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目的 构建人细胞因子信号转导抑制分子(SOCS)3编码区(CDS)和3’非编码区(UTR)突变基因重组真核表达质粒.方法 以pEGFP-C1-SOCS3野生型表达质粒为模板,PCR方法扩增获得野生型SOCS3 CDS和3'UTR基因的序列.根据SOCS3 mRNA与miR-155预测结合靶点,分别设计3个SOCS3突变型:3' UTR-1、3'UTR-2和CDS.通过融合PCR方法将获得的SOCS3突变基因上、下游片段连接,再将融合片段定向克隆到pEGFP-C1表达载体上,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性.结果 成功构建人SOCS3 CDS和3'UTR区突变基因重组表达质粒.结论 构建的突变重组质粒将为进一步探讨人SOCS3和miR-155相互作用的研究提供实验依据. 相似文献
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