抗α-玉米赤霉醇单克隆抗体的研制及初步应用

目的:制备抗α-玉米赤霉醇(α-ZER)的单克隆抗体(mAb),建立对动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的检测方法。方法:结合O-羧甲基羟胺法和EDC法制备α-ZER-BSA偶联物,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。用夹心ELISA测定mAbIg亚类;按Beatty法计算亲和常数;间接ELISA法测定效价;用直接竞争ELISA检测mAb与α-ZER的同系物、己烯雌酚、19-去甲睾酮、链霉素及氯霉素等的交叉反应;绘制α-ZER标准品竞争抑制曲线,检定抗体的灵敏度。用该抗体建立的直接竞争ELISA对37份动物肝组织样品进行检测,并与HPLC检测结果比较。结果:紫外线扫描证明,α-ZER-BSA偶联成功。实验获得8株可稳定分泌抗α-ZERmAb杂交瘤细胞株,其中1株(4E5)分泌的mAb效价较高,为5.142×107,其Ig亚型为IgG1。该mAb能特异识别α-ZER及其同系物,而与其它常用兽药无交叉反应。建立了α-ZER直接竞争ELISA,从HPLC确认为阴性的37份样品中,筛出8份阳性样品。结论:利用mAb建立的直接竞争ELISA检测方法,适合动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的快速筛选。     

兔子宫内膜细胞核与雌二醇受体的结合作用

从兔子宫内膜分离和纯化细胞核,并在离体条件下观察雌二醇受体复合物与核结合作用的条件。核结合作用的适宜条件是在0℃和生理盐浓度,此时受体复合物和核表现稳定。胞液受体经25℃预温活化后能有效地与核进行结合作用,并增加与核的结合量。不同盐浓度对核结合作用有明显的影响。当KCl浓度逐步增加时,受体的结合量递减,这可能反映它们之间主要以离子键形式相互作用。在生理盐浓度条件下受体与核在0℃的结合作用表现饱和现象,随着加入受体量的增加显示两个坪区。Scatchard作图分析,表明核中存在多于一种的受体结合位点。一类数量较少(3,800位点/核),其结合亲和力较高,K_d值为3.4×10_(-10)M;另一类数量较多(48,400位点/核),其结合亲和力相对地较低,K_d值为1.49×10~(-9)M。     

动物源性食品中α-玉米赤霉醇残留检测方法的研究

α-玉米赤霉醇（α-zearalanol，α-ZER）又名右环十四酮酚，是玉米赤霉菌在生长过程中产生的次生代谢产物玉米赤霉烯酮的还原产物。作为外源性激素，低浓度的α-ZER可促进蛋白质的合成，曾作为促生长剂广泛使用。但家畜饲养中使用α-ZER，可在动物肝、肾等组织中积累，同样药物残留可以随着食物链进入人体或通过动物的排泄物污染环境，对人体健康和自然环境产生危害与长远影响。     

抗菌肽Magainin Ⅱ单克隆抗体的制备及应用

本文采用硝酸纤维素膜脾内埋植免疫,利用淋巴细胞杂交瘤技术,首次制备了抗菌肽ｍａｇａｉｎｉｎ Ⅱ的单克隆抗体,获得４株稳定分泌抗ｍａｇａｉｎｉｎ Ⅱ ｍＡｂ的杂交瘤细胞株。利用该ｍＡｂ对提取的ｍａｇａｉｎｉｎⅡ进行竞争性ＥＬＩＳＡ和免疫组化分析,均获得较满意的效果。     

动物源性食品中盐酸克仑特罗残留检测技术平台的建立及应用

目的建立动物性食品中盐酸克仑特罗残留快速检测技术，确保食品安全卫生。方法用重氮化法将小分子盐酸克仑特罗与牛血清白蛋白（BSA）偶联，将这种偶联物作为免疫抗原，免疫新西兰小白兔，获得高效价抗血清。用protein A—sepharose亲和层析柱分离纯化抗血清，再将抗体包被到96孔板上，利用直接竞争酶联免疫法，建立了β-盐酸克仑特罗酶联免疫检测试剂盒。结果该试剂盒批内变异系数（CV）为4．48％。平均回收率为89．2％。样品检测限量：尿为0．1ng/ml；组织为0．5ng/g。与肾上腺素、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应率〈1％、与沙丁胺醇交叉反应率〈35％，与常用抗生素无交叉反应。该试剂盒在37℃环境中能保存一个月以上，4℃至少保存2年以上。结论该试剂盒稳定、灵敏、特异性强，达到了国家和欧美检测标准，能满足我国市场和进出口食品检测需要。     

酶联免疫法检测动物源性食品中磺胺间二甲氧嘧啶残留

当今食品安全日益受到各方关注，其中农副产品中的农兽药残留成为最受关注的热点问题之一，欧美等许多国家对进口食品中抗生素、激素和毒素等的残留均有严格的限量要求，并以此限制农副产品的进口。在此背景下，除了国内有关部门出台相应的行政监控措施，与之相关的检测技术的建立与应用成为核心问题；因此，建立相关的检测技术平台对食品安全的有效监控以及破除国外的一些技术壁垒和扩大我国农副产品的出口意义重大。     

抗菌肽Magainin II单克隆抗体的制备及应用

本文采用硝酸纤维素膜脾内埋植免疫, 利用淋巴细胞杂交瘤技术, 首次制备了抗菌肽ｍａｇａｉｎｉｎ ＩＩ的单克隆抗体（ｍＡｂ）, 获得４ 株稳定分泌抗ｍａｇａｉｎｉｎＩＩｍＡｂ 的杂交瘤细胞株。利用该ｍＡｂ 对提取的ｍａｇａｉｎｉｎ ＩＩ进行竞争性ＥＬＩＳＡ 和免疫组化分析, 均获得较满意的效果。