罕见胸肌变异一例

<正>临床本科学生于解剖实践中,发现一具成年男性尸体的少见的胸前壁肌肉变异。现报道如下:该尸为成年男性,52岁,身长168 cm,体重80 kg,体胖。变异胸肌位置、形态如图1所示:该尸存在两块变异的胸肌(内侧变异肌、外侧变异肌),均位于左侧胸前壁,胸大肌的浅面,浅筋膜的深面。右侧未发现类似的变异。内侧变异肌(A)较小,介于左侧胸骨线与胸骨旁线之间,形态细长,上窄下宽,肌腹厚度为1.90 mm,最宽处宽度为19.61mm。其远端肌腱与左侧的腹直肌鞘愈合,肌纤维     

粉尘螨Der f5克隆表达、纯化和免疫原性鉴定

目的克隆表达粉尘螨第5组变应原(dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Der f5基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Der f5基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌Top10,经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Der f5和空质粒pET-32a同时用限制性内切酶Bam HⅠ与HindⅢ双酶切,经纯化后连接并转化至大肠埃希菌Top10。构建的重组质粒pET32a-Der f5,经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET32a-Der f5表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Der f5和pET32a-Der f5。SDS-PAGE结果表明Der f5基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Western blotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Der f5,为粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了基础。     

斑节对虾抗菌肽Penaeidin基因的克隆及其序列分析

目的 克隆斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因,构建克隆载体,测序后进行序列分析.方法 从斑节对虾采集血淋巴后提取总RNA,经反转录得到eDNA,用特异性引物进行PCR扩增得到具有双酶切位点的重组Penaeidin目的基因片段.将其连接至PMD18-T载体,转化至Top10克隆菌进行克隆并测序,用生物信息学软件进行序列分析.结果 测序结果表明斑节对虾Penaeidin抗菌肽基因全长225 bp,编码74个氨基酸.将克隆所得的斑节对虾Penaeidin基因序列与NCBI数据库中的斑节对虾Penaeidin基因(FJ686016,AF475082)同源性为100％,与其它物种虾的Penaeidin基因同源性为48％～92％.分子进化树显示斑节对虾Penaeidin抗菌肽和印度对虾Penaeidin抗菌肽聚为一大枝,而圣保罗对虾、小褐美对虾、巴西美对虾、白滨对虾Penaeidin聚为一大枝,南方滨对虾Penaeidin则自成一枝.二级结构预测表明本次克隆得到的斑节对虾Penaeidin信号肽区为β折叠片,成熟肽主要为β折叠片和转角结构.成熟肽的N端和C端亲水性较强,N端为柔性区域.其中氨基酸序列30-40和60-70表现为潜在的T细胞抗原表位.结论 成功克隆出斑节对虾Penaeidin基因,对其序列的分析结果将为后续的蛋白表达、工业化生产和理论研究奠定前期基础.