肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR载体构建及表达

目的为了提高作用靶向性，将导向肽NGR与肿瘤抑素L肽的C端连接，获得L肽及其衍生物T广NGR的载体。方法通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素L肽及T7-NGR的克隆载体pMD-T7和pMD-T7N，经酶切和测序鉴定后，将2种载体分别双酶切，经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后，切下目的片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定，转化感受态EcoliBL21（DE3），IPTG诱导表达。结果酶切和测序鉴定结果正确，分别成功构建表达载体pET-T7和pET-T，N，经IPTG诱导，完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示．当IPTG浓度为1mmol/L时．25℃诱导8h．分别获得了T7肽和T7-NGR的表达产物。结论已经成功构建T，肽和T7-NGR的表达载体．获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础。     

酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析中关键试剂的研究

目的研制成镧系元素发光时间分辨荧光分析中的关键试剂。方法用过碘酸钠法研制成辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，用戊二醛二步法研制成碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用化学合成法研制成5-氟水杨酸磷酸酯等关键试剂。结果HRP标记SA总蛋白回收率为29．8％，纯度为97％。ALP标记SA的总蛋白回收率为56％，纯度为98％，分子量为159kD，其中ALP分子量为94kD，生物活性良好。5-氟水杨酸磷酸酯，测得熔点为157℃～159℃、纯度为99．43％-100％、红外吸收光谱、紫外吸收光谱及核磁共振谱等特性鉴定与文献记载一致。结论研制成的各种关键试剂质量良好，已成功地应用于科研中。     

肿瘤新生血管生成抑制剂-肿瘤抑素的研究进展

肿瘤的生长和转移都离不开新生血管的生成，肿瘤抑素是一种来源于基膜胶原Ⅳ（ColⅣ）的蛋白片断，具有抗肿瘤新生血管生成和抑制肿瘤细胞增殖的双重活性，能特异性地抑制肿瘤血管内皮细胞蛋白的合成。对其进一步的研究证实肿瘤抑素是一种内源性的病理血管生成的抑制剂，具有潜在的药用价值。本文主要概述肿瘤抑素的来源、结构和分布，活性研究，作用机制及其与基质金属蛋白酶（MMP）的关系等最新研究进展和应用前景。     

核酸杂交的二次酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

目的建立一种超灵敏的用于核酸杂交分析的方法。方法通过二次酶放大、PCR扩增、Tb螯合物和时间分辨测量技术,测定前列腺特异抗原（PSA）DNA。结果靶PSADNA测定的标准曲线线性范围大于两个数量级;灵敏度为10pmol/L（0.5fmol/孔）;当靶PSADNA为10、30和60pmol/L时,准确度和精密度分别为77%～95%和12.9%～15.3%。结论本法是一种超灵敏的、简捷和快速的全新分析方法,有很好的应用前景。     

人tumstatin 基因的克隆表达及其鉴定

 目的 重组表达人tumstatin，为人tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。方法 提取HEK293细胞总RNA，通过RT-PCR扩增人tumstatin基因，导入pMD19-T，测序，然后亚克隆至pET28a，IPTG诱导表达，产物进行SDS-PAGE分析和Westernblot鉴定。结果 提取的总RNA经电泳，有清晰的28S和18S两条带。RT-PCR扩增产物长度与理论值750bp相一致。测序证实tumstatin基因正确插入载体中。重组人tumstatin在大肠杆菌中高效表达，表达量约占菌体总蛋白量的30％。Westernblot证实所表达蛋白为目的蛋白。结论 重组人tumstatin蛋白在大肠杆菌中高效表达，为进一步的tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。