果：当壳聚糖溶液浓度为2.5mg/ml、10mg/ml多聚磷酸钠溶液滴加量为2.5ml时可获得优化的壳聚糖微球制备配方。优化配方微球对hPRP中主要生长因子TGF-β1、PDGF-AB吸附率分别为78.02%、58.28%,载生长因子率分别为3.70ng/mg、1.31ng/mg;载hPRP生长因子的微球体外21天缓释TGF-β1累计35.80ng,占吸附总量的85.52%。结论：本实验制备的壳聚糖微球可初步实现吸附hPRP复合生长因子,并初步达到体外缓释效果。     

抑制视网膜母细胞瘤结合蛋白2基因表达促进人脂肪基质细胞成骨向分化的研究

目的 探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白2(retinoblastoma binding protein 2,RBP-2)在人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cell,hASC)成骨向分化中的作用.方法 设计靶向RBP-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列4对,将相应寡核苷酸构建到慢病毒载体pLL 3.7中,于293T细胞进行病毒包装用于RBP-2基因敲低.采用RBP-2敲低效果好的两个siRNA序列进行病毒包装,并以非沉默siRNA的pLL 3.7质粒包装的慢病毒为对照组,感染hASC,培养第14天定量检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性并行ALP染色及茜素红矿化结节染色,检测hASC成骨向分化的差异.结果 成功构建RBP-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应慢病毒.慢病毒感染hASC后,RBP-2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制.RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组的敲低效果较好,以此两组感染hASC.成骨诱导培养第14天RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组ALP活性[(299.2±22.7)、(224.3±17.7)U/g]高于对照组[(129.9±12.9)U/g,P＜0.05],RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组茜素红及ALP染色强于对照组.结论 成功构建的RBP-2 RNA干扰慢病毒能显著抑制RBP-2表达,并促进hASC向成骨细胞分化,即RBP-2可以抑制hASC的成骨向分化.

Abstract：

Objective To explore the effect of retinoblastoma binding protein 2 (RBP-2), a histone H3K4 demethylase, on osteogenic differentiation of human adipose-derived stromal cell(hASC).Methods According to the GenBank sequence information of RBP-2, four different small interfering RNAs (siRNA) targeting RBP-2 gene were designed and the corresponding short hairpin RNAs (shRNA) were cloned into pLL 3.7 lentivirus RNA interference vector. The lentivirus with RBP-2-siRNA was packaged in 293T cells. The effective sequence was examined and selected by Western blotting and real-time PCR. The lentiviruses with efficient knockdown effects were used to infect hASC. On the 14th day after osteogenic differentiation, alkaline phosphatase (ALP) activities of hASC were quantitatively tested and at the same time, ALP staining and alizarin red staining were performed to assess the difference of osteogenic differentiation between the knockdown group and the control group. Results The recombinant lentivirus siRNA targeting RBP-2 was successfully constructed and the expression of RBP-2 mRNA and protein were dramatically suppressed by infection with RBP-2-siRNA lentivirus. On the 14th day after osteogenic induction, ALP activity of hASC in the knockdown group[(299.2 ±22.7), (224.3± 17.7) U/g]was much stronger than that in the control group[( 129.9 ± 12.9) U/g, P ＜ 0. 05]and the same result was achieved for the ALP staining and alizarin red staining. Conclusions The constructed RBP-2-siRNA lentivirus could markedly decrease the expression of RBP-2 and promote osteogenic differentiation of hASC.It indicated that RBP-2 can repress the osteogenic differentiation of hASC.