创伤弧菌诱导树突状细胞凋亡的过程观察

目的 实验观察创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)诱导鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)凋亡的过程.方法 建立小鼠树突状细胞(DC2.4株)与创伤弧菌(Vv1.1758株)混合培养模型,DAPI荧光染色分析细胞凋亡的形态特征,DNA Ladder检测凋亡细胞的DNA片段化水平分析,Annexin V FITC/PI染色分析DC2.4细胞凋亡率,分光光度法测定caspase-3、caspase-8活性,JC-1荧光标记检测线粒体膜电位(△Ψm)变化.结果 Vv1.1758株与DC2.4细胞混合培养4h时DAPI荧光染色出现典型的凋亡特征——染色质浓缩及边缘化；DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡条带；2、4、6h细胞凋亡率分别为(37.8±9.8)％、(54.3±12.7)％和(68.2±14.6)％；1、2、4h线粒体膜电位(△ψm)分别下降了7.1％、16.1％与46.7％；caspase-8活性在1.5h增高,2h达高峰(2.48±0.19) U/μg,而caspase-3活性于3h开始增高,4h达高峰(1.91±0.16) U/μg.结论 创伤弧菌诱导树突状细胞可通过线粒体膜电位下降及激活caspase-8启动子两条途径,最终活化效应因子caspase-3,促使细胞凋亡发生.     

小细胞肺癌伴骨转移的临床特点 及诊疗中的关键点

肺癌是发病率及死亡率较高的恶性肿瘤,其中骨是非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）常见的转移部位。随着肺癌精准治疗的广泛应用,部分获益患者生存期显著延长。但临床诊疗中对骨转移仍存在重视度不够,治疗及评价过程中仍然存在一些难点,因此本文通过分析骨转移相关预防和治疗,及完善骨转     

创伤弧菌感染树突状细胞的定位及对细胞骨架影响的实验研究

目的 探讨创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)感染小鼠树突状细胞株的侵袭过程、定位及其对细胞器的损伤与影响.方法建立Vv1.1758株侵入DC2.4细胞模型,电子显微镜观察不同时间段细菌定位、细胞形态及细胞器的变化过程;荧光显微镜观察细胞骨架—微丝、微管重排情况.结果 Vv1.1758株以双位点胞饮方式...     

动态监测重症监护室患者HLA—DR＋／CDl4＋变化的临床意义

目的在重症监护室（ICU）患者中动态监测外周血中人类白细胞抗原（HLA）-DR＋／CDl4＋、CDl4＋的表达,并评价HLA—DR＋／CDl4＋的临床意义。方法应用流式细胞术,测定入院后第l、3、7、14天ICU患者外周血中HLA—DR＋／CDl4＋、CDl4＋的表达,并进行脓毒症相关性器官衰竭（SOFA）评分。结果入院后动态监测第1天。两组HLA—DR＋／CDl4＋表达差异无统计学意义（t=0．86,P〉0．05）;第3天、第7天和第14天时存活组HLA—DR＋／CDl4＋表达高于死亡组,差异均有统计学意义（t分别=3．34、6．61、7．60,P均〈0．05）;第7天和第14天时存活组CDl4＋表达高于死亡组,差异均有统计学意义（t分别：3．46、2．56,P均〈0．05）;SOFA评分第7天和第14天时低于死亡组,差异均有统计学意义（t分别=2．08、2．53,P均〈0．05）。结论单核细胞活化功能表达持续低下可提示机体处于免疫抑制状态．动态监测HLA—DR＋／CDl4＋是监测患者免疫功能的早期、连续的方法。     

细菌培养法、ELFIA和PCR检测恶性肿瘤化疗期腹泻患者艰难梭菌的比较

目的比较细菌培养法、酶联荧光免疫分析技术（ELFIA）检测艰难梭菌毒素A/B、PCR检测肠毒素（tcd）A/B对恶性肿瘤化疗期腹泻患者的艰难梭菌检出率,并分析艰难梭菌感染患者的临床特征。方法选择212例行恶性肿瘤化疗的腹泻患者为研究对象,分别采用粪便艰难梭菌培养、ELFIA检测艰难梭菌毒素A/B、PCR检测tcdA/B等3种方法,比较其艰难梭菌阳性检出率,并分析艰难梭菌感染患者的临床特征。结果粪便艰难梭菌培养、ELFIA检测艰难梭菌毒素A/B、PCR检测tcdA/B的阳性检出率分别为12.7%、10.4%和31.6%;PCR的阳性检出率明显高于其他2种方法（均P＜0.05）。PCR检测艰难梭菌阳性的67例患者中男36例,女31例;年龄46~89（67.2±10.8）岁;合并心血管疾病或糖尿病等基础性疾病占86.6%;所有患者使用过广谱抗生素、质子泵抑制剂（PPIs）;粪便潜血试验阳性占95.5%;平均血浆白蛋白浓度为37.92g/L,C反应蛋白为30.25mg/L。结论PCR的阳性检出率最高。恶性肿瘤化疗患者若年龄较高、使用过广谱抗生素或PPIs和粪便潜血试验阳性合并腹泻时,应考虑艰难梭菌感染。     

miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究

目的探讨微小RNA-34b（miR-34b）促进关节软骨细胞基质退变的分子机制。方法提取10例骨关节炎（OA）患者和7例创伤性截肢者的膝关节软骨组织,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测组织标本中miR-34b表达水平。利用Targetscan基因信息软件预测得到miR-34b靶基因为Smad3,构建Smad3野生型及突变型3′非编码区（3′-UTR）-荧光素酶报告载体,利用荧光素酶报告基因实验检测miR-34b对Smad3基因野生型及突变型3′-UTR荧光素酶活性的影响。体外培养SW1353细胞,分为A、B、C和D组,分别加入等量脂质体、无义序列、miR-34b模拟物（miR-34bmimic）和miR-34b抑制物（miR-34binhibitor）。RT-qPCR法检测miR-34b、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的表达水平。结果OA软骨组织中miR-34b表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调（P＜0.05）。SW1353细胞转染后,与A组比较,C组miR-34b表达水平明显升高（P＜0.05）,D组明显降低（P＜0.05）;A组与B组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。TargetsCan软件预测miR-34b的潜在靶基因为Smad3,荧光素酶报告基因实验证实miR-34b直接靶向抑制靶基因Smad3;转染miR-34bmimic和miR-34inhibitor后,与A组比较,C组Smad3mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）,D组明显升高（P＜0.05）;A组与B组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。转染后,与A组比较,C组Ⅱ型胶原mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）,D组明显升高（P＜0.05）;C组MMP-13mRNA明显升高（P＜0.05）,D组明显降低（P＜0.05）。结论miR-34b可能通过抑制其靶基因Smad3的表达进而诱导人关节软骨细胞基质退变,从而促进OA的发生、发展。     

HIV患者外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达及临床意义

目的探讨感染人类自身免疫缺陷病毒（HIV）患者抗病毒治疗前后外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达情况及临床意义。方法选择符合HIV诊断标准、接受抗病毒治疗超过3个月的64例患者,采用高效抗逆转录病毒治疗（HARRT）,分别于治疗前、治疗3个月后采用流式细胞术检测外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞和CD4+T细胞的表达情况,并与80例健康体检者（对照组）比较。结果与对照组比较,HIV患者CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数及百分比显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。HIV患者的CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数和CD4+T细胞呈正相关（P＜0.01）;HIV患者治疗3个月后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞均有升高,与治疗前的差异均有统计学意义（均P＜0.01）。根据年龄将患者分为18~30岁、31~45岁、＞45岁,各年龄段患者治疗后CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞绝对计数分别是治疗前的4.28倍、3.00倍、2.00倍。结论 HIV患者外周血CD4+/CD25hi/CD127low调节性T细胞的表达与病毒的感染、清除有关;外源性药物可升高调节性T细胞的表达。     

ICU腹泻患者艰难梭菌感染分子流行病学特征和危险因素

正艰难梭菌是一种产芽孢专性厌氧革兰阳性杆菌,广泛分布在自然环境中,可在健康人肠道定植。当肠道微生态平衡遭到破坏时,肠道正常菌群受到抑制,艰难梭菌大量生长并释放毒素,引起艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)。CDI包括艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)和伪膜性肠炎