缺血后处置缓解离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的观察缺血后处置对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法复制离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型及缺血后处置模型。记录±dp/dtmax和LVEDP。用比色法检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot方法检测心脏eNOS及ERK1/2的表达,RT-PCR方法测定心脏细胞色素P4502J3(CYP2J3)mRNA表达。结果与缺血/再灌注组(IR)相比,缺血后处置组(IPo)±dp/dtmax均增高(P<0.01),而LVEDP、LDH降低(P<0.05);IR组MDA水平高于对照组(CON)及IPo组(P<0.01),SOD活性低于IPo组(P<0.01);IR组大鼠心肌eNOS及磷酸化ERK1/2的表达均高于CON组和IPo组;IPo组大鼠心脏CYP2J3 mRNA的表达明显高于CON组和IR组。结论缺血后处置可能通过提高再灌注心肌SOD活性,增加氧自由基清除,而改善缺血/再灌注引起的心功能障碍及细胞损伤;CYP2J3/EET系统有可能参与其保护作用。     

主动脉夹层急诊腔内治疗“绿色通道”建立的护理准备

总结了32例主动脉夹层腔内急诊治疗绿色通道建立的护理体会。主要护理措施包括心理护理,疼痛的观察与护理,对血压、心率的观察,保持排便通畅。认为绿色通道的建立显著简化了术前流程,有效加快了患者转运速度,对于主动脉夹层患者的规范化治疗、缩短患者入科后至手术的等待时间及抢救患者生命有着重要意义。     

pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体的构建及在大鼠心肌细胞的表达

目的克隆大鼠CYP2J3基因,与pcDNA3.1(+)真核表达质粒载体连接,转染大鼠心肌细胞检测其表达。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和重叠延伸聚合酶链式反应(OE-PCR)的方法扩增大鼠CYP2J3基因,与双酶切的pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体。转染大鼠心肌细胞,用RT-PCR的方法鉴定其在大鼠心肌细胞的表达。结果得到CYP2J3基因全长序列和真核表达载体pcDNA3.1(+)-CYP2J3。RT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)-CYP2J3后的大鼠心肌细胞CYP2J3基因有稳定表达。结论克隆大鼠CYP2J3基因、pcDNA3.1(+)-CYP2J3真核表达载体构建及在大鼠心肌细胞的表达均获成功,为进一步研究CYP2J3基因在细胞中的功能奠定了基础。     

硫化氢对离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤的影响及机制初探

目的观察内源性CSE/H2S通路的改变以及给予H2S供体对缺血/再灌注心脏的影响,探讨该通路与心脏缺血/再灌注损伤的关系及作用机制。方法采用Langendorff离体灌流装置、通过停灌30min/复灌30min方式造成Wistar大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型;采用外源性NaHS(40μmol.L-1)分别在停灌30min前(SIR)与停灌30min后处理(IRS)对缺血/再灌注心脏的影响。记录心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率(+dp/dtmax)、舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-dp/dtmax)及左室内压差(LVP=左室收缩压-左室舒张压)。采用比色法检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌MDA及SOD;采用比色法检测心肌胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性;采用RT-PCR方法测定心肌组织CSEmRNA表达。结果与缺血/再灌注组(I/R)30min相比,SIR组及IRS组±dp/dtmax、LVP均增高,LDH降低;I/R组MDA水平高于对照组(CON)、SIR组及IRS组(P<0.05,P<0.01);IR组SOD活性低于SIR组及IRS组(P<0.05),但与CON组差别无显著性;I/R组大鼠心肌CSE活性低于CON组(P<0.05);而大鼠心肌CSEmRNA的表达与CON组差异无显著性。结论在缺血前后给予外源性NaHS均可改善因再灌注损伤引起的心肌收缩及舒张功能障碍;其作用机制可能是通过提高心肌SOD活性,增加氧自由基清除而拮抗缺血/再灌注引起的心功能及细胞膜损伤;心肌缺血/再灌注时内源性CSE活性抑制可能与心功能障碍及细胞损伤有关。     

缺氧后处置心肌细胞CYP2J3/EETs变化及PPOH对其的影响

目的探讨缺氧后处置心肌细胞内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环二十碳三烯酸系统(CYP2J3/EETs)变化及细胞色素氧化酶抑制剂PPOH对其的影响。方法取Wistar乳鼠(12～24 h)心脏做原代心肌细胞培养并分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处置组、二甲基亚砜组、PPOH抑制剂组,分别行相应处理后。MTT法检测心肌细胞活力,Western Blotting法检测CYP2J3蛋白表达,HPLC法检测心肌细胞培养液中11,12-EETs浓度。结果心肌细胞活力、CYP2J3蛋白表达、11,12-EETs浓度,缺氧/复氧组明显低于对照组,缺氧后处置组明显高于缺氧/复氧组,PPOH组心肌细胞活力、CYP2J3蛋白表达、11,12-EETs浓度比缺氧后处置组明显下降。结论缺氧后处置可通过升高CYP2J3/EETs缓解心肌缺氧/复氧损伤。PPOH可抑制缺氧后处置中CYP2J3升高,从而减弱缺氧后处置的心肌保护作用。     

CYP2J3基因经静脉转染大鼠的组织分布

目的 观察CYP2J3基因转染后大鼠心、肝、肺、肾及胸主动脉CYP2J3基因表达和11，12-EET的含量。方法 经大鼠阴茎背静脉快速注射质粒复制大鼠转基因模型。将36只雄性 Wistar 大鼠（280~300g）随机分为空白对照组、pcDNA3.1质粒和pcDNA3.1- CYP2J3重组质粒注射组，分别于14和28d取材。用半定量RT-PCR法检测CYP2J3 mRNA表达，高效液相色谱法测定11，12-EET含量。结果 pcDNA3.1-CYP2J3重组质粒组28d时各组织CYP2J3基因表达强于对照组和pcDNA3.1质粒组；各组织11，12－EET 含量增高。（P < 0.05）结论 以pcDNA3.1质粒作为非病毒性载体，可增强目的基因CYP2J3在心、肺、肝、肾及胸主动脉的表达。